血管紧张素Ⅰ转换酶基因多态性与2型糖尿病心血管并发症关联研究

背景糖尿病晚期并发症的发生与遗传因素有关.有报道血管紧张素Ⅰ转换酶(angiotensin Ⅰ-converting enzyme,ACE)基因是糖尿病心血管并发症发生的风险因子.目的探讨ACE基因多态性与2型糖尿病心血管并发症之间的相关性.设计以2型糖尿病患者为研究对象的病例-对照研究.单位一所医学院的生物科学系普通生物学教研室.对象本研究于2001-02/2002-06在华北煤炭医学院分子生物学实验室完成.研究对象均为本医学院附属医院门诊及住院2型糖尿病患者,根据是否合并心肌梗死分为两组.心肌梗死患者组68例,其中男29例,女39例,年龄(65±3)岁;非心肌梗死组190例,其中男161例,女29例,年龄(60±1)岁.纳入标准均符合1985年WHO 2型糖尿病诊断标准,心肌梗死诊断根据MRI确诊;排除标准资料不完整或不合作者.方法按常规酚/氯仿法提取基因组DNA,扩增产物用20 mL/L琼脂糖凝胶电泳分析,溴化乙锭染色观察结果.对不同患者组等位基因和基因型频率进行比较.主要观察指标两组患者ACE基因的等位基因和基因型分布比较.结果2型糖尿病心肌梗死患者(64.7%)与非心肌梗死患者(55.0%)比较,DD纯合子频率显著增高(41.2%vs33.2%),差异具有显著性意义(x2=0.833,P＜0.05),D等位基因频率也显著增高,差异也具有显著性意义(x2=3.8491,P＜0.05).结论D等位基因和DD基因型是2型糖尿病心肌梗死发生的风险因子,这些指标的监测为糖尿病心肌梗死患者的二级康复预防和提高远期生活质量提供理论参考.     

甲状腺功能亢进病人的个性测定分析

为探讨甲状腺功能亢进病人A型性格的状况，寻找疾病诱发因素的高危因子，采用全国心身医学协作研究组A型性格问卷，对已确诊的60例甲亢病人进行调查，并与正常人作对照，结果：甲亢病人中A型性格者显著高于对照组，且急躁和紧迫感得分亦高于对照组，提示：甲亢病人中A型性格者较多，急躁和时间感可能是应激因素中重要的危险因素。     

自拟益气逐瘀汤辅助椎间盘镜治疗青壮年破裂型腰椎间盘突出症疗效及对外周血免疫球蛋白含量、血小板参数影响

目的观察自拟益气逐瘀汤辅助椎间盘镜治疗青壮年破裂型腰椎间盘突出症的疗效及对外周血免疫球蛋白含量、血小板参数的影响。方法将98例青壮年破裂型腰椎间盘突出症患者随机分为观察组49例及对照组49例,对照组行经后路椎间盘镜(MED)治疗,观察组在对照组基础上术后给予自拟益气逐瘀汤辅助治疗,6周为1个疗程,共治疗2个疗程。观察2组治疗前后主要临床症状体征变化情况和2组治疗前及治疗1个疗程、2个疗程腰椎功能、下肢功能及外周血免疫球蛋白含量、血小板参数变化情况,统计2组临床疗效。结果 2组治疗后下肢痛或麻木、直腿抬高实验(+)、步行能力减弱、踝反射减弱发生率显著降低(P均<0.05),且观察组上述症状体征改善情况明显优于对照组(P均<0.05);2组治疗1个疗程、2个疗程后JOA腰椎功能评分、下肢功能Fugl-Meyer评分均明显高于治疗前(P均<0.05),血清IgG、IgM水平和血小板计数、血小板压积、平均血小板体积及血小板分布宽度均明显低于治疗前(P均<0.05),且观察组上述指标改善情况均明显优于对照组(P均<0.05);观察组治疗1个疗程、2个疗程的有效率均显著高于对照组(P均<0.05)。结论自拟益气逐瘀汤辅助椎间盘镜治疗青壮年破裂型腰椎间盘突出症疗效好,可明显改善腰椎功能及下肢功能,降低外周血免疫球蛋白含量、血小板活性及血液黏度。     

野马追倍半萜内酯精制工艺的优化

目的优化野马追Eupatorium lindleyanum DC.倍半萜内酯精制工艺。方法以野马追内酯A、B含有量为指标,动态吸附及解吸附试验优化大孔树脂吸附工艺;以夹带剂(无水乙醇)用量、萃取压力、萃取温度为影响因素,倍半萜内酯提取率为评价指标,响应面法优化CO_2超临界萃取工艺。结果最优精制工艺条件为采用AB-8型大孔树脂,提取液以40 m L/min体积流量通过树脂柱,将吸附后的树脂依次用水、20%、40%、60%、80%乙醇各3 BV洗脱,收集60%~80%部分;最优CO_2超临界萃取工艺条件为夹带剂用量30%,萃取压力35 MPa,萃取温度45℃,萃取时间2 h,CO_2体积流量40 m L/min,野马追内酯A、B总含有量由0.56%增加到39.07%。结论该方法简单可行,可用于精制野马追倍半萜内酯。     

基于UPLC-MS/MS-模式识别技术的丹灯通脑软胶囊中多种活性成分定量研究

目的建立同时测定丹灯通脑软胶囊中9种活性成分(丹参素、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮IIA、熊果酸)量的UPLC-MS/MS分析方法,并采用模式识别技术综合评价其药物质量。方法采用UPLC-MS/MS分析检测,色谱柱为Acquity UPLC?BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.8μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为0.2 m L/min,ESI正、负离子同时采集,除熊果酸为选择离子监测(SIR)外,其余8种成分均为多反应监测(MRM);多批次丹灯通脑软胶囊定量测定结果采用多元数据处理软件SIMCA 14.0进行模式识别分析,并评价其质量。结果在优化的色谱质谱条件下,丹参素、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参酮I、隐丹参酮、丹参酮IIA、熊果酸分别在100.0~1 000.0、1.0~10.0、8.0~80.0、120.0~1 200.0、15.0~150.0、40.0~400.0、10.0~100.0、10.0~100.0、1.2~12.0μg/m L线性关系良好(r≥0.999 6);加样回收率在98%~101%,RSD小于3%;10批丹灯通脑软胶囊中各成分的平均量分别为(4.854±0.314)、(0.063±0.005)、(0.764±0.070)、(12.937±0.648)、(1.954±0.178)、(3.623±0.221)、(0.720±0.062)、(1.437±0.116)、(0.073±0.007)mg/g;定量测定数据经SIMCA 14.0软件进行分析,分析结果表明10批丹灯通脑软胶囊质量偏差均在2 SD(标准偏差,standard deviation,SD)范围内。结论建立的UPLC-MS/MS定量分析方法简便、灵敏度高且准确性好,可用于丹灯通脑软胶囊中多种主要活性成分的快速测定;定量测定结果表明不同批次丹灯通脑软胶囊总体质量较为稳定,结果分析使用的多元数据模式识别方法可从整体上综合评价药物质量,为丹灯通脑软胶囊的质量控制研究提供新的科学依据和数据处理方法。     

青叶胆化学成分的UPLC-ESI-Q-TOF-MS分析

目的运用超高效液相色谱-电喷雾四级杆飞行时间质谱(UPLC-ESI-Q-TOF-MS)技术对中药青叶胆Swertia mileensis的主要化学成分进行定性分析。方法采用ACQUITY HSS T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm),用0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱,体积流量为0.4 m L/min,质谱使用ESI离子源,正负离子模式下采集数据,运用Masslynx4.1软件并结合Sci Finder数据库、獐牙菜属相关文献以及对照品信息进行数据分析。结果从青叶胆中鉴定出化学成分28个,包括7个环烯醚萜类、14个酮类、3个黄酮类、2个三萜类以及2个酚类。其中断马钱子苷半缩醛内酯、8-O-β-D-吡喃木糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖-1,7-二羟基-3-甲氧基酮、3-氧去甲双酮苷和sweriyunnanlactone A为首次从该植物中发现。结论 UPLC-ESI-Q-TOF-MS技术能够快速准确地鉴定青叶胆中的化学成分,为其质量控制和药效物质基础研究提供一种新的研究策略。     

��ܺ���Գɷֶ���������MDCK-MDR1ϸ���Ͽ�Ĥת�˵�Ӱ�켰����

??OBJECTIVE To study the influence and mechanism of bioactive ingredients of Ligusticum chuanxiong Hort. on the transport of gastrodin based on cell culture model in vitro. METHODS Cell toxicity of gastrodin, ligustilide, senkyunolide ?? and senkyunolide A were detected by MTT assay. The transport mechanism of gastrodin and the influence of ligustilide, senkyunolide ?? and senkyunolide A on the transport of gastrodin were studied in MDCK-MDR1 monolayer cells. The changed expressions of P-gp caused by ligustilide, senkyunolide ?? and senkyunolide A were analyzed by Western blotting.RESULTS Gastrodin showed relatively poor absorption in MDCK-MDR1 cells for its apparent permeability coefficients were less than 1??10^-6 cm??s^-1. P-gp inhibitor made the P_app(B??A)/P_app(A??B) of gastrodin reduced from 1.29 to 0.79, which indicated that the transport of gastrodin was influenced by P-gp. In the presence of ligustilide(30 ??g??mL^-1) or senkyunolide ??(120 ??g??mL^-1), the P_app(A??B) of gastrodin in MDCK-MDR1 were significantly increased(P<0.01). In the presence of senkyunolide A(120 ??g??mL^-1), the P_app(A??B) of gastrodin in MDCK-MDR1 were markedly increased(P<0.05). High, medium and low dose of ligustilide, senkyunolide A and senkyunolide ?? could significantly inhibit the expression of P-gp protein.CONCLUSION The results indicate that the transport mechanism of gastrodin might be passive diffusion as the dominating process with the active transportation mediated mechanism involved. Ligustilide, senkyunolide A and senkyunolide ?? increase the transport of gastrodin attribute to down-regulate P-gp expression.     

络风宁1号方治疗冠心病不稳定性心绞痛临床疗效及其机制探讨

目的观察络风宁1号方治疗冠心病不稳定性心绞痛的临床疗效及对相关炎症因子的影响。方法将不稳定性心绞痛患者57例,随机分为对照组30例和治疗组27例。对照组采用常规治疗:拜阿司匹林100 mg口服,每日1次;匹伐他汀钙片2 mg口服,每晚1次。治疗组在对照组常规治疗基础上加服络风宁1号方,每日1剂,每日2次。2组疗程均为28天。结果 2组治疗后中医症状积分均较治疗前下降,治疗组下降更明显(P0.05);2组心电图疗效均有改善,但差异无统计学意义(P0.05);对照组治疗前后血清脂蛋白相关磷脂酶A2(LP-PLA2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度均无明显降低,仅表现出下降趋势;治疗组治疗前后血清Lp-PLA2水平显著下降(P0.01),血清TNF-α水平表现出下降趋势。结论络风内动病机学说指导下的络风宁1号方配合西药常规治疗冠心病不稳定性心绞痛具有较好的临床疗效,其效应机制可能是通过降低血清Lp-PLA2水平,调节血清TNF-α含量,起到抗炎稳定斑块作用,从而改善心肌氧供平衡进而发挥抗心肌缺血的作用。     

A20通过抑制自噬缓解实验性牙周炎牙槽骨吸收

目的：研究泛素编辑酶A20在抑制小鼠实验性牙周炎牙槽骨吸收中的作用并探索其潜在机制。方法：将20只小鼠随机分为4组：无牙周炎（Control）组、牙周炎及PBS注射（PBS+P）组、牙周炎及阴性对照腺相关病毒（adeno?associated virus,AAV）注射（AAV+P）组、牙周炎及A20过表达AAV（AAV?A20）注射（A20+P）组。采用丝线结扎联合局部涂菌构建C57BL/6J小鼠实验性牙周炎模型。在小鼠牙龈局部注射AAV?A20以实现A20在牙周组织的过表达。A20免疫荧光染色验证AAV?A20在局部牙周组织的转染效率。微计算机断层扫描（microcomputed tomography,Micro?CT）、苏木素伊红（haematoxylin and eosin,HE）染色及抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate?resistant acid phosphatase,TRAP）染色比较各组小鼠牙槽骨吸收程度及上颌第一第二磨牙之间破骨细胞数目。免疫组织化学染色观察各组小鼠牙周组织核因子?κB受体活化因子配体（receptor activator of nuclear factor?κВ ligand,RANKL）及自噬相关因子表达。结果：与PBS+P组及AAV+P组相比,A20+P组小鼠牙周组织自噬水平降低（Beclin?1、LC3B表达下降,p62表达上升）,RANKL表达下调,上颌第一第二磨牙之间TRAP阳性破骨细胞数目减少,牙槽骨吸收程度减轻。结论：A20通过负向调控自噬缓解小鼠实验性牙周炎牙槽骨吸收,有望成为牙周炎治疗的新靶点。