多激素分泌性垂体泌乳素腺瘤的激素分泌谱及克隆分析

目的 对多激素分泌性垂体泌乳素腺瘤的克隆状态以及激素分泌谱进行分析。方法 对26例女性垂体泌乳素腺瘤患者（单激素分泌性PRL腺瘤7例，多激素分泌性PRL腺瘤19例）进行肿瘤标本的免疫组化分析，并且提取DNA行HUMARA分析。结果免疫组化分析提示本组多激素分泌性垂体PRL腺瘤具有10种不同的激素分泌谱，现代分子生物学HUMARA克隆分析提示11／13例（85％）多激素分泌性垂体PRL腺瘤为单克隆起源。结论 结果提示垂体泌乳素腺瘤除了分泌泌乳素外，还可以分泌多种垂体激素，而且绝大多数多激素分泌性垂体腺瘤的起源是单克隆性的。     

食管癌3p24等位基因LOH及其扩增产物克隆的研究

目的；研究3p24EAβMD位点与食管癌的关系。为寻找该位点附近可能存在的抑癌基因奠定基础。方法：采用PCR—RFLP法检测45例食管癌患者3p24位点杂合缺失情况。并对该片段进行克隆。结果：在22例食管癌信息个体中共检出9例杂合缺失。并通过序列分析可知变化为点突变。结论：3p24EAβMD较高的杂合缺失率显示该位点附近可能存在潜在的抑癌基因。     

人白细胞介素12双亚基共表达真核载体的构建

目的 :为满足基因治疗的需要构建人白细胞介素 12 (hIL 12 )双亚基共表达质粒。方法 :先从人胚肾组织的逆转录产物中用PCR方法扩增出它的两个亚基P4 0 和P3 5的cDNA全长 ,分别克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+/ )中构建单亚基质粒———P(+) /P4 0 和P( ) /P3 5,然后再将二者串联克隆入真核表达载体 pcDNA3.1(+)中得到P(+) /IL 12质粒。脂质体转染HepG2后 2 4,48hELISA检测细胞培养上清内hIL 12蛋白质表达。结果 :P(+) /IL 12质粒经酶切和测序证明两亚基连接方向正确 ,序列无突变 ;ELISA检测细胞上清结果证实可表达hIL 12蛋白质。结论 :成功构建P4 0 和P3 5双亚基真核共表达质粒———P(+) /IL 12 ,为模拟hIL 12生理表达方式 ,简化hIL 12基因治疗操作奠定了基础。     

B淋巴细胞克隆清除治疗类风湿关节炎的研究进展

类风湿关节炎（RA）是一种以关节滑膜炎症为主要病理改变的慢性进展性自身免疫性疾病。有较高的致残率。随着对滑膜中各种炎症细胞包括巨噬细胞、纤维母细胞、内皮细胞、T细胞、B细胞以及相关细胞因子在致病机理的深人认识，针对免疫细胞或免疫分子的靶向治疗将RA引人了生物治疗的新阶段。目前，针对肿瘤坏死因子α（TNFα）的单克隆抗体（etanercept，infliximab，adalimummab）、白介素1受体拮抗物（IL-1Ra，anakina）已经上市，并取得了较好的疗效。近来研究发现，B淋巴细胞在RA滑膜炎的免疫致病机理中有非常重要的作用，B淋巴细胞克隆清除对于RA的治疗是又一项新的生物治疗的突破。本文旨在就B淋巴细胞在RA滑膜炎发病机理、B淋巴细胞克隆清除对RA的治疗作用以及其安全性方面的研究进展进行综述。     

凋亡素原核表达载体的构建和表达

目的 构建凋亡素原核表达系统，以制备抗原物质凋亡素融合蛋白。方法 通过PCR方法，以pcDNA-VP3质粒为模板，扩增出凋亡素VP3基因。将其克隆到原核表达载体pET-DsbA的多克隆位点，构建成凋亡素的高效原核表达栽体pET-DsbA-VP3，将该质粒转化到大肠杆菌E．coliBL21(DE3)plysS中，以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galactoside，IPTG)对其进行诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳分析目的蛋白。结果 转化有凋亡素原核表达载体pET-DsbA-VP3的大肠杆菌E．coliBL21(DE3)plysS经IPTG诱导后，聚丙烯酰胺凝胶电泳出现38300的目的蛋白条带。结论 凋亡素原核表达栽体pET-DsbA-VP3能高效表达出凋亡素融合蛋白。     

鼠髓样白血病细胞株NFS-60不依赖细胞的克隆

目的构建诱导型表达载体pTKS3-CAT，并转染人表达G-CSF受体的NFS-60不依赖细胞，将粒细胞集落刺激因子（G-CSF）依赖的细胞株鼠髓样白血病细胞株NFS～60，筛选为NFS-60不依赖细胞的克隆。方法在培养体系中加入0．5-10ng/ml浓度的rhG-CSF，培养、传代。结果得到NFS-60不依赖细胞株的克隆，其细胞表面包含G-CSF相应受体，而增殖曲线不依赖于G-CSF因子浓度。结论克隆NFS-60不依赖细胞作为工程细胞用于G-CSF样活性化合物发现的研究。