人胚颌下腺细胞原代及传代培养

目的 :研究人胚颌下腺细胞原代及传代培养的方法 ,为进一步研究颌下腺细胞的功能、起源、发生及发展奠定基础。方法 :在DMEM培养基中加入FBS、表皮生长因子 (EGF)及氢化可地松 (HC) ,观察细胞的生长特点。结果 :在含有 φ =2 ?S、10ng/mlEGF、5 μg/ml胰岛素 (INS)及 5 μg/mlHC的DMEM培养基中上皮细胞生长最好 ,其它组上皮样细胞生长状态不佳。培养的细胞为圆形、三角形、多边形 ,细胞伸展良好。细胞传代后生长良好 ,形态并未发生改变。HE染色可见细胞为圆形 ,三角形 ,多边形 ,核蓝染 ,胞浆粉染。大多数细胞cytokeratin染色阳性 ,说明为上皮细胞 ,少数细胞CK18染色阳性 ,说明培养的细胞中含有一部分导管上皮细胞。结论 :含有 φ =2 ?S、10ng/mlEGF、5 μg/mlINS及 5 μg/mlHC的DMEM培养基最适合体外原代及传代培养人胚颌下腺细胞     

小鼠骨髓内皮细胞系的长期传代培养和生物学特性鉴定

小鼠骨髓内皮细胞系建立、保存和传代培养已10年之久。本研究的目的是对该内皮细胞系的生物学特性进行新的鉴定，以便利用该内皮细胞系进行进一步研究。取经传代培养的该内皮细胞系细胞，进行显微光镜和电子显微镜观察、分子标志检测、吞噬实验、生长动力学分析以及核型鉴定等。结果表明：细胞在亚汇合贴壁层中多为椭圆形、圆形或梭形，部分可呈条索状排列，在汇合层中一般为鹅卵石状。CD3l、vWF抗体染色阳性细胞占94％以上，摄取DiI—Ac—LDL的细胞达98．5％。在常规培养条件下，快速增殖期的细胞群体倍增时间约为54．6小时，分裂指数最高达到38％。。集落产率介于4．33％-7．40％。核型主要为超二倍体。结论：该细胞系保持了内皮细胞的基本特征，生长动力学和一些生物学行为与建系之初稍有差异。     

人羊膜间充质干细胞体外传代培养对染色体核型的影响

目的:分离培养人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)并进行体外长期传代培养,通过对连续传代的细胞形态、膜表面标志、增殖、分化特性以及染色体核型进行研究,以观察体外培养对该细胞的影响,为其储备和临床应用提供实验依据。方法:无菌条件下从新鲜人胎盘组织分离羊膜,采用组织贴壁法分离培养hAMSCs,并对原代细胞～P11代细胞利用流式细胞技术检测其膜表面标志物;取P3～P4代细胞向神经细胞和成骨细胞诱导,免疫组化染色、PCR检测基因表达情况;采用染色体G显带法制备染色体核型。结果:hAMSCs形态似长梭型,呈流水状生长,细胞活性高,冻存复苏后仍能保持正常形态,并可在体外稳定扩增,细胞生长曲线呈"S"型;细胞高表达CD90、CD73、CD44、CD105;细胞经诱导后可以向神经细胞和成骨细胞分化,神经元特异性烯醇化酶和成骨细胞矿化结节检测为阳性,PCR检测巢蛋白和骨桥蛋白基因表达为阳性;P3～P10代的hAMSCs染色体核型均为正常二倍体核型。结论:hAMSCs在体外经数代培养后能保持间充质干细胞的外显和遗传特性,并且未见染色体核型异常改变。     

传代培养PC12细胞的早期细胞分裂过程观察

目的 :观察早期培养的PC12细胞以了解肿瘤细胞演化过程。方法 :RPMI 16 40传代培养的PC12细胞 ,以Giemsa和增殖细胞核抗原免疫组化进行染色观察。结果 :PC12细胞呈现包括全能原生质体、核内多倍体、多核体、核 内质多聚体、合胞体和多细胞裂殖球的一系列演化阶段。结论 :细胞裂殖是早期培养PC12细胞的主要无丝分裂方式。这种肿瘤演化早期的细胞裂殖方式对肿瘤发生具有基础的细胞生物学意义     

肾小管上皮细胞传代培养

长期传代的肾小管上皮细胞系已被广泛地研究。目前国内外应用较多的有ＭＤＣＫ、ＬＬＣ－ＰＫ１、ＯＫ、ＶＥＰ和ＥＴＰ细胞系。本文就送这些细胞及其在一介绍     

人胚鼻咽上皮细胞的传代培养和克隆生长

应用低血清和无血清培养基成功地获得了人胚鼻咽上皮细胞的传代培养和克隆生长,而无纤维细胞污染。植块培养细胞增殖旺盛,分裂相多见。早期生长晕内可见成群的纤毛细胞,以后逐渐呈现鳞状终未分化。上皮细胞可传代3～5次,存活期可达80天,组织块可重复植块培养3～4次,克隆形成率平均为12％。培养基中缺少氢化可的松,胰岛素时克隆形成率明显下降,血清浓度为1％时克隆形成率最高。此实验为鼻咽癌研究提供了一个新的模型。     

环氧合酶-2在bFGF诱导的人晶状体上皮细胞增殖中的表达

目的检测环氧合酶-2(cyclooxygenase，COX-2)在人晶状体上皮细胞(human lens epithelium cell，HLEC)中的表达，探讨COX-2在后发性白内障(PCO)形成中的意义。方法细胞传代培养，取第三代细胞用于实验。用SP免疫组化法检测bFGF刺激6小时后COX-2蛋白的表达，并与对照组相比较，以胞浆内出现棕黄色颗粒为阳性表达；采用RT—PCR和Western—blot方法检测bFGF刺激下，不同时间点(1h、3h、6h、12h、24h)COX-2的mRNA和蛋白的表达。结果检测的人晶状体上皮细胞中，实验组的细胞COX-2mRNA和蛋白表达均为阳性。且表达呈时间依赖性，随着时间的延长COX-2表达逐渐增加，6h达最高峰；正常对照组表达弱或无表达。结论bFGF可以刺激晶状体上皮细胞增殖，并诱导环氧合酶-2的表达，提示COX-2与人晶状体上皮细胞的增殖密切相关。COX-2可能参与PCO的形成。     

靛玉红对膀胱癌ScaBer细胞株增殖的影响及机制

体外持续传代培养膀胱癌ScaBer细胞株,MTT法测定不同浓度、不同作用时间靛玉红对细胞株的生长抑制作用,采用RT-PCR法及琼脂糖凝胶电泳检测不同浓度的靛玉红作用于ScaBer细胞株时,对Oct-4、Sox-2、Nanog基因表达的影响.发现1、5、10μmol/L的靛玉红均能抑制ScaBer细胞株生长,并呈明显的量效关系和时间依赖性;靛玉红能够抑制Oct-4、Sox-2、Nanog基因的表达.认为靛玉红能够明显抑制膀胱癌ScaBer细胞株增殖,其机制可能与Oct-4、Sox-2、Nanog基因表达下调有关.     

组织块消化法原代培养大鼠输精管平滑肌细胞及鉴定

目的 建立一种稳定高效、存活率高的大鼠输精管平滑肌细胞体外分离及培养方法,为相关研究提供理想的细胞模型。方法 采用组织块消化法对大鼠离体输精管平滑肌细胞进行原代培养。采用形态学观察、HE染色、抗α-SMA免疫细胞化学荧光染色对细胞进行鉴定,台盼蓝染色计算细胞存活率及细胞总数,胰酶消化传代并绘制生长曲线。结果 对照实验表明胶原酶Ⅱ消化效果优于胶原酶Ⅰ,最佳消化时间为60min,同时控制吹打次数、沉淀时间及培养环境,获得了理想的平滑肌细胞总数及存活率。平滑肌细胞呈典型的梭形、长条形,可传代,且出现平滑肌细胞培养典型的“峰-谷”状特征,生长曲线为“S”型。经抗α-SMA免疫荧光鉴定,培养细胞为平滑肌细胞,纯度为(92.6±4.3)%。结论 采用组织块消化法成功建立了大鼠输精管平滑肌细胞的体外分离及培养方法。