IL-6促进骨髓源性神经干细胞增殖的实验研究

目的研究白细胞介素6(IL-6)及其受体对体外培养的大鼠骨髓源性神经干细胞增殖的影响及信号转导机制。方法采用密度梯度离心法分离骨髓基质细胞,应用特制的神经干细胞培养基诱导培养6d后收集贴壁细胞传代培养,用AlamarBlue摄入法检测不同浓度的IL-6及IL-6受体对大鼠骨髓源性神经干细胞增殖的影响,Westernblot方法检测不同剂量IL-6对干细胞中STAT3表达的影响。结果IL-6能够促进干细胞的增殖,随着药物剂量的增加,增殖作用明显增加,呈明显剂量依赖性,其中20、100、200ng/mL组均与对照组有显著差异(P<0.01),但2ng/mL与对照组、100ng/mL与200ng/mL组之间无显著差异(P>0.05),20ng/mL与100ng/mL组之间有差异(P<0.05)。IL-6受体可抑制干细胞的增殖,单独应用IL-6受体,100ng/mL、200ng/mL组与对照组均有显著差异(P<0.05)。而IL-6与IL-6受体联合应用可促进干细胞的增殖,但增殖作用比单独应用IL-6组差,两组相比有显著性差异(P<0.05)。随IL-6浓度的增加,干细胞中的STAT3表达增加,20、100、200ng/mL组与对照组相差显著(P<0.01)。结论100ng/mL组的IL-6对骨髓源性神经干细胞有较好的增殖促进作用;IL-6受体可抑制骨髓源性神经干细胞增殖;联合应用IL-6和IL-6受体增殖效果不如单独应用IL-6,提示骨髓源性神经干细胞表面自身具有IL-6受体;IL-6通过增加STAT3表达促进骨髓源性神经干细胞增殖。     

大鼠大脑皮层星形胶质细胞的传代培养

目的：获得纯度较高的星形胶质细胞材料用于进一步实验。方法：采用大鼠神经胶质细胞的原代培养和传代培养方法。取生后24h以内Wistar大鼠脑皮层，用机械法和胰蛋白酶消化法分散细胞，制成细胞悬液，接种于无底物黏附培养瓶中，置37℃，5％CO2培养箱中培养。培养液为DMEM/F12混合培养液。待细胞铺满瓶底后传代，并对传代细胞进行形态观察、吖啶橙荧光染色和星形胶质细胞的免疫细胞化学鉴定。结果：通过传代得到了形态典型含量较高的星形胶质细胞。结论：在无底物黏附培养的条件下，星形胶质细胞在体外能够得到良好的生长，并被纯化。     

大鼠表皮角质形成细胞传代培养的消化方法

目的:获得大鼠角质形成细胞(KC)传代培养的最佳消化方法.方法:首先取得大鼠仔鼠的背部皮肤,经过中性蛋白酶和胰蛋白酶、EDTA联合消化后获得KC,培养,传代培养消化中采用传统方法、胰蛋白酶预处理法和EDTA预处理3种方法.结果:胰蛋白酶预处理法和EDTA预处理法在获得细胞数、细胞贴壁程度、细胞生长状态上较传统方法效果好.结论:胰蛋白酶、EDTA预处理方法好于传统方法.     

成人骨髓源成骨细胞体内异位成骨的实验研究

目的　观察成人骨髓源成骨细胞与珊瑚羟基磷灰石 (CHA)复合构建的组织工程化骨组织的体内异位成骨能力 ,探讨适宜的组织工程化骨组织的构建方式。　方法　抽取健康成人骨髓 ,采用全骨髓法培养 ,使成人骨髓基质干细胞 (hBMSCs)定向诱导分化为成骨细胞 ,然后种植于CHA上 ,复合培养 5d后植入裸鼠股部肌袋内 ,以未种植细胞的CHA作为对照。术后 4,8,12周取材作一般观察、X线摄片、组织学检查和源于成人的碱性磷酸酶 (ALP)及骨钙素 (OCN)的RT PCR检测。　结果　原代和传代培养的细胞具有活跃的增殖能力 ,成骨细胞与CHA复合生长良好。实验组术后 4、8、12周均有新骨形成 ,随着时间延长 ,新骨生成量增多 ;对照组则均无新骨形成。术后 4周实验组RT PCR检测源于人的ALP及OCN表达均为阳性 ,对照组阴性。　结论　成人骨髓源成骨细胞与CHA复合培养后构建的组织工程化骨组织 ,具有良好的异位成骨能力 ,可望应用于临床修复骨缺损。     

传代培养PC12细胞无丝分裂与细胞分化的观察

目的 :观察传代培养的PC12细胞的无丝分裂和不对称分裂 ,探讨其在肿瘤发生、肿瘤细胞多形性和细胞分化中的意义。方法 :传代培养的PC12细胞以Giemsa染色、甲绿 派郎宁的细胞化学和增殖细胞核抗原 (PCNA)的免疫组织化学染色 ,光镜下分别观察。结果 :PC12细胞呈现横缢型和侧凹型等无丝分裂像 ,并且观察到其形态、大小和化学性质的不对称性分裂及细胞脱颖现象。结论 :无丝分裂和不对称分裂是PC12细胞多形性形成的主要原因 ,肿瘤细胞无丝分裂及其不对称性对肿瘤发生及肿瘤细胞的分化具有重要意义。     

正常人骨髓基质祖细胞体外传代培养的实验研究

研究正常人骨髓基质祖细胞在体外传代培养过程中的功能变化,方法：采用体外液体单层和半固体培养法。结果：Ｆ１传代细胞对骨髓红系祖细胞集落形成单位和粒系祖细胞集落形成单位支持能力最显著,Ｆ２代对有核细胞粘附能力最显著。     

人脂肪细胞原代及传代培养的研究现状

脂肪组织是机体内最大的能量储库和重要的内分泌器官。脂肪细胞的分化和增殖失常可导致肥胖、胰岛素抵抗、动脉粥样硬化、2型糖尿病等疾病。目前用于体外脂肪细胞分化研究的主要是鼠源性的3T3-L1和3T3-F442A前脂肪细胞系。但人和鼠的脂肪细胞在分化调控和细胞功能上都有显著的区别，因此，为了准确的获得人脂肪细胞研究数据，就必须建立人的脂肪细胞培养模型。     

细胞分裂与癌发生机制研究进展

基于肿瘤病理及流行病学的长期观察,结合细胞生物学新成就,发现常见肿瘤发生与细胞分裂潜能关系密切。细胞分裂是个体生长发育及组织损伤后再生修复时必不可少的生物学行为,由于细胞分裂潜能是有限的,频繁分裂将使局部细胞的分裂潜能提前耗竭,籍此发生的细胞重新选择为细胞永生化、恶性变创造了条件。