普藏红胶囊中红景天苷含量的高效液相色谱法测定

目的:建立测定普藏红胶囊中红景天苷含量的高效液相色谱法。方法:样品以80％甲醇超声提取。采用μBondapakC_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,10μm),乙腈-水(4:96,磷酸调pH2.8)为流动相,流速为1.0mL·min~(-1),检测波长为276nm。结果:红景天苷在30～200μg·mL~(-1)范围内,峰面积与其浓度线性关系良好(r=0.999 5);平均回收率为100.4％;重现性试验RSD为0.71％(n=6)。结论:该法准确、简便、快速,适用于红景天生药及本品质量控制。     

长鞭红景天细胞悬浮培养体系优化研究

目的 优化长鞭红景天Rhodiola fastigiata细胞悬浮培养体系及生长条件。方法 研究基本培养基、激素、碳源、氮源等因素对长鞭红景天细胞生长和红景天苷产量的影响,建立高产红景天苷的细胞悬浮培养体系。结果 MS培养基＋BA 5.0 mg/L＋2, 4-D 0.1 mg/L＋蔗糖30 g/L为长鞭红景天细胞悬浮培养的最适培养条件。结论 对培养条件进行优化,为利用长鞭红景天细胞大规模生产天然活性成分奠定基础,为缓解野生长鞭红景天资源的匮乏提供可行途径。     

2-氨基磷酸茚和茉莉酸甲酯对高山红景天愈伤组织生长和红景天苷积累的影响

目的考察2-氨基磷酸茚(2-aminoindan-2-phosphate,AIP)和茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MJ)对高山红景天愈伤组织生长和红景天苷含量的影响。方法将培养10 d的高山红景天愈伤组织,分别接种在含有不同浓度的AIP和MJ的固体培养基中,每两天取样一次,测定愈伤组织生物量和红景天苷含量的变化趋势。结果 AIP和MJ最佳浓度分别为10μmol.L-1和200μmol.L-1时红景天苷含量达到最大值,分别为6.52 mg.g-1和5.98 mg.g-1,是空白对照组的1.43和1.32倍;愈伤组织中红景天苷的含量均高于野生药材中的含量。结论 AIP和MJ可显著提高红景天苷含量,高浓度的MJ和AIP对高山红景天愈伤组织的生长有抑制作用。     

HPLC同时测定大血藤中红景天苷和绿原酸的含量

目的建立高效液相转换波长法,同时测定大血藤中红景天苷和绿原酸的含量。方法采用Inertsil ODS-SP色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱;流速1 mL.min 1,柱温30℃,检测波长220,325 nm。结果红景天苷和绿原酸分别在0.061 7～1.234μg(r=0.999 7)和0.030 2～0.605μg(r=0.999 9)与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率(n=6)分别为97.8%和98.1%,RSD分别为1.9%和1.7%。结论该方法同时测定大血藤中的红景天苷和绿原酸的含量,方法简单、准确度高、重复性好,可为大血藤药材的质量控制提供参考。     

红景天苷对负性心理应激下模拟航渡并高强度运动雄性大鼠下丘脑-垂体-性腺轴的调节

目的:通过红景天苷对模拟航渡并高强度运动大鼠的干预,观察干预后大鼠下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴的功能及超微病理学的改变。方法:将6周龄的SD雄性大鼠随机分为非应激对照组(NS组,n=10)、训练对照组(TC组,n=12)和红景天苷干预组(ST组,n=12)。NS组不接受任何刺激,在生理盐水灌胃1周后即进行取样。TC组和ST组大鼠经过10d递增负荷跑台训练,分别用生理盐水和红景天苷灌胃1周后,进行模拟航渡及高强度运动,结束即刻取血,使用放免法测定大鼠血清睾酮(T)、皮质酮(CORT)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、促黄体生成素(LH)和促性腺激素释放激素(GnRH);HE染色观察睾丸组织病理结构;电镜下观察垂体、睾丸超微结构。结果:①TC组大鼠与NS组相比,血清T水平显著下降;灌服红景天苷后与TC组相比,血清T水平显著增高,与NS组比较差异无统计学意义;②HE染色示3组大鼠的睾丸组织病理无明显变化;③电镜检查示TC组垂体细胞胞浆中分泌颗粒显著减少,而ST组与TC组相比胞浆中分泌颗粒的数目增多明显;TC组睾丸Leydig细胞线粒体肿胀,电子密度增高,嵴减少或消失,ST组睾丸Leydig细胞中见线粒体结构趋向于正常,嵴大多数清晰,可见大小不等深染的分泌颗粒。结论:负性心理应激及高强度的运动训练会抑制HPG轴的功能,灌服红景天苷对HPG轴具有保护作用。     

红景天苷对HepG2细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的 红景天苷是从红景天的根茎部中提取得到的,是红景天中含量最高的天然活性化合物。该实验旨在研究红景天苷对人源性肝癌细胞（HepG2细胞）增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 选取未作任何处理的HepG2细胞作为空白组,以终浓度为20、40、80 μmol·L^-1红景天苷处理的HepG2细胞作为红景天苷组。采用多功能细胞分析仪测定红景天苷对HepG2细胞增殖的影响,划痕实验测定红景天苷对HepG2细胞迁移能力的影响,Transwell小室实验测定红景天苷对HepG2细胞侵袭能力的影响,倒置显微镜观察红景天苷对HepG2细胞形态的影响,透射电镜观察红景天苷对HepG2细胞中线粒体的影响,流式细胞术分析红景天苷对HepG2细胞凋亡及周期分布的影响,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）测定红景天苷对HepG2细胞相关凋亡基因的影响,蛋白免疫印迹法测定红景天苷对HepG2细胞相关迁移、侵袭及凋亡蛋白的影响。结果 与空白组比较,红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）细胞指数均明显下降（P<0.05）,愈合面积均明显增加（P<0.05）,且呈时间和浓度依赖性;红景天苷组（20、80 μmol·L^-1）中能够穿过Matrigel基质胶的HepG2细胞数量呈浓度依赖性减少;红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）总凋亡率呈浓度依赖性升高,且阻滞细胞于G₂/M期（P<0.05）;红景天苷组（20、80 μmol·L^-1）上皮性钙黏附蛋白（E-cadherin）表达呈浓度依赖性升高（P<0.05）,神经钙黏附蛋白（N-cadherin）表达呈浓度依赖性降低（P<0.05）。红景天苷组（20、40、80 μmol·L^-1）胱天蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA表达、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）、Caspase-3蛋白及胱天蛋白酶-9（Caspase-9）蛋白表达均呈浓度依赖性升高（P<0.05）,肌动蛋白结合蛋白（Girdin）及Bcl-2表达均呈浓度依赖性降低（P<0.05）。结论 红景天苷对HepG2细胞的增殖、迁移及侵袭均具有抑制作用,且通过线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。表明红景天苷可作为一种潜在的肝癌化疗候选药物。     

同时制备克级高纯度酪醇、大花红天素及红景天苷的工艺研究

酪醇、大花红天素及红景天苷3种化合物均是红景天的主要活性成分,具有广泛的药理活性.该实验首次从大花红景天中同时分离出克级高纯度的酪醇、大花红天素及红景天苷,红景天经70％乙醇提取后,以3种化合物的收率为指标,对树脂工艺进行优化筛选,再利用硅胶柱分离纯化,最终同时得到克级高纯度的酪醇、大花红天素及红景天苷,经HPLC测定,3种化合物的纯度均超过98％.该方法工艺简洁、操作简单、有机溶剂用量少、收率及重复率都很高,适合3种化合物的同时制备.     

黄酒产地对酒炙女贞子中红景天苷、特女贞苷和女贞苷的影响

目的:研究生品女贞子经不同产地黄酒炮制前后有效成分的变化规律,探索黄酒规格对酒女贞子有效成分的影响,为其质量标准的提高提供依据。方法:取净制生品女贞子及酒制女贞子(黄酒闷润2 h后蒸制4 h),利用高效液相色谱法测定生品女贞子及酒女贞子中特女贞苷、女贞苷、红景天苷3种成分的含量。结果:女贞子经不同产地的黄酒炮制后,红景天苷含量升高,特女贞苷和女贞苷的含量均有所降低。但3个产地黄酒炮制后的酒女贞子饮片之间的特女贞苷、女贞苷和红景天苷的含量基本没有差别。结论:黄酒的产地对酒女贞子中特女贞苷、女贞苷及红景天苷含量影响不大。     

红景天苷对心肌细胞缺氧/复氧的保护作用

目的观察红景天苷抗心肌缺氧/复氧损伤的保护作用,探讨红景天苷抗心肌缺氧可能的信号通路。方法原代培养的心肌细胞加入不同浓度的红景天苷缺氧24h,噻唑蓝法测定细胞增殖;原代培养的心肌细胞分为5组：正常对照组;缺氧/复氧组;缺氧/复氧加红景天苷100μg/ml组;缺氧/复氧加红景天苷100μg/ml再加细胞外调节激酶抑制剂20μg组;缺氧/复氧加细胞外调节激酶抑制剂20μg组。加药后先孵育60min,再缺氧培养4h,随后常氧培养2h。全自动生化分析仪测定心肌酶（乳酸脱氢酶、肌酸肌酶、谷草转氨酶）含量,Westernblot法检测细胞外信号调节激酶蛋白表达。结果红景天苷增加了缺氧/复氧损伤心肌细胞的活力,降低了心肌细胞乳酸脱氢酶和肌酸激酶的渗漏,使磷酸化细胞外信号调节激酶蛋白表达水平明显降低。结论红景天苷对缺氧诱导的心肌细胞损伤有保护作用,此作用可能通过细胞外信号调节激酶信号通路发挥作用。     

红景天苷对骨髓间充质干细胞增殖的影响

本研究旨在探索红景天苷对骨髓MSC增殖及干细胞因子（SCF）分泌的影响.应用密度梯度离心和贴壁培养法,体外分离并扩增MSC,应用流式细胞术和成脂及成骨诱导法进行MSC鉴定,并观察红景天苷对MSC增殖、细胞周期及分泌SCF的影响.结果表明,红景天苷可影响MSC的增殖,以1.5 mg/ml浓度刺激MSC增殖作用最强,在24、48、72 h内存在一定的时间依赖性,并且红景天苷明显增加S、G1/M期细胞比例,尤以1.5 mg/ml作用明显.应用1.5 mg/ml红景天苷与MSC共培养48 h,其培养上清中SCF含量明显上调（P＜0.01）,其mRNA表达也明显增加（P＜0.01）.结论：在一定剂量浓度下红景天苷对MSC有明显增殖促进作用,并可提高MSC的CSF基因表达和分泌.