基于p38 MAPK/NF-κB通路探索荆防合剂治疗甲型H1N1流感的作用机制北大核心CSCD

目的:基于p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路研究荆防合剂治疗甲型流感的分子机制。方法:将36只Balb/c雌鼠随机分为正常对照组、模型对照组、磷酸奥司他韦0.026 g/kg组、荆防合剂3.9、7.8、15.6 g/kg组,每组6只,适应性饲养3 d后进行造模处理,模型对照组和各给药组滴鼻流感病毒,正常对照组滴鼻等体积的生理盐水。小鼠于感染后第7 d摘取眼球血,测定肺指数,用苏木精-伊红染色(HE)法观察肺部病变情况;用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-10含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肺组织病毒载量及p38 MAPK/NF-κB信号通路相关基因表达,蛋白免疫印迹技术(Western blot)检测肺组织中蛋白表达。结果:造模后,与正常对照组相比,模型对照组肺指数显著增大,肺病毒载量的相对表达量显著升高(P<0.01),血清IFN-γ、IL-2、IL-10含量显著升高,IL-4含量显著降低(P<0.01),肺组织p38 Mapk、Nfkb p65、Ikba mRNA及蛋白表达显著上调(P<0.01);与模型对照组相比,给药后,HE染色显示肺组织病理状况得以改善,荆防合剂可明显降低血清IFN-γ、IL-2、IL-6含量(P<0.05或P<0.01),升高IL-4含量(P<0.01),Real-time PCR和Western blot结果显示荆防合剂可通过下调肺组织p38 MAPK/NF-κB信号通路相关基因或蛋白表达从而发挥抗甲型流感作用。结论:荆防合剂对感染甲型流感小鼠具有保护作用,可能与调控p38 MAPK/NF-κB信号通路,发挥抗炎及免疫调节等作用有关。     

盐酸药根碱对HPV16 E6/E7-HaCaT细胞中NF-κB及C2TA蛋白的影响

目的：探究加味二妙颗粒有效成分盐酸药根碱清除人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）的分子作用机制。方法：利用生物信息学数据库筛查宫颈鳞状细胞癌组织中差异表达基因并对其进行生存分析。体外验证实验利用慢病毒载体构建稳定过表达HPV16 E6/E7蛋白的人角质形成细胞系HaCaT,用盐酸药根碱0.001、0.05、0.2、1、5μmol/L处理HaCaT-HPV16E6/E7细胞系,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测盐酸药根碱对HaCaT-HPV16 E6/E7细胞的影响,采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测盐酸药根碱对HaCaT-HPV16 E6/E7细胞中相关细胞因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-8(IL-8)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,蛋白免疫印迹（Western blot）法检测C2TA蛋白及NF-κB通路相关蛋白的表达,探讨盐酸药根碱在人乳头瘤病毒蛋白E6、E7逃避免疫识别的作用机制。结果：通过数据库筛查得知C2TA与宫颈鳞状细胞癌密切相关,其低表达影响患者的...     

基于TLR4/NF-κB炎性轴的白芥子经皮给药对类风湿性关节炎大鼠调控机制研究

目的：探讨白芥子经皮给药通过Toll样受体4/核因子-κB(TLR4/NF-κB)炎性轴对类风湿性关节炎(RA)大鼠的治疗作用。方法：50只大鼠随机分为对照组(空白对照组)、模型组、阳性药组、白芥子组及白芥子+TLR4激活剂组,每组10只。除对照组外,其余组制备佐剂性RA模型。阳性药组右后足涂抹0.27 g/kg扶他林,白芥子组涂抹4.50 g/kg白芥子涂剂,白芥子+TLR4激活剂组涂抹4.50 g/kg白芥子涂剂同时踝关节注射0.25 mg/kg TLR4激活剂LPS,对照组和模型组涂抹等量的面粉糊作对照,制备模型前3 d开始给药,连续18 d。测量不同时间左右后足肿胀度,末次给药后检测热痛和机械痛阈值、血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),Western blot法检测踝关节滑膜组织中TLR4、NF-κB蛋白表达情况。结果：与模型组比较,阳性药组、白芥子组及白芥子+TLR4激活剂组建模不同时间右后足肿胀度均降低,其中阳性药组和白芥子组均低于白芥子+TLR4激活剂组,白芥子组建模9 d右后足肿胀度低于阳性药组(P<0.05)。与模型组比较,阳性药...     

不同b值条件下心脏体素内不相干运动成像相关参数的一致性

目的观察不同b值条件下心脏体素内不相干运动(IVIM)成像相关参数的一致性。方法对30名健康志愿者行左心室中间部IVIM扫描,以双指数模型获取IVIM参数值慢速表观弥散系数(ADCslow)、快速ADC(ADCfast)及灌注分数f。比较9个b值(0、20、50、80、100、120、200、300、500 s/mm^2)与7个b值(0、20、80、100、200、300、500 s/mm^2)条件下所测参数值的差异,采用组内相关系数(ICC)分析2名医师测量参数结果的一致性,以Bland-Altman检验分析不同b值条件下所测参数的一致性。结果9个与7个b值条件下ADCslow、ADCfast及f差异均无统计学意义(P均>0.05),且2名医师测量IVIM参数的组内及组间一致性均较好(ICC均≥0.66,P均<0.05)。Bland-Altman图显示,9个与7个b值时ADCslow的平均偏差为-0.07×10-3 mm^2/s,一致性界限(-1.87,1.73);ADCfast的平均偏差1.57×10-3 mm^2/s,一致性界限(-72.64,75.77);f的平均偏差1.17%,一致性界限(-13.45,15.79)。结论9个与7个b值条件下心脏IVIM成像各参数值的一致性较好。     

牛蒡子苷元抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对肺炎链球菌脑膜炎大鼠神经元凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨牛蒡子苷元(ATG)抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路对肺炎链球菌脑膜炎大鼠神经元凋亡的影响。方法通过脑内注射Ⅲ型肺炎链球菌建立脑膜炎大鼠模型,并随机分为模型组、ATG低(ATG-L)、中(ATG-M)、高(ATG-H)剂量组以及ATG-H+重组高迁移率组蛋白B1(rHMGB1)组,另取正常大鼠为对照组,10只/组。治疗结束后,对各组大鼠进行神经系统评分;分离大鼠脑组织,检测其病理变化、含水量、IL-1β、IL-6、TNF-α水平以及神经元细胞凋亡,同时检测HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达水平。结果与对照组比较,模型组大鼠神经系统评分显著下降(P<0.05),脑组织含水量、IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平及TUNEL荧光染色阳性细胞数量均显著增加(均P<0.05);ATG-L组、ATG-M组、ATG-H组小鼠神经系统评分均较模型组显著增加(均P<0.05),脑组织含水量、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、TUNEL荧光染色阳性细胞数量、HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65均较对照组显著下降(均P<0.05);ATG-H+rHMGB1组较ATG-H组神经系统评分显著下降(P<0.05),脑组织含水量、IL-1β、IL-6、TNF-α、HMGB1、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65水平及TUNEL荧光染色阳性细胞数量均显著增加(均P<0.05)。结论ATG可抑制肺炎链球菌脑膜炎大鼠神经元凋亡,减轻炎症反应,其机制可能与抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路有关。     

结核分枝菌Ag85B DNA疫苗免疫对小鼠结肠SIgA及菌群的影响北大核心CSCD

目的 探究结核分枝杆菌Ag85B的真核表达质粒pcD-Ag85B经肌肉免疫后对小鼠结肠黏膜SIgA及菌群的影响。方法 以pcDNA3.1+为真核表达载体,将信号肽基因和编码Ag85B的Rv1886c基因共963 bp核苷酸序列连接到pcDNA3.1+,构建真核表达质粒pcD-Ag85B。通过双酶切和测序鉴定无误后,将pcD-Ag85B重组质粒转染中国仓鼠卵巢癌细胞(CHO)并验证其表达。采用微针注射法将pcD-Ag85B重组质粒经大腿肌肉免疫C57BL/6J小鼠;初免后42 d收集小鼠粪便及结肠黏液进行16S RNA高通量测序和菌群结构分析,并测定SIgA特异性抗体效价。结果 成功构建真核表达质粒pcD-Ag85B并检测到Ag85B蛋白的特异性表达,蛋白相对分子质量约为35×10~3,与预期相符。一免疫后42 d,Ag85B组小鼠结肠厚壁菌门-乳杆菌属的罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)和约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)丰度与对照组相比显著增高(均P<0.05);肠粘膜SlgA效价为1∶4500。结论 成功获得表达Ag85B蛋白的真核表达质粒,用该质粒免疫能诱导小鼠结肠粘膜产生体液免疫效应,改善结肠益生菌-乳酸杆菌群丰度。     

柯萨奇B3病毒感染与冠心病患者冠状动脉病变程度及炎性反应的关系北大核心CSCD

目的 探讨柯萨奇B3病毒(CV-B3)感染与冠心病患者冠状动脉病变程度及炎性反应的关系。方法 本院2019年9月-2020年9月收治的50例冠心病患者作为观察组,同期医院体检的健康人员49人作为对照组。分别采用实时荧光定量PCR法和化学发光法检测两组患者CV-B3感染情况和血清炎性因子水平;采用冠状动脉造影对观察组冠状动脉病变程度进行Gensini评分,分析CV-B3感染与冠心病患者冠状动脉病变程度及炎性反应的关系。结果 观察组患者CV-B3感染率24.00%,对照组为8.16%,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组中心肌梗死、心绞痛及隐匿性冠心病患者CV-B3感染率分别为50.00%、16.67%和8.33%,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者感染后4、12、24 hHL-1心肌细胞及间充质干细胞的CV-B3基因拷贝数与对照组比较差异具有统计学意义(均P<0.05)。观察组CV-B3阳性患者的Gensini评分高于阴性患者(P<0.05)。观察组患者超敏C-反应蛋白(HS-CRP)及同型半胱氨酸(HCY)含量均高于对照组(均P<0.05)。观察组的TNF-α和IL-6水平均高于对照组(均P<0.05)。结论 冠心病患者CV-B3感染可加重冠状动脉病变程度,增强炎性反应,不利于患者康复。     

新型冠状病毒RBD区重组流感病毒的拯救及初步鉴定北大核心CSCD

目的利用流感反向遗传技术,以B型流感病毒B/Yamagata/16/88株作为骨架,表达新型冠状病毒(SARSCoV-2)S蛋白的受体结合域(RBD),构建以B型流感病毒为载体的新型冠状病毒疫苗候选株。方法基因合成新冠病毒参考株S蛋白上的RBD基因片段(318-541aa),对B型流感病毒B/Yamagata/16/88/的NS1片段进行设计改造并插入RBD序列,构建重组质粒NS110-RBD。将NS110-RBD与其余7个骨架株重组质粒共转染293T细胞和MDCK细胞,拯救表达新型冠状病毒RBD区重组流感病毒,对拯救出的毒株进行形态学、分子生物学鉴定及病毒滴度和Western blot检测。结果成功拯救出重组流感病毒株并命名为rIBV-NS110-RBD。PCR鉴定RBD目的基因大小正确,测序表明拯救病毒株的序列正确,在透射电镜下观察到拯救病毒株的病毒粒子具有流感病毒粒子的典型特征。经测定,拯救株rIBV-NS110-RBD在MDCK细胞上的病毒滴度为10^(5.5) TCID_(50)/ml,在鸡胚上的病毒滴度为10^(6.5) EID_(50)/ml,血凝效价最高达2_(5);Western Blot检测到RBD的表达,其分子质量为35ku。结论成功拯救出高表达新型冠状病毒RBD蛋白的高血凝效价的重组流感病毒株,该病毒具有流感病毒粒子的典型特征,为以B型流感病毒为载体作为新型冠状病毒疫苗的研发提供了新思路。     

新型冠状病毒Delta变异株引起的广州市荔湾区本土疫情流行特征分析

目的 分析新型冠状病毒（新冠病毒）B.1.617.2（Delta）变异株引起的广州市荔湾区本土疫情流行特征,为Delta变异株疫情防控工作提供参考依据。方法 资料来源于中国疾病预防控制信息系统传染病报告信息管理系统和广州市荔湾区CDC,收集2021年5月21日至6月18日广州市荔湾区新冠病毒感染者（确诊病例和无症状感染者）相关信息。采用频数（构成比）、直方图、百分比堆积面积图等对本次Delta变异株疫情的流行病学特征进行描述,并应用潜伏期、动态再生系数（R_t）估计进行分析。结果 截至6月18日广州市荔湾区累计报告新冠病毒感染者127例,年龄范围2~85岁,<18、18~59和≥60岁年龄组分别占18.9%（24/127）、43.3%（55/127）和37.8%（48/127）。男女性别比为1：1.35（54：73）;职业以离退休人员32.3%（41/127）、家务及待业18.1%（23/127）和学生16.5%（21/127）为主;主要集中在荔湾区的白鹤洞街道（70.1%,89/127）与中南街道（23.6%,30/127）;Delta变异株的中位潜伏期6（范围：1~15）d;临床分型以普通型（64.6%,82/127）为主;基本再生系数（R₀）=5.1,R_t先上升后下降,最高达7.3;传播方式以密闭空间为主,具有明显的家庭聚集性,主要传播场所为家庭（26.8%,34/127）、餐馆（29.1%,37/127）、小区（3.9%,5/127）和市场（3.1%,4/127）。密切接触者筛查（66.1%）和社区排查（33.1%）是发现感染者的主要途径。结论 本次疫情新冠病毒Delta变异株的传染性较强,广州市荔湾区本土疫情具有明显的家庭聚集性,新冠病毒感染者以18~59和≥60岁年龄组为主。     

用体外器官培养方法研究EDCs对新生小鼠睾丸的影响

目的 通过已建立的小鼠睾丸体外培养系统,研究四种内分泌干扰物（Endocrine Disrupting Chemicals,EDCs）对男性内分泌系统的影响。 方法 将新生小鼠的睾丸组织在体外环境中培养24h,而后在培养基中分别加入浓度为0.1μM, 1μM, 10μM and 100μM的四种（DEHP、MEHP、NP、p, p’-DDE）内分泌干扰物并培养72h,同时设置对照组;培养结束后进行组织学观察,测定冻存培养基中睾酮和抑制素βB (INH-βB)的分泌水平,同时测定细胞色素P450侧链裂解酶(P450Scc)、3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、细胞色素P45017α-羟化酶(P450C17)和波形蛋白（vimentin）的基因表达情况。 结果 所有剂量组中睾酮的分泌水平均发生改变;P450Scc、3β-HSD、P450C17和INH-βB蛋白质的表达及mRNA水平均受到四种内分泌干扰物的影响（P<0.05）;DEHP和MEHP降低了波形蛋白的mRNA水平（P<0.05）,而NP和p, p’-DDE对波形蛋白没有显著影响（P>0.05）。 结论 本研究建立的体外培养新生小鼠睾丸模型中,所选的四种已知EDCs改变了两种睾丸激素水平,三种类固醇合成酶以及与支持细胞功能相关的波形蛋白的表达。