生物化学和分子生物学检验与临床

Ⅳ型胶原间接免疫荧光检测在诊断不同遗传型Aiport综合征中的应用,血清透明质酸、层粘连蛋白、Ⅲ型期前胶原含量与慢性乙型肝炎病理变化的相关性研究,血清β-胶原特殊序列的测定及初步临床应用,偏头痛患儿发作间期血浆P物质、降钙素基因相关肽及ACE活性水平变化及其相关性研究。     

Bmil基因在小鼠睾丸组织中的表达定位

精原干细胞能通过自增殖不断地自我更新,形成不同发育阶段的生精细胞并维持其正常数目。Broil基因属于Polycomb家族,最近发现它对造血干细胞、白血病干细胞,神经干细胞等自增殖有调控作用。我们用自制的BM11多克隆抗体,通过免疫荧光技术定位该基因在小鼠睾丸组织中的表达,并用FISH做进一步验证,为进一步揭示精原干细胞自增殖的分子机制奠定基础。首先,利用RT-PCR技术克隆了成年小鼠睾丸组织中Bmil基因,     

本体觉传入纤维在小鼠脊髓内的发育变化

目的观察本体觉传入纤维在小鼠脊髓内投射和终止的发育变化。方法采用小牛白蛋白（PV）免疫组织化学染色特异标记本体觉传入纤维,用免疫荧光单标记和双标记方法观察本体觉传入纤维在脊髓内的生长模式以及与运动神经元的关系。染色后的切片用激光共聚焦显微镜进行观察。结果PV样免疫阳性（LI）本体觉纤维最早于胚胎（E）14d出现在后索,E15时进入脊髓灰质。E16时,已有较多的PV—LI纤维到达中间带灰质和前角（VH）。此后,随着发育阶段的增长,脊髓VH内PV—LI本体觉纤维和终末的数量和密度逐渐增加,并在生后早期P0-P7达到最高水平。P14后,上述本体觉纤维和终末的数量逐渐减少。本体觉传入纤维的终末在E17时开始与脊髓VH运动神经元形成密切的接触。结论本体觉传入纤维在脊髓内的定位模式形成于小鼠胚胎后期和生后早期,本研究结果为深入理解脊髓反射运动环路的发育特点提供了依据。     

狂犬病病毒滴度直接免疫荧光检测的优化及验证

目的对狂犬病病毒滴度直接免疫荧光检测(direct immunofluorescence assay, DFA)进行优化及验证, 使其更好地应用于规模化生产中的质量控制。方法采用不同的病毒培养温度(35、37 ℃)、培养时间(24、48 h)、接种细胞(Vero细胞、BSR细胞)以及稀释倍数(3、5、10倍)对狂犬病病毒滴度进行DFA, 并对病毒滴度结果进行统计学分析。对优化方法进行重复性和中间精密度验证, 并对多个批次样品采用小鼠颅内滴定法和DFA进行滴度检测, 分析其相关性。结果优化的条件为37 ℃培养24 h、接种BSR细胞、5倍系列稀释病毒。DFA重复性和中间精密度变异系数均小于2%。16份样品的小鼠颅内滴定法与DFA滴度显著相关, 相关系数为0.952, 且P值小于0.000 1。结论优化后的DFA快速、准确, 且与小鼠颅内滴定法一致性较好, 能够替代后者作为狂犬病疫苗规模化生产的质量控制方法。     

免疫组化、Western blot蛋白印迹和免疫荧光染色观察磷酸鞘氨醇受体2大鼠海马中的表达变化

目的观察磷酸鞘氨醇受体2(S1PR2)基因在颞叶癫痫大鼠海马中的表达变化。方法将72只健康雄性Wistar大鼠随机均分为实验组(36例)和对照组(36例)。实验组使用氯化锂—匹罗卡品进行颞叶癫痫诱导制模,成功后持续大发作1h终止待检,对照组以相同剂量生理盐水注射,然后以进行免疫组化、Western blot印迹和免疫荧光染色检测并进行统计学分析。结果免疫组化检测结果显示,两组1d、3d、7d、28d、56d海马S1PR2阳性细胞计数相比有统计学意义(P<0.05);Western blot检测结果显示,两组3d、7d、28d、56d海马S1PR2蛋白表达水平相比有统计学意义(P<0.05);免疫荧光染色检测显示,S1PR2蛋白表达阳性为红色,星形胶质细胞为绿色,细胞核为蓝色。结论颞叶癫痫大鼠海马中S1PR2表达水平显著下降,说明颞叶癫痫发病机制可能与神经元功能、星形胶质细胞增生受到S1PR2影响有关。     

白萝卜提取物促胃动力作用中Cajal间质细胞与P物质的变化

目的探讨白萝卜提取物（raphanus sativus 1 extract，Ecr）通过Cajal间质细胞促胃肠动力作用机制。方法40只SD大鼠随机分为A（Ecr）组、B（0．9％氯化钠对照）组分别灌服等体积Ecr和0．9％氯化钠，1h后用双重免疫荧光组织化学标记的方法观察胃电起搏区Cajal间质细胞（interstitial cells of Cajal，ICC）与P物质（SP）阳性神经及产物表达的变化。结果肌间神经丛中ICC与SP阳性神经呈网络样分布，二者紧密毗邻；肌间神经丛及肌层内与ICC结合的SP阳性神经产物表达明显增加（P〈0．01）。结论白萝卜提取物的促胃肠动力作用可能与胃体ICC上结合的SP阳性神经产物表达增高有密切关系。     

ABCE1基因在人肾小球系膜细胞中的表达

ATP结合盒转运子E1(ATP-binding cassette transporter E1,ABCE1)属ATP结合盒转运子基因亚家族成员之一,其表达定位于细胞质及线粒体.该基因在人体各组织器官表达具有特异性.     

肺炎结合疫苗PPS14-OVA、PPS14-C3d在小鼠脾脏的定位及补体对定位的影响

目的检测血清型14型肺炎球菌荚膜多糖(PPS14)结合疫苗PPS14-OVA(卵清蛋白)、PPS14-C3d(补体)免疫小鼠后在脾脏细胞中的定位,以及补体对其定位的影响。方法PPS14-OVA、PPS14-C3d经皮下或静脉注射,免疫正常小鼠和眼镜蛇毒因子(CVF)预处理的小鼠,应用免疫荧光技术检测脾脏冰冻切片中的PPS14及各种免疫细胞。结果正常小鼠免疫PPS14-OVA后,PPS14-OVA定位于脾脏;1 h后与脾脏边缘区B细胞有结合;2 h后出现在淋巴滤泡中;6 h后全部转移至淋巴滤泡,并与滤泡B细胞和树突状细胞结合,与巨噬细胞和T细胞没有结合。而CVF预处理的小鼠,PPS14-OVA不定位于脾脏。PPS14-C3d在脾脏中的定位不受CVF处理的影响。结论 PPS14-OVA在脾脏中的定位需要补体的介导,而PPS14-C3d不需要。     

依达拉奉干预永久性脑缺血大鼠神经干细胞增殖及分化

目的 探讨依达拉奉对永久性脑缺血大鼠脑内内源性神经干细胞的影响.方法 采用电凝法建立大鼠永久性脑缺血模型.将30只SD大鼠随机分为假手术组、脑损伤组与依达拉奉组,每组10只,模型制作成功后6 h,1.5 g/L依达拉奉组腹腔注射依达拉奉(10 ml/kg),每天1次,假手术组与脑缺血组腹腔注射等体积的生理盐水,连续注射...     

β-淀粉样蛋白对大鼠海马星形胶质细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位表达的影响

目的 探讨Wistar大鼠海马星形胶质细胞N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）亚单位在β-淀粉样蛋白（Aβ）25~35毒性作用下的表达变化特点。方法 大鼠海马原代培养细胞,加Aβ _25~35（10μmol/L）分别作用1h、24h后,应用免疫荧光方法检测对照组和加药组中NR1、NR2A和NR2B的表达情况（n =10）。 结果 对照组海马星形胶质细胞表达NR1、NR2A和NR2B,阳性点状颗粒主要分布在细胞胞体和突起上,在胞体部位分布密集,在细胞突起则散在分布。经Aβ _25~35作用后,三者表达均显著增强（ P <0．05)。Aβ1h组和24h组相比,NR1无显著变化,NR2A、NR2B的表达随作用时间增加显著增强（　P　<0．05)。结论　正常状态下海马星形胶质细胞可表达NMDAR亚单位（NR1、NR2A和NR2B);Aβ _25~35作用会引起NMDAR各亚单位表达显著增强,NR1的表达变化与NR2A和NR2B的变化表现出不一致性。