半夏总蛋白提取及其动态变化研究

目的 优选出半夏总蛋白提取的最适方法并研究不同生长时期总蛋白量及成分的变化,为半夏药用成分的监控及合理采收提供科学依据。方法 采用丙酮沉淀法、95% (NH₄)₂SO₄盐析法、TCA-丙酮法和Tris-饱和酚法提取半夏总蛋白,筛选半夏总蛋白提取的最佳方法。分别于半夏出芽期、全苗期、珠芽期、佛焰苞期及倒苗期采集样品,分为新鲜组和干燥处理组,提取样品总蛋白,进行SDS-PAGE电泳检测及Bradford浓度测定。结果 丙酮沉淀法、95% (NH₄)₂SO₄盐析法、TCA-丙酮法和Tris-饱和酚法提取的半夏总蛋白量分别为0.369、0.678、1.082、0.493 mg/mL;新鲜半夏5个不同生长时期总蛋白量占块茎的质量分数分别为出芽期4.53 mg/g、全苗期2.28 mg/g、珠芽期2.79 mg/g、佛焰苞期7.61 mg/g、倒苗期10.21 mg/g;干燥半夏5个不同生长时期总蛋白量占块茎的质量分数分别为出芽期31.85 mg/g、全苗期18.52 mg/g、珠芽期42.08 mg/g、佛焰苞期28.56 mg/g、倒苗期56.84 mg/g;新鲜半夏块茎中蛋白含有15条蛋白带,干燥处理半夏块茎中蛋白含有5条蛋白带。结论 TCA-丙酮法是半夏总蛋白提取的最佳方法,不同生长时期的半夏块茎中蛋白成分各异,倒苗期总蛋白量最高。     

川半夏种茎大小对产量和质量的影响

目的 在大田条件下,研究不同大小川半夏种茎对产量和质量的影响,为川半夏规范化栽培提供理论依据。方法 选取川半夏主产区3份不同来源地的材料,分别按种茎直径（d）大（d＞1.5 cm）、中（1.0 cm＜d≤1.5 cm）和小（0.5 cm＜d≤1.0 cm）分级,随机区组试验设计,在其生育期内定期考察出苗数、珠芽产生数和抽薹数等性状;采收后考察其增重率和增殖率,并测定其主要化学成分。结果 不同种茎大小的川半夏出苗、珠芽产生和抽薹等生长节律基本一致。但生长期间平均出苗数、平均抽薹数、平均珠芽产生数、单株增重率、单株增殖率以及生物碱和次黄嘌呤核苷量间差异达极显著水平,而β-谷甾醇量无显著差异。结论 在川半夏的生产栽培中,选取0.5 cm＜d≤1.0 cm的种茎作为种源,种茎活力旺盛,可明显达到增产效果,同时生产出的半夏次黄嘌呤核苷量较高,生物碱量也较高。     

仲景方中半夏用药剂量及配伍比例研究

在考证容量古今折算标准的基础上,采用文献考证药物品种、产地、炮制与药物实测相结合的方法,并利用数据统计学处理方法,对仲景方中以体积和个数单位计量的半夏用药比例开展研究.研究得出,仲景方中半夏当为天南星科植物三叶半夏Pinellia ternata (thunb) Breit干燥根茎的生用品经水洗而成,半夏半升(100 mL)为61.29 g,半夏一枚为0.75 g.古今用药剂量有别,现代临床使用半夏,应该了解仲景方中半夏在方中的配伍比例,结合国家药典,根据具体病情合理掌握药量.     

半夏药材中蛋白质IEF电泳图谱的研究

目的通过对半夏及其近缘植物的蛋白质电泳图谱比较,研究半夏药材的电泳鉴别方法。方法应用等电聚焦(isoe lectrofocus ing,IEF)技术,对不同产地半夏及其近缘植物块茎进行比较。结果半夏具有稳定的IEF电泳图谱,显示具有8条特征蛋白质带,并测定了其等电点(P I)值,半夏与其几种近缘植物的IEF谱有明显的区别。结论半夏IEF电泳图谱可作为半夏药材的鉴别依据,半夏特征蛋白质的P I值为半夏的鉴定和蛋白质分离纯化提供了参数。     

半夏凝集素基因的克隆、生物信息学分析及其蛋白的亚细胞定位

目的 克隆半夏凝集素基因,并对其进行生物信息学分析和亚细胞定位。方法 以半夏Pinellia ternata新鲜叶片的DNA为模板,根据Genbank上的半夏凝集素的基因序列（GU593718.1）设计引物,克隆了半夏凝集素（PTA）基因,并构建植物表达载体pI1300-CaMV35S-PTA-GFP,在农杆菌GV3101中进行表达且观察了其在烟草中瞬时表达。结果 所克隆的PTA的开放阅读框为810 bp,其编码269个氨基酸;具有1条信号肽、2个B-lectin保守区域和3个甘露糖结合基序;PTA氨基酸序列与NCBI中所报道的半夏、掌叶半夏P. pedatisecta、滴水珠P. cordata凝集素的氨基酸序列的同源性分别达到97%、85%和83%;初步推测其定位于膜上,现已在NCBI中登记（登录号KF154979）。结论 本实验通过对半夏凝集素的生物信息学分析和亚细胞定位分析,为进一步研究半夏凝集素的抗病虫害机制奠定了基础。     

Ca2+对悬浮培养半夏类原球茎生长及次生代谢物累积的影响

目的研究Ca2+对半夏类原球茎生长、高温胁迫及次生代谢产物量的影响。方法以半夏叶柄为外植体,固体培养基培养获得类原球茎,悬浮培养,采用不同质量浓度Ca2+处理,测定类原球茎生长速率、抗逆性指标,以及生物碱、鸟苷、有机酸的量。结果在(25±2)℃条件下培养,随Ca2+质量浓度增加,半夏类原球茎生长呈慢-快-慢变化趋势,质量浓度为440 mg/L时,生长速率达到最大值;不同处理半夏类原球茎中生物碱、鸟苷、有机酸量差异显著,Ca2+质量浓度为440 mg/L时,生物碱量最高(0.158%),Ca2+质量浓度为660 mg/L时,鸟苷、有机酸累积量最高(分别为0.017 3%、0.608%)。在(35±2)℃条件下,质量浓度为0～660 mg/L,随Ca2+质量浓度升高,SOD、POD活性逐渐增强,Ca2+质量浓度为660 mg/L时,活性最高,但Ca2+质量浓度为880 mg/L时,SOD、POD活性均降低;不同质量浓度Ca2+处理MDA量变化不显著。结论一定质量浓度的Ca2+能促进半夏类原球茎生长,增强抗逆性,提高有用次生代谢产物的量。     

半夏不同栽培品的成分比较

目的：比较半夏不同栽培品的成分。方法：采用多指标定量法。结果：半夏新品Y系、鄂半夏一号的蛋白质、总氨基酸及水溶性浸出物等含量较高;来风半夏、荆半夏、昭通半夏的生物碱、总酸及醇溶性浸出物等含量较高。结论：半夏不同栽培品的各类成分间存在此消彼长的现象。     

中药半夏及其伪品的鉴定

目的:鉴别半夏真伪,以达到用药安全。方法:通过药材性状、显微鉴别、薄层色谱法、紫外扫描法进行鉴别。结论:半夏伪品及混淆品不能替代正品,使用时必须准确鉴别,以避免误用。     

半夏不同栽培品的成分比较

目的:比较半夏不同栽培品的成分.方法:采用多指标定量法.结果:半夏新品Y系、鄂半夏一号的蛋白质、总氨基酸及水溶性浸出物等含量较高;来风半夏、荆半夏、昭通半夏的生物碱、总酸及醇溶性浸出物等含量较高.结论:半夏不同栽培品的各类成分间存在此消彼长的现象.     

施用氨基酸矿质等几种有机肥料对半夏总生物碱含量影响的比较研究

目的研究四种肥料五种不同处理对半夏pinellia ternate(Thunb.)Breit.)总生物碱含量的影响,以提高栽培半夏的有效成分含量,实现高质高效和利润的最大化。方法利用完全随机实验设计研究四种不同的肥料对半夏有效成分增产的效果。结果在α=0.05水平上,几种肥料与对照不存在显著性差异;α=0.05水平上,DANCAN检验表明矿质肥料、菌剂与对照差异性不显著,根施液态氨基肥与叶喷液态氨基肥与对照差异性显著,叶喷液态氨基肥有效含量最高为0.067 3%,根施液态肥的含量为0.053%比对照0.048%分别高出39.6%和10.3%结论液态氨基肥能够提高半夏有效成分含量,可以进一步研究其最佳剂量和时间及使用方式,达到半夏药材的高质高效。