VEGF参与CoCl2预处理对神经细胞缺氧损伤的保护作用

目的：探讨CoCl2对体外培养分化SH-SY5Y细胞的缺氧损伤保护作用及缺氧诱导基因产物VEGF在其中的作用。方法：分化的SH-SY5Y细胞随机分为对照组、化学缺氧预处理组（预处理组,细胞先用50μM CoCl2预处理3 h,换液后常氧培养1 h,然后在2%的低氧孵箱内缺氧28 h）、缺氧组（无CoCl2预处理过程,其余同预处理组）。用Western Blotting法测细胞VEGF的蛋白表达,RT-PCR测VEGF的mRNA表达,通过乳酸脱氢酶释放率和MTT细胞活力测定判断细胞损伤程度。然后,进一步通过添加VEGF单克隆抗体、重组人VEGF,验证VEGF在化学缺氧预处理组中的保护作用。结果：化学缺氧预处理组细胞VEGF蛋白、VEGF mRNA表达都显著高于缺氧组（P〈0.01）,预处理组细胞较缺氧组细胞存活率高,乳酸脱氢酶释放率减少（P〈0.01）。MTT细胞活力测定显示,40μg/ml VEGF单克隆抗体可抑制预处理的保护作用,而100 ng/ml重组人VEGF可模拟预处理组的保护作用。结论：CoCl2化学预缺氧可保护神经型细胞对缺氧产生耐受,VEGF可能在其中发挥重要的保护作用。     

APP17肽对APP转基因小鼠学习记忆能力和海马神经细胞凋亡的影响

目的观察APP(-βamyloid precursop protein,APP)17肽(APP695中319-335肽段)对APP转基因小鼠(APP695V717I)学习、记忆能力及海马神经细胞凋亡的影响。方法3月龄的APP695转基因小鼠随机分为模型组和APP17肽治疗组,正常对照组采用月龄和性别与之相匹配的C57BL/6J小鼠。APP17肽治疗组给予皮下注射APP17肽,每只每次0.34μg,每周3次;模型组和正常对照组给予等体积NS。应用水迷宫试验观察小鼠学习、记忆功能的变化,以流式细胞技术分析海马神经细胞凋亡率和线粒体膜电位的变化。结果(1)水迷宫试验结果显示,模型组小鼠存在明显学习和记忆功能障碍,其第3、4、5天游完全程的时间[(93.22±16.35)、(86.73±20.26)、(77.13±29.35)s]和错误反应次数[(6.63±2.16)、(5.81±2.13)、(5.33±1.41)次]均较正常对照组[分别为(70.89±20.19)、(61.25±21.88)、(54.63±16.92)s和(5.01±1.93)、(2.97±0.96)、(2.31±1.01)次]增多(P<0.05);APP17肽治疗组小鼠的行为学障碍明显轻于模型组(P<0.05),其上述水迷宫检测结果与正常对照组比较差异无统计学意义。(2)与正常对照组小鼠海马神经细胞凋亡发生率[(3.13±1.19)%]和线粒体膜电位[(176.39±13.88)mV]比较,模型组凋亡发生率[(8.06±2.31)%]显著增加(P<0.01)而线粒体膜电位[(97.51±15.73)mV]明显降低(P<0.01);APP17肽治疗组检测结果与正常对照组接近,海马神经细胞凋亡发生率[(4.38±1.26)%]低于模型组(P<0.01),线粒体膜电位[(168.35±19.29)mV]高于模型组(P<0.01)。结论APP695转基因小鼠存在学习和记忆功能障碍,且其海马神经细胞凋亡率增加,线粒体膜电位降低;APP17肽能够明显改善该转基因小鼠的学习和记忆能力,其作用机制可能是通过稳定线粒体膜电位及抑制凋亡发生而实现。     

高功率微波辐射对小鼠学习记忆能力的影响

高功率微波（hish power microwave，HPM）是一种峰值功率很高的特殊类型微波，在民用和军事领域有着广泛的应用前景。已有的微波辐射生物学效应数据大都是建立在中低功率微波的研究基础之上，而HPM辐射效应尚无定论，因此亟需进行系统研究和评估。学习记忆属于脑的高级功能，学习记忆任务模型则是评价环境因素危害的经典方法之一。在机体整体出现损伤之前，脑的学习记忆活动可能已出现功能上的障碍。本实验中我们分别使用被动回避及方形水迷宫两个实验方法，以研究HPM对小鼠学习记忆能力的影响，为HPM生物学效应研究提供基础资料。     

重组人表皮生长因子治疗鼓膜穿孔111例

目的：探讨重组人表皮生长因子治疗炎症性鼓膜穿孔和外伤性鼓膜穿孔的方法和疗效。方法：局部使用重组人表皮生长因子，促进鼓膜穿孔愈合，观察并总结处理。结果：111例鼓膜穿孔愈合达标为95例，占85．6％，炎症性32例，占72．7％，外伤性穿孔63例，占94．1％。结论：治疗鼓膜穿孔不住院，不手术，省时，省钱，具有很好的社会效益和经济效益。     

脑源性神经营养因子信号转导在神经病理性疼痛中的作用

神经病理性疼痛是一种常见并且严重影响人类健康的疾病,甚至可导致病人最终失去行动能力,全世界受此病困扰着达数百万人,因此成为神经科学研究的一个重要问题,但具体机制还不清楚。目前已经知道,神经病理性疼痛是由于手术等造成的神经损伤或糖尿病、带状疱疹、艾滋病,以及部分肿瘤等疾病产生的外周神经功能异常所引起,患者出现痛觉敏感的现象,对轻微的皮肤触摸产生较痛苦的感觉。目前对神经病理性疼痛的预防和治疗措施有限,因此加强在该领域的研究具有十分重要的意义。经过许多科学家的努力,最近的一系列研究表明一种神经营养因子———脑源…     

用SYBR Green I实时逆转录-聚合酶链反应定量检测人、小鼠精子中CatSper1 mRNA

目的:建立并优化SYBR GreenI实时RT-PCR体系,定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。方法:用TRIzol分别提取人、小鼠成熟精子中的总RNA,逆转录后用SYBR GreenI实时PCR定量检测CatSper1 mRNA。SYBR GreenI实时PCR采用普通PCR试剂,加入SYBR GreenI染料,优化退火温度、Mg2+浓度及上、下游引物比例,并在PCR循环时采用四步法以消除引物二聚体的影响。优化完成后用不同浓度的精子cDNA为模板做标准曲线,以检测SYBR GreenI实时PCR的扩增效率。结果:定量检测CatSper1 mRNA的SYBR GreenI实时PCR体系适宜退火温度、Mg2+浓度及上、下游引物比例分别为63℃、3.0mmol/L和1∶1,四步法中采集荧光的温度为88℃。优化后用人和小鼠精子cDNA为模板做标准曲线分别为Y=-3.402log(X)+25.99和Y=-3.409log(X)+24.09,扩增效率分别为96.8%和96.5%,可定量检测人、小鼠成熟精子中的CatSper1 mRNA。结论:用普通的逆转录及PCR系统和试剂,建立了一种方便、廉价、可靠的SYBR GreenI实时荧光定量RT-PCR系统,可用于人、小鼠精子中CatSper1 mRNA定量检测。     

李乾构教授应用四君子汤经验

万物生长皆赖于土地,人体生长皆因于脾胃.脾胃为后天之本,气血生化之源.如<金匮要略>日:"四季脾旺不受邪."故治病首先要固本,固本首先要健脾.     

基因工程小鼠在脂代谢紊乱与动脉粥样硬化研究中的几个新热点

自载脂蛋白E基因敲除小鼠问世以来，已成为研究脂代谢和动脉粥样硬化最为常用的模型。到目前为止，各种基因敲除和转基因小鼠在研究血浆脂蛋白谱和主动脉病变方面做出了巨大的贡献。尤其是LDL受体（LDLR）敲除小鼠，作为人类中引起动脉粥样硬化最常见的疾病-家族性高胆固醇血症的动物模型，其血浆LDL可以通过调整食物中胆固醇含量而控制在不同水平，从而诱发出与人类病变更为相近的血管病变。     

重组人骨形态发生蛋白7的腺相关病毒载体的构建

目的构建重组人骨形态发生蛋白7(hBMP7)的腺相关病毒(AAV)载体。方法通过RT-PCR方法,从HEK293细胞中扩增hBMP7全长cDNA并亚克隆入通用型AAV载体质粒pSNAV。将pSNAV-hBMP7质粒DNA转染BHK-21细胞,筛选出携带hBMP7的AAV载体细胞株—BHK-21细胞。用能表达Rap和Cap的重组1型单纯疱疹病毒HSV1-rc/ΔUL2按MOI=0·1感染BHK-21载体细胞株后收获病毒液,通过氯仿—PEG/NaCl沉淀—氯仿抽提纯化病毒。结果所克隆的hBMP7全长cDNA经测序证实和已知hBMP7序列完全一致。通过用能表达Rap和Cap的重组1型单纯疱疹病毒HSV1-rc/ΔUL2感染携带hBMP7基因的AAV载体细胞株BHK-21细胞的方法获得了滴度为2×1012vg/ml、纯度达99%的重组人骨形态发生蛋白7的腺相关病毒载体(AAV-hBMP7)。结论RT-PCR方法从HEK293细胞中扩增克隆hBMP全长cDNA是一种有效可行的方法。成功地构建了高滴度、高纯度的AAV-hBMP7载体,为进一步体内及体外研究基因治疗促进骨愈合提供了有力的工具。     

成人小肠及乙状结肠扭转的原因分析与诊治体会

目的探讨成人小肠及乙状结肠扭转的发病原因、早期诊断及治疗方法。方法回顾分析了我院近年来收治的18例肠扭转病例，复习近年来的相关文献。结果4例保守治疗缓解，2例手术后死亡，12例手术后存活，其中2例术后复发，二次手术。结论胃肠道炎症引起的功能紊乱、腹腔内粘连、腹腔内脂肪的支撑作用缺失和蛲虫可能也是肠扭转的发病原因，取得最佳疗效的关键是早期正确诊断，对于因肠系膜过长引起的小肠扭转，复位后应将小肠系膜固定于后腹膜。