冠状动脉内超声溶栓治疗急性冠脉综合征的临床观察

目的　探讨低频高能超声溶解急性冠状动脉综合征(ACS)闭塞相关血管或“罪犯”血管血栓及粥样硬化斑块的有效性和安全性。　方法　ACS患者26例,其中ST段抬高急性心肌梗死19例,非ST段抬高心肌梗死3例,不稳定性心绞痛4例;左前降支闭塞 10 例,左冠状动脉闭塞 4 例,右冠状动脉闭塞5例。超声溶栓后对闭塞相关血管行急诊经皮冠状动脉腔内成形术。　结果　超声溶栓后,闭塞相关血管前向血流达心肌梗死溶栓试验3 级 19 例,开通 19 例,开通率为 73%(19/26),其中冠状动脉左前降支成功率最高。超声溶栓成功患者胸痛能完全缓解,心电图ST段下降50%以上,但术后残余狭窄平均为(73±11)%。急诊经皮冠状动脉腔内成形术后6例,残余狭窄降至(13±7)%(P<0. 05)。在超声溶栓中,7例出现并发症。　结论　低频高能超声可有效、安全溶解闭塞相关血管血栓,对富含血栓的病变可进行超声溶栓,可作为经皮冠状动脉腔内成形术的互补手段在临床应用。     

运用BiFC技术检测LOX-1与AT1受体的相互作用

目的运用双分子荧光互补(bimolecular fluorescence complementation,BiFC)技术探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)介导血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)和血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)之间的相互作用,推测其可能是参加动脉粥样硬化等心血管疾病过程的重要机制之一。方法将LOX-1与AT1受体质粒共转染COS7细胞,给予ox-LDL(50ug/ml)刺激后,检测细胞中p-ERK表达水平。根据BiFC载体和AT1、LOX-1基因序列设计引物,将AT1、LOX-1基因克隆到BiFC特异性的荧光载体上,得到重组BiFC质粒:phmKGN-MN-AT1,phmKGC-MN-AT和phmKGC-MC-LOX-1,phmKGN-MC-LOX-1,配对共转染HEK293细胞,用ox-LDL(50ug/ml)刺激,研究AT1受体和LOX-1的相互作用;构建G蛋白偶联受体家族中另一蛋白肾上腺素受体β2(β2-adrenergi creceptor,β2AR)的BiFC重组质粒:phmKGN-MN-β2AR和phmKGC-MN-β2AR,分别与LOX-1对应的BiFC质粒转染HEK...     

鼻咽癌细胞株体外诱导同种异体T细胞TCR VβCDR3谱型和细胞毒性分析

目的 用鼻咽癌细胞株CNE2体外负载同种异体树突状细胞(dendritic cell,DC)诱导T淋巴细胞,使之活化为细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic Tlymphocyte,CTL),观察其体外特异性杀伤和克隆性增殖.方法 用GM-CSF,IL-4和TNF-α体外诱导健康志愿者外周血单核细胞,用CNE2负载,使之分化为成熟DC,流式细胞仪检测负载前后DC的表型特征.在IL-2的作用下,用负载CNE2抗原的DC诱导自身T细胞生成特异性CTL.乳酸脱氢酶释放法检测其特异性杀伤活性;采用免疫谱型分析技术分析T细胞的克隆性.结果 健康志愿者外周血单核细胞体外在GM-CSF,IL-4和TNF-α诱导下获得具有典型表型特征的成熟DC,其诱导的CTL对CNE2有明显的特异性杀伤作用;PBMC的TCR Vβ CDR3谱型呈高斯分布,而诱导后的T细胞部分家族出现优势表达.结论 负载鼻咽癌抗原的同种异体DC所诱导的CTL在体外对鼻咽癌细胞有特异性杀伤作用,优势表达的TCR Vβ CDR3家族对鼻咽癌治疗有潜在的临床应用价值.     

HCV第一高变区的免疫学研究

 HCV 属黄热病毒科，感染人体后可引起机体免疫应答发生异常，导致组织损伤，形成慢性持续性感染，并能进一步发展为肝硬化甚至肝细胞肝癌。目前全世界约有 1.7 亿 HCV 感染者，约有 75% 左右的急性丙型肝炎患者转为慢性感染，其中 10% ~ 20% 慢性丙型肝炎患者发展为肝硬化，1% ~ 5% 发展为肝癌^[1]。丙型肝炎在治疗和预防方面具有很强的局限性，这主要是由于 HCV 的高度变异性，其中位于 E2 NS1 区 N 端第 27 位氨基酸的变异性最大，通常称之为第一高变区（hypervariable region 1，HVR1）。研究证明 HVR1 中含有优势表位^[2]，其高度变异性也将对机体产生的针对 HCV 的细胞和体液免疫应答造成障碍。现本文就近年来有关 HCV-HVR1 的免疫学研究进展做一综述。......     

大鼠脑出血急性期的实验研究及宁脑汤的干预作用

目的:通过实验性大鼠脑出血模型研究宁脑汤对脑出血后神经组织的保护作用及其机制.方法:采用自体动脉血注入法建立实验性脑出血动物模型.将大鼠随机分为假手术组、空白对照组、宁脑汤组、西药组、中西药结合组,观察神经缺损症状等变化及检测脑组织NF-κB含量.结果:模型组大鼠偏瘫状态明显,脑组织出现水肿,说明自体动脉血注入法建立的大鼠脑出血模型成功.中西药结合组能明显改善实验大鼠的偏瘫状态(P<0.05)降低含最NF-κBP<0.05.结论:宁脑汤对脑出血模型上述指标具有明显的改善,具有神经保护作用.中西药结合组可明显减轻急性期组织损伤,减轻脑水肿,改善预后.既能弥补中药起效缓慢的缺点,又能纠正西药维持时间短的弱点,优势互补,各取所长,在中风病的治疗方面显示出独特的学术优势.     

靶向ERCC1 RNA干扰对人肺腺癌细胞顺铂耐药的逆转

目的:探讨利用RNA干扰技术切除修复交叉互补基因1(excision repair cross-completion gene 1,ERCC1)逆转耐顺铂(cisplatin,CDDP)人肺腺癌细胞A549/CDDP的耐药性。方法:(1)常规体外培养A549/CDDP细胞,以脂质体包裹的ERCC1-siRNA转染细胞,转染浓度分别为100、200、300 nmol/L,并设空白转染、Lip转染对照组,观察转染效果。(2)采用免疫组化SABC法及RT-PCR法分别检测肿瘤细胞转染siRNA后ERCC1基因和蛋白的表达。(3)MTT法检测肿瘤细胞耐药指数,观察ERCC1靶向siRNA逆转A549/CDDP细胞顺铂耐药的效果。结果:(1)Lip组、siRNA-neg组转染效率分别为(56.38±9.82)%、(63.54±4.87)%,SiRNA-ERCC1①组、siRNA-ERCC1②组、siRNA-ERCC1③组转染效率分别为(43.62±6.08)%、(65.85±9.61)%和(78.93±4.86)%。(2)针对ERCC1的siRNA转染A549/CDDP后,细胞ERCC1 mRNA及蛋白表达均下调,siRNA-ERCC1(300 nmol/L)组效应最强,分别下降至(11.19±6.82)%和(20.88±6.57)%(P<0.01)。(3)A549/CDDP细胞转染后耐药倍数减为6.05、4.64、2.94,空载体对照组细胞的耐药倍数为9.6。结论:RNA干扰技术封闭ERCC1基因可较大程度逆转耐顺铂人肺腺癌细胞的耐药性,且呈一定的浓度依赖性;ERCC1基因可作为逆转肺癌耐药治疗的有效靶点。     

X线修复交叉互补基因1缺陷细胞株的建立及其蛋白的表达

目的 运用载体介导的RNA干扰技术靶向抑制人X线修复交叉互补基因1(XRCC1)在支气管上皮细胞中的表达,为研究人XRCC1蛋白在环境化学污染物所致DNA损伤修复中的功能和机制作准备.方法 利用分子克隆技术构建含pU6启动子的XRCC1 RNA干扰特异性绿色荧光蛋白C1载体重组子"pEGFP-C1-U6-dsRNA";以脂质体法将载体重组子转染人支气管上皮细胞,同时以空白细胞和空载体转染细胞作对照;在经G418筛选后,以荧光显微成像技术观察细胞的转染效果,以蛋白印迹法分析转染后细胞中的XRCC1蛋白表达情况.结果 在转染重组子的细胞中,XRCC1蛋白的表达明显下调,仅相当于正常细胞的38.2%.结论 人支气管上皮细胞人X线修复交叉互补基因1的靶向抑制成功.     

粉尘螨2类变应原基因的克隆和序列分析

目的:克隆中国大陆地区粉尘螨2类变应原(Derf2)的cDNA。方法:挑取活的粉尘螨经-70℃冷冻后提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Derf2基因,克隆至pMD18-TSimple平滑载体中测序。结果:筛选出2株长度为436bp的Derf2cDNA片段,核苷酸序列1株与Genbank上的Derf2序列(D10448)碱基有6处不同,同源性为98.6%;另1株有2处不同,同源性为99.7%。结论:粉尘螨2类变应原的基因序列具有多态性,中国大陆地区Derf2的cDNA克隆片段与Genbank上公布的Derf2序列高度同源。     

家族性急性髓系白血病差异表达基因的筛选

目的 建立简便可靠的非同位紊杂交筛选方法,筛选家族性急性髓系白血病cDNA消减文库中的差异表达基因.方法 用地高辛(DIG)标记消减文库cDNA作为探针,通过差异筛选技术进行差异表达片段的筛选,杂交阳性结果经RT-PCR再度验证.结果 DIG标记探针浓度为250～500 pg/μL,效率为48%～96%,并且杂交信号清晰,重现性好.应用DIG标记探针改良的差异筛选技术所得到的阳性结果经RT-PCR验证符合率达到86%.结论 采用DIG标记探针具有高度的灵敏度和良好的特异性,可避免放射性污染,简化实验操作,可作为替代同位素32P-dCTP标记探针的方法.