β-淀粉样蛋白对大鼠海马星形胶质细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位表达的影响

目的 探讨Wistar大鼠海马星形胶质细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）亚单位在β-淀粉样蛋白（Aβ）25~35毒性作用下的表达变化特点。方法 大鼠海马原代培养细胞,加Aβ _25~35（10μmol/L）分别作用1h、24h后,应用免疫荧光方法检测对照组和加药组中NR1、NR2A和NR2B的表达情况（n =10）。 结果 对照组海马星形胶质细胞表达NR1、NR2A和NR2B,阳性点状颗粒主要分布在细胞胞体和突起上,在胞体部位分布密集,在细胞突起则散在分布。经Aβ _25~35作用后,三者表达均显著增强（ P <0．05)。Aβ1h组和24h组相比,NR1无显著变化,NR2A、NR2B的表达随作用时间增加显著增强（　P　<0．05)。结论　正常状态下海马星形胶质细胞可表达NMDAR亚单位（NR1、NR2A和NR2B);Aβ _25~35作用会引起NMDAR各亚单位表达显著增强,NR1的表达变化与NR2A和NR2B的变化表现出不一致性。     

ABCE1基因在人肾小球系膜细胞中的表达

ATP结合盒转运子E1(ATP-binding cassette transporter E1,ABCE1)属ATP结合盒转运子基因亚家族成员之一,其表达定位于细胞质及线粒体.该基因在人体各组织器官表达具有特异性.     

肺炎结合疫苗PPS14-OVA、PPS14-C3d在小鼠脾脏的定位及补体对定位的影响

目的检测血清型14型肺炎球菌荚膜多糖(PPS14)结合疫苗PPS14-OVA(卵清蛋白)、PPS14-C3d(补体)免疫小鼠后在脾脏细胞中的定位,以及补体对其定位的影响。方法PPS14-OVA、PPS14-C3d经皮下或静脉注射,免疫正常小鼠和眼镜蛇毒因子(CVF)预处理的小鼠,应用免疫荧光技术检测脾脏冰冻切片中的PPS14及各种免疫细胞。结果正常小鼠免疫PPS14-OVA后,PPS14-OVA定位于脾脏;1 h后与脾脏边缘区B细胞有结合;2 h后出现在淋巴滤泡中;6 h后全部转移至淋巴滤泡,并与滤泡B细胞和树突状细胞结合,与巨噬细胞和T细胞没有结合。而CVF预处理的小鼠,PPS14-OVA不定位于脾脏。PPS14-C3d在脾脏中的定位不受CVF处理的影响。结论 PPS14-OVA在脾脏中的定位需要补体的介导,而PPS14-C3d不需要。     

TLR2-PI3K/Akt信号通路在肺炎衣原体感染诱导血管平滑肌细胞迁移中的作用

<正>目的:观察肺炎衣原体(C.pn)感染对血管平滑肌细胞(VSMC)迁移的影响,探讨TLR2-PI3K/Akt信号转导通路在C.pn感染诱导VSMC迁移中的作用。方法:组织贴块法行大鼠原代VSMC培养;免疫荧光法确认C.pn成功感染VSMC;Wound-healing assay和Transwell assay观察C.pn感染对VSMC迁移能力的     

依达拉奉干预永久性脑缺血大鼠神经干细胞增殖及分化

目的 探讨依达拉奉对永久性脑缺血大鼠脑内内源性神经干细胞的影响.方法 采用电凝法建立大鼠永久性脑缺血模型.将30只SD大鼠随机分为假手术组、脑损伤组与依达拉奉组,每组10只,模型制作成功后6 h,1.5 g/L依达拉奉组腹腔注射依达拉奉(10 ml/kg),每天1次,假手术组与脑缺血组腹腔注射等体积的生理盐水,连续注射...     

大学生电脑游戏成瘾问卷的编制

目的编制大学生电脑游戏成瘾问卷。方法通过对546名大学生调查数据的探索性因素分析和242名大学生数据的验证性因素分析,检验大学生电脑游戏成瘾问卷的信度和效度。结果大学生电脑游戏成瘾问卷包含24个项目,可聚合为时间管理、情绪体验、生活冲突、牺牲社交和戒断困难五个因子。24个项目的载荷范围是0.513-0.838,五个因子解释了总方差的59.62%。量表各维度的内部一致性系数为0.78-0.84,分半信度为0.68-0.91,重测信度为0.79-0.88。验证性因素分析结果显示问卷的RMSEA小于0.08,CFI、RFE、IFI、NFI、NNFI都在0.90以上。结论该问卷的因素结构清晰,信度和效度较好。     

游离雌三醇时间分辨免疫荧光分析法的建立

目的建立游离雌三醇（uE3）时间分辨免疫荧光分析（TRFIA）方法。方法采用竞争抑制一步法建立检测uE3的TRFIA分析方法，并对该试剂的各项性能指标进行评价。结果该方法的灵敏度为0．14nmol／L，线性范围为0．14—120nmol／L，回收率为97．7％。分析内和分析间变异系数分别为1．6％-4．1％和4．4％-8．8％。与E2、孕酮和睾酮的交叉反应率分别为0．24％、0．36％和0．40％。149份血样用本试剂与进口的同类试剂同时检测，其相关系数为0．925。结论试剂盒各项指标均达到临床检测要求，可替代国外同类产品试剂盒。     

神经再生素促大鼠海马神经元生长的研究

目的 研究牛膝提取物神经再生素(NRF)对体外培养的大鼠海马神经元生长的促进作用及其对生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的影响.方法 以体外原代培养的胎鼠海马神经元为研究模型,通过相差显微镜采用Scion软件测量不同浓度NRF(0.25mg/L、0.5mg/L、1mg/L)、不同作用时间(6h、12h、24h)对海马神经元神经突起生长的影响;通过实时荧光定量PER观察NRF不同浓度(0.25mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)及不同作用时间(6h、12h、24h)对海马神经元GAP-43基因表达的影响;采用免疫荧光细胞化学法和Western blotting,观察不同浓度NRF(0.25mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L)加药24h后,对海马神经元GAP-43表达的影响.结果 NRF可有效地促进海马神经元的生长,加药后24h作用浓度为1mg/L时,作用最强;实时荧光定量RT-PCR、免疫荧光细胞化学法和Western blotting的结果提示,NRF能增加体外培养的海马神经元GAP-43的表达,浓度为1.0mg/L时,作用最佳.结论 NRF能促进体外培养的海马神经元神经突起的生长和GAP-43基因的表达,表明NRF对海马神经元具有神经营养作用.     

谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白基因敲入小鼠三叉神经尾侧亚核内GFP阳性神经元的分布及与小白蛋白的共存

目的观察谷氨酸脱羧酶67-绿色荧光蛋白（GAD67-GFP）基因敲入小鼠三叉神经尾侧亚核（Vc）浅层内，表达GFP的GABA能神经元的分布及其与小白蛋白（PV）的共存。方法分别运用原位分子杂交与免疫组织化学相结合；GFP与神经元标记物——神经元核蛋白（NeuN）或PV免疫荧光染色相结合的双重标记方法，在光学显微镜和激光共聚焦显微镜下进行观察。结果1．Vc浅层内90％以上的GFP阳性神经元同时表达GAD67 mRNA，而几乎所有表达GAD67 mRNA的阳性神经元都呈GFP阳性；2．GFP阳性神经元主要分布于Ｖc的Ⅰ－Ⅱ层内，细胞较小，尤其在Ⅱ层内可见大量密集分布的GFP阳性细胞和突起。GFP阳性神经元分别占Ⅰ、Ⅱ层内NeuN阳性神经元总数的19．4％和24．3％；3．GFP／PV双标神经元主要分布于Ｖc的Ⅰ－Ⅱ层，这些双标神经元大约占PV阳性神经元的62．4％，占GFP阳性神经元的12．8％。结论在Ｖc表达GFP的GABA能神经元主要密集分布于与外周伤害性信息传递关系密切的板层内，且大部分PV样阳性神经元属于GABA能神经元。     

GST-snail融合蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备

目的制备snail多克隆抗体,为深入研究其功能和探讨其与肿瘤等疾病的相关性提供工具。方法PCR扩增编码人snail 264个氨基酸的cDNA全长片段,DNA重组入原核表达质粒pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21菌株,异丙基-β—D-硫代半糖苷（IPTG）诱导表达GST／Snail融合蛋白。经电泳纯化的融合蛋白免疫新西兰白兔,制备抗血清。通过ELISA、免疫荧光和免疫印迹法鉴定血清特异性和效价。结果成功构建了pGEX-4T-1／snail原核表达载体,转化BL21后可高效表达融合蛋白GST—snail,免疫产生的snail多抗可特异检测snail真核表达载体转染COS-7细胞后snail的表达及定位情况。结论获得了效价和特异性都良好的snail抗体,适合对snail的检测应用。