日本血吸虫成虫体外传代培养细胞的生物学鉴定

本研究结果显示：血吸虫成虫细胞在体外培养中呈半悬浮聚集生长状态, 4代内的培养细胞及冻存复苏细胞存活率达90%，并在各代培养中均可见细胞分裂相；传5代细胞的染色体核型为8对16条。超微结构既观察到形态正常细胞，也可见形态异常细胞。表明1640?鄄40特定培养基对血吸虫成虫中的部分细胞体外传代培养获得成功。     

人骨髓间充质干细胞表面抗原测定

目的 :研究体外培养的各代间充质干细胞 (MSCs)及其成骨分化后的部分细胞表面抗原变化。方法 :将体外普通培养的骨髓间充质干细胞 ,每隔 1代在流式细胞仪上检测CD48、CD5 6、CD71和CD90阳性表达率。另外 ,为促进成人MSCs体外成骨性分化 ,第 1传代培养时加入成骨性添加剂 ,培养第 6、 12、 18、 2 4、 3 0d时 ,也分别用流式细胞仪分析上述MSCs表面抗原的表达 ,并用碱性磷酸酶组化染色和VonKossa染色。结果 :( 1)在普通培养条件下 ( 10 %DMEM ) ,从第 1代起 ,MSC的表面抗原CD48、CD5 6、CD71、CD90都呈阳性表达。 ( 2 )诱导培养的MSCs表面抗原CD48、CD90阳性表达率在诱导第 12、 18、 2 4及 3 0d时 ,分别与第 6d相比都有显著差异。 ( 3 )在成骨诱导条件下 ,MSCs表现出AKP染色增强和VonKossa染色可见钙化的基质沉积。当MSC开始向成骨细胞分化后 ,CD71阳性率下降最明显。结论 :( 1)目前采用的体外普通培养条件下 ,培养、传代方法对MSCs表面抗原CD48,CD5 6,CD71及CD90表达并无明显影响。 ( 2 )诱导成骨培养的MSCs的CD71从高阳性率转变为极低阳性率可能与MSCs向成骨细胞系的分化成熟相对应。 ( 3 )CD90及CD48也可能与MSCs的细胞分化状态特别是向成骨细胞系的改变有关     

人脐静脉内皮细胞的长期传代培养

本实验在纤维连接蛋白(Fibronectin,Fn)预处理的塑料培养皿上,用199培养基(内含20％小牛血清)。成功地将人脐静脉内皮细胞以1:2-3比率传代培养两个月,传15代。培养细胞具有第Ⅷ因子相关抗原;胞质中存在Weible-Palade小体;细胞倍增时间为24h;培养4—6天,细胞单层融合,复苏成功率为70％左右;染色体检查2n=46。培养50天内,条件培养液中均检测到Von Willebrand因子和6-keto-PGF。     

个体特异性豚鼠动脉血管内皮细胞的分离,培养及鉴定

鉴于国内获得近交系豚鼠较为困难，比介绍一种新的获取个体特异性及鼠血管内皮细胞的方法并对其有关生长条件进行探讨。发现切取豚鼠一侧颈动脉经Ⅱ型胶原酶消化可以有效地获取血管内皮细胞闪保证供血管豚鼠的存活，生长因子为其稳定生长的重要条件，个体特异性豚鼠血管内皮细胞的成功分离和培养为相关的活体实验提供了良好的条件。     

鳞癌细胞株放射敏感性与端粒酶活性及端粒长度变化的关系

目的探索放射抗拒鳞癌细胞株放射敏感性的改变与端粒酶活性、端粒长度变化的关系。方法以人喉鳞癌细胞株Hep2为实验对象,用γ射线反复照射获得具有放射抗拒性细胞株Hep2R,拟合细胞存活曲线比较两种细胞株的放射生物学参数及端粒酶抑制剂AZT(azidothymidine,叠氮胸苷)作用后的变化,用TRAP-ELISA法测定端粒酶活性(OD值),Southernblotting法分析端粒平均长度(TRF),比较端粒酶活性、端粒平均长度的变化。结果辐射诱导出一个具有放射抗拒性的Hep-2R细胞株,并已稳定传代培养30代以上且放射抗拒性能稳定,测得其SF2=0.6798、D0=3.24,Hep-2R细胞的端粒酶活性较Hep-2细胞升高(0.982±0.005vs0.604±0.015),端粒长度延长了2倍(11.12kbvs3.76kb),AZT作用后Hep2R细胞株SF2=0.4892、D0=2.51,端粒酶活性下降为0.708±0.011、端粒长度缩短为10.18kb。Hep2细胞对应的参数SF2=0.4148、D0=2.06,AZT作用后Hep2细胞SF2=0.3843、D0=1.81,端粒酶活性下降为0.364±0.003、端粒长度缩短为2.76kb。结论辐射诱导细胞获放射抗拒性后其端粒酶活性升高、端粒平均长度增长,端粒酶抑制剂能通过降低端粒酶活性、缩短端粒长度而对其有增敏效应。     

传代培养法对提高羊水细胞培养成功率的探讨

目的：探讨羊水细胞生长不良时，提高羊水细胞培养成功率的方法。方法羊水细胞培养3158例，对其中104例生长不良样本行传代培养。结果培养成功103例，失败1例，使培养成功率由传代前的96.70%提高到99.97%。结论生长不良的羊水细胞用该方法可提高培养成功率，为染色体核型分析提供保证。     

滨蒿内酯剂量依赖性降低培养的豚鼠气道平滑肌细胞内钙

目的：探讨滨蒿内酯（scoparone，Scop）对原代及短期传代培养的豚鼠气道平滑肌细胞（airway smooth muscle cells，ASMCs）内钙的影响，同时，比较原代与传代ASMCs在形态、生长曲线及对不同工具药反应性等方面的异同性。方法；以酶消化法分离培养ASMCs，应用Fluo-3／AM为细胞内钙离子示踪剂，观察原代及短期传代培养的ASMCs在Scop及其他工具药的作用下细胞内钙离子浓度（[Ca^2＋]i）的改变。     

三步酶消化法高效分离兔原代关节软骨细胞及体外培养观察

目的　观察设计的三步酶消化法分离原代关节软骨细胞的效果,并对体外培养不同代次细胞的生物学活性进行评价。方法　三步酶消化法设计为以培养液配制的1g/L胰蛋白酶及1g/LEDTA混合液、1g/L透明质酸酶和2g/LⅠ型胶原酶顺序消化关节软骨分离细胞,检测细胞收获效率和存活率;体外传代培养观察细胞形态、生长及胞外基质中Ⅰ型和Ⅱ型胶原、蛋白多糖聚集体等的变化。结果　(1)关节软骨经三步酶消化基质逐步解离和降解,细胞得以完全释放和分离,每克软骨的细胞收获量平均为50 3×106 个细胞,细胞存活率平均为98. 8%。(2)原代和第一代细胞附壁生长呈三角形或多角形,生长融合时呈卵圆形,Ⅱ型胶原免疫组化和甲苯胺蓝异染反应均呈阳性,原代细胞外基质有高的硫酸糖胺多糖含量为(92±10)μg/cm2;第三代后细胞逐渐变为梭形,Ⅱ型胶原免疫组化为阴性,甲苯胺蓝异染反应明显减弱,第四代细胞外基质的硫酸糖胺多糖含量为(48±12)μg/cm2。结论　(1)三步酶消化法可使关节软骨基质完全消化降解,具有高细胞收获率、高细胞存活率和操作简便等特点。(2)原代和第一代软骨细胞具有良好的生物学活性,而第三代以后的细胞生物学活性低下。     

壁虎脊髓细胞的原代培养及形态学观察

目的:探讨壁虎脊髓细胞分离及培养方法。方法:分离壁虎脊髓,消化接种于细胞培养瓶中,采用不同渗透压、pH值、温度、消化、粘附基质的培养条件。结果:5%CO2、饱和湿度培养条件,在添加10?S的DMEM/F12培养基(渗透压200～260mmol/kg,pH7.2)中,获得了不同细胞类型的细胞,其中包括神经元样和胶质细胞样细胞,神经元样细胞NF染色阳性,GFAP染色阴性,而胶质样细胞GFAP染色阳性。结论:建立了壁虎脊髓细胞分离及培养方法,为壁虎脊髓再生过程中基因的研究提供细胞水平功能平台。     

传代培养角膜细胞的染色体遗传变异率分析

目的分析传代培养角膜细胞染色体数目的变异率。方法选择人角膜上皮细胞(HCE)、牛角膜内皮细胞(BCE)和兔角膜上皮细胞(RCE)细胞,采用直接法制备传代细胞染色体标本,常规Giemsa染色,1000倍光学显微镜下计数分裂相染色体数目,进行核型分析,统计染色体数目变异情况。结果HCE染色体众数为56~65,为超二倍体;BCE染色体众数为27~34,为亚二倍体;RCE染色体众数为74~88,为超二倍体。与起源细胞相比,以上3种传代细胞染色体数目均发生了改变。结论该项核型分析为HCE、BCE和RCE的功能研究提供了重要的参考信息。