VEGF、BMP-2、BMP-7蛋白在复发脑胶质瘤术后的表达及分析

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)、重组人骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、重组人骨形态发生蛋白-7(BMP-7)在原发和复发脑胶质瘤患者术后瘤组织中的表达及临床意义。方法 回顾性分析笔者医院神经外科2012年1月~2015年1月72例脑胶质瘤患者首次手术及复发后再手术的完整临床资料和瘤组织标本,采用免疫组化法检测所有患者原发及复发标本蜡块中VEGF、BMP-2、BMP-7蛋白阳性表达水平,分析其与性别、年龄、WHO病理分级、脑胶质瘤原发或复发等临床病理资料的关系。结果 对复发脑胶质瘤患者临床病理资料采用Spearman等级相关分析结果显示,VEGF蛋白表达与WHO病理分级(r VEGF=0.375)及原发、复发情况相关(r VEGF=0.319),BMP-2、BMP-7蛋白表达与原发、复发情况相关(rBMP-2=0.492,rBMP-7=0.381),差异有统计学意义(P＜0.05)。VEGF、BMP-2、BMP-7蛋白在原发脑胶质瘤中的阳性表达率为52.8%(38/72)、61.1%(44/72)、59.7%(43/72),在复发脑胶质瘤中的阳性表达率为68.1%(49/72)、70.8%(51/72)、69.4%(50/72),复发脑胶质瘤中VEGF、BMP-2、BMP-7蛋白表达高于原发,差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 脑胶质瘤复发与VEGF、BMP-2、BMP-7蛋白表达水平呈正相关,是判断脑胶质瘤生物学行为的重要指标,VEGF、BMP-2、BMP-7蛋白可作为脑胶质瘤分子标志物及治疗靶点。     

中链酰基辅酶A脱氢酶增强乳腺癌细胞的侵袭和转移能力

目的探讨中链酰基辅酶A脱氢酶（ACADM）对乳腺癌细胞侵袭和转移能力的影响及潜在作用机制。方法采用大型癌 症基因组数据库分析ACADM在乳腺癌组织及正常组织中表达量。上调及沉默乳腺癌细胞（MCF-7及T47D）中ACADM的表 达,进行体外功能实验（噻唑蓝增殖实验、EdU实验、Transwell小室实验、Boyden体外侵袭实验）,探究ACADM对乳腺癌细胞体 外增殖、迁移及侵袭能力的影响,通过Western blot检测相关信号通路蛋白表达量,建立裸鼠尾静脉转移模型验证ACADM功 能,利用苏木精-伊红染色法诊断肿瘤组织。结果Oncomine样本集提示ACADM的表达水平在乳腺癌组中显著高于正常乳腺 组（P<0.05）,过表达ACADM可提高乳腺癌细胞（MCF-7、T47D）的迁移和侵袭能力且促进了乳腺癌细胞上皮-间质转化过程,而 沉默ACADM后乳腺癌细胞迁移和侵袭能力下降,动物实验进一步验证了ACADM能促进乳腺癌细胞侵袭及迁移能力。结论 ACADM可促进乳腺癌细胞上皮-间质转化过程并提高其迁移、侵袭能力,在乳腺癌中扮演促癌基因的角色。     

乳腺癌化疗后贫血发生率及相关危险因素分析

目的 探讨乳腺癌患者化疗后贫血的发生率及相关危险因素。方法 对2015年1月～2016年12月期间于笔者医院及河南省肿瘤医院乳腺外科住院的583例乳腺癌患者的临床资料进行回顾性分析,统计化疗后血红蛋白(Hb)水平,进行χ2检验及多因素Logistic回归分析探讨贫血发生的危险因素,并分析贫血的诊治情况。结果 583例乳腺癌有328例发生贫血,贫血的发生率为56.26%;贫血的危险因素为病理分期高.多周期化疗.Hb<135g/L.绝经。结论 乳腺癌化疗后贫血发生率较高,可根据患者入院时Hb水平.病理分期.绝经.化疗方案(周期),预测贫血发生情况,给予重视。     

靶向调控TOX3基因对乳腺癌细胞增殖及周期的影响

目的 研究TOX3基因对人乳腺癌细胞增殖能力及细胞周期的影响。方法 采用Western blot法检测已构建的稳定沉默TOX3的ZR-75-1细胞和稳定过表达TOX3的MDA-MB-231细胞中TOX3蛋白的表达。MTT法检测过表达和干扰TOX3基因对乳腺癌细胞增殖活性的影响。平板单克隆实验检测过表达TOX3对MDA-MB-231细胞单克隆形成能力的影响,流式细胞术检测沉默或过表达TOX3后ZR-75-1和MDA-MB-231细胞周期的变化。结果 与阴性对照组比较,稳定沉默TOX3的乳腺癌ZR-75-1细胞TOX3蛋白表达明显下降,过表达TOX3的MDA-MB-231细胞TOX3蛋白表达明显上调。过表达TOX3后,MDA-MB-231细胞的增殖活性明显增强,单克隆形成能力增强,G₀/G₁期细胞所占比例明显减少,G₂/M期细胞比例增多。干扰TOX3后,ZR-75-1细胞增殖活性下降,G₀/G₁期细胞比例增加,G₂/M期细胞比例减少。结论 靶向调控TOX3基因的表达可改变乳腺癌细胞增殖和单克隆形成能力,影响乳腺癌细胞周期。     

转录因子KLF5介导乳腺癌细胞获得性耐药的作用机制

目的:探讨Kruppel样因子5(KLF5)介导乳腺癌获得性耐药的作用机制。方法:间歇刺激法构建对紫杉醇(PTX)耐受的乳腺癌耐药细胞株MDA-MB-231/PTX(MM-231/PTX),并采用细胞计数法(CCK8)检测亲本及耐药细胞的半数抑制浓度值(IC50)及耐药指数(RI),采用流式细胞术分析细胞周期,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测乳腺癌亲本细胞及耐药细胞株中KLF5及抗凋亡蛋白Survivin的表达水平,采用染色质免疫共沉淀(ChIP)法检测KLF5与Survivin基因启动子之间的相互作用。构建KLF5蛋白表达载体质粒pcDNA3. 0-KLF5,含Survivin基因启动子的报告基因质粒pGL3-Basic-Survivin-promoter,采用荧光素酶报告基因法检测KLF5对Survivin基因启动子活性的影响。结果:成功构建对PTX耐受的乳腺癌耐药细胞株MM-231/PTX,细胞的RI为18. 04,并且耐药细胞株对PTX的细胞周期阻滞作用并不敏感;耐药细胞株中KLF5和Survivin蛋白的表达水平均比亲本细胞中明显升高(P<0. 05);ChIP结果显示,KLF5能够结合到Survivin基因的启动子上;荧光素酶报告基因实验结果表明,KLF5能够增强Survivin基因启动子的活性。结论:KLF5能够增强Survivin基因的启动子活性,增加Survivin的转录表达,这可能是乳腺癌获得性耐药的主要原因。     

宫颈病变患者HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检测的临床意义

目的:探讨宫颈病变患者人乳头状瘤病毒(HPV)DNA和HPV E6/E7 mRNA检测的临床意义。方法:将2015年1月至2017年1月在宜昌市第三人民医院进行阴道镜宫颈检查的200例患者分为宫颈上皮内瘤变低级别组(A组,n=67)、高级别组(B组,n=99)及宫颈癌组(C组,n=34),同时纳入妇科炎症组(D组,n=40),进行E6/E7蛋白免疫组化和HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检测。结果:A、B、C组HPV DNA拷贝数、HPV E6/E7蛋白、DNA、mRNA阳性率均高于D组(均为P<0. 05),但A、B、C组的DNA阳性率及DNA拷贝数差异比较不显著(P>0. 05);A组、B组和C组患者的E6/E7 mRNA阳性率均高于D组(P<0. 05),且C、B组的HPV E6/E7 mRNA(阳性率、拷贝数)及蛋白均高于A组(P<0. 05);HPV E6/E7 mRNA检测特异度在低级别宫颈上皮内瘤变中稍低于HPV DNA,在高级别宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中的特异度均相对更高。结论:HPV E6/E7 mRNA检测对宫颈癌发生及发展的检测价值更高。     

Alopecurone B逆转人乳腺癌细胞MCF-7阿霉素耐药株活性研究

目的 研究黄酮化合物Alopecurone B（APB）对人乳腺癌细胞阿霉素耐药株MCF-7/ADR多药耐药的逆转活性及逆转机制。方法 人乳腺癌细胞阿霉素耐药株MCF-7/ADR维持在含有250 ng/mL阿霉素的培养基中,使用MTT法、qPCR、Western blot和流式细胞术研究APB对耐药株P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响。结果 APB能逆转MCF-7/ADR细胞多药耐药,抑制P-gp的功能,下调P-gp基因和蛋白的表达。结论 APB具有强效逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADR多药耐药的效果,其机制涉及对P-gp的调控。      

microRNA启动子区甲基化调控对人肺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭的影响

目的研究microRNA启动子区甲基化水平的变化对几种microRNAs（miRNA34a、miRNA34b、miRNA148a、miRNA203a）表达的影响,并进一步研究该甲基化调控对人肺癌细胞A549增殖、迁移以及侵袭能力的影响。方法不同浓度的去甲基化药物5-氮杂-2′-脱氧胞苷（5-Aza-CdR) 处理人肺癌细胞A549,分别作用24 h、48 h、72 h,采用CCK8法检测细胞增殖情况,计算增殖抑制率。20 μmol/L 5-Aza-CdR处理A549细胞72 h,通过甲基化特异性PCR(MSP)检测A549细胞相关miRNAs启动子甲基化水平的变化;实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测A549细胞相关miRNAs表达水平的变化。20 μmol/L 5-Aza-CdR处理A549细胞0 h、24 h、48 h,采用划痕实验检测细胞迁移能力（计算细胞在24 h和48 h的划痕愈合率）;作用48 h,采用Transwell检测细胞侵袭能力。结果CCK8结果显示,随着5-Aza-CdR的处理浓度升高、时间延长,A549细胞的增殖抑制率逐渐增加。经5-Aza-CdR去甲基化处理后,MSP结果表明,实验组相对于对照组甲基化引物扩增条带减弱,而非甲基化引物扩增条带增强;Real-time PCR结果显示,相关miRNAs表达水平升高（P<0.05）。由划痕实验和Transwell检测结果揭示,经5-Aza-CdR处理后,A549细胞的生长愈合能力降低（P<0.05）,并且侵袭到Transwell小室滤膜下表面的细胞数亦减少（P<0.05）。结论人肺癌细胞A549经5-Aza-CdR去甲基化处理后,miRNAs表达水平升高,进一步抑制肺癌细胞的增殖、迁移以及侵袭能力。     

RECK、MMP 9在三阴性乳腺癌组织芯片中的表达及临床意义

【摘要】 目的 探讨基质金属蛋白酶抑制剂(RECK)、基质金属蛋白酶 9(MMP 9)在三阴性乳腺癌（TNBC）组织、癌旁组织中的表达及与TNBC临床病理的关系。方法 选择绵阳市中心医院乳腺外科2011年5月~2013年7月经病理证实为TNBC的72例石蜡标本及同 患者癌旁组织,利用免疫组化组织芯片技术检测其RECK、MMP 9蛋白的表达。结果 RECK在TNBC组织及癌旁组织中阳性表达率分别为4306%、8056%（P=0000）。TNBC中RECK的表达与临床分期（P=0009）、组织学分级（P=0010）、腋窝淋巴结转移情况（P=0000）相关。MMP 9在TNBC组织及癌旁组织中阳性表达率分别为625%、1528%（P=0000）。TNBC中MMP 9的表达与肿瘤大小（P=0017）、临床分期（P=0001）、组织学分级（P=0001）、腋窝淋巴结转移状况（P=0001）、Ki 67表达情况（P=0034）相关。TNBC中RECK与MMP 9表达呈负相关(r= 0195,P＜005)。结论 RECK的表达缺失与MMP 9过度表达与TNBC浸润、转移有关,有望成为TNBC的预后指标,并且有可能成为TNBC治疗的靶点。     

JunD在浸润性乳腺癌分子亚型中的表达及意义

【目的】分析JunD在浸润性乳腺癌分子亚型及乳腺良性恶性病变中的表达差异及临床意义。【方法】采用免疫组织化学SP法检测JunD在160例浸润性乳腺癌组织、191例乳腺增生组织及20例正常乳腺组织中的表达情况,分析JunD在浸润性乳腺癌分子亚型及乳腺增生性病变中的的表达差异及临床意义。【结果】①与其他分子亚型相比较,JunD在浸润性乳腺癌TNBC亚型中的表达水平明显升高（P<0.05）,其他亚型之间两两比较差异无统计学意义（P>0.05）。②JunD在乳腺癌组织中的表达水平明显低于乳腺增生组织及正常乳腺组织（P<0.01）。③JunD在乳腺癌组织中的高表达率与低组织学分级相关（P<0.01）,与肿物直径大小、年龄、淋巴结转移、ER、PR及临床分期无关（P>0.05）。【结论】JunD在浸润性乳腺癌TNBC亚型中显著高表达,有可能为TBNC亚型乳腺癌患者个性化靶向治疗提供一定方向;JunD在乳腺癌组织中的表达水平明显低于乳腺增生组织及正常乳腺组织,有利于乳腺良恶性病变的鉴别诊断。