五味子粉对D-半乳糖致小鼠衰老模型的影响

目的观察五味子粉对D-半乳糖所致小鼠衰老模型的影响。方法 72只昆明种小鼠随机分为对照组、模型组、脑康灵(0.810 g/kg)组和五味子粉高、中、低剂量(3.00、1.50、0.75 g/kg)组。小鼠颈背部sc 1.25 g/kg D-半乳糖制备衰老模型,连续40 d,于第11天开始ig给予相应剂量的药物,连续给药30 d。于第39天进行小鼠行为学避暗实验;末次给药后2h,检测小鼠脑匀浆、肝匀浆及血浆中丙二醛(MDA)水平,全血中过氧化物酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及还原型谷胱甘肽(GSH)水平;光镜下观察各组小鼠脑、肝脏、胸腺、脾脏的形态变化。结果与模型组比较,各剂量五味子粉均可延长小鼠避暗潜伏期,减少小鼠明暗穿梭次数;不同程度降低小鼠脑匀浆、肝匀浆及血浆中MDA水平,升高全血中CAT、SOD活性及GSH水平;不同程度升高小鼠脾脏、胸腺和脑指数,降低肝脏指数。结论五味子粉可显著改善衰老模型小鼠的各项生化指标和组织病理状态。     

干燥综合征中医药研究模型建立方法探讨

中医药的现代化需要进行实验研究,而建立科学、创新、可重现的动物模型是实验研究成功与否的重要环节和前提条件。利用现代实验手段对干燥综合征的中医药治疗效果进行研究,首要解决的问题是如何复制干燥综合征动物模型。本研究结合实验数据和文献资料进行分析,认为理想的干燥综合征中医药研究模型是结合西医的病因模拟方法和中医"证"的模拟方法,并在二者之间寻找最大契合度。     

以数学模型对中药药效进行综合评价的意义和思考

随着我国加入WTO，如何使中药在全世界得以推广使用，成为目前迫切需要解决的问题，不可否认，与西药相比，中药本身存在某些弱点（如：作用机理不明确、质量难控、量效关系复杂及在单个指标上药效强度不如西药等）应该为中药目前所面临的困镜负一定的责任，但是随着近几十年来的研究，我们也看到了中药在治疗疾病上的优势，这些优势也是西药在现阶段很难实现的，比如：具有丰富的多效性，表现出双各调节的作用。在某些药效中有不反弹不耐受的特点，副作用较弱，适合弱势群体等。因此，在正视中药的弱点的同时我们也应该看到它的优点，其中，如何对其药效进行科学的评价就是一个必须面对的重要问题。当前文献报道的中药药效评价方法主要是采用数学模型的方法对中药的多项药效参数进行综合评价，涉及的模型有最简单的加减乘除，也有矩阵法及模糊数学的应用，在评价参数的选择上同样也是多种多样。尽管这些评价方法所涉及的模型源于西医观点，其方法还不完善，但它们给予我们如何按中医观点中对中药药效进行科学的评价提供了很好的借鉴和探索的方向。     

用生物测定法研究肉苁蓉多糖在体外的吸收转运

 目的 用生物测定法考察肉苁蓉多糖（CDPS）在Caco-2细胞模型的吸收转运。方法 用培养于Transwell上的Caco-2细胞模型研究CDPS的吸收转运;采用生物活性测定法测定CDPS在接受侧介质中的含量。结果 Caco-2细胞单层极性与完整性符合实验要求,CDPS在1.87 ~ 40 mg·L-1内,与RAW264.7细胞NO分泌呈明显量效关系,转运量随供侧（AP侧）浓度的增加而增大,不同浓度CDPS P_app( A-B)均小于1 × 10-7 cm·s-1。结论 采用生物活性测定CDPS的P_app具可行性,该药属吸收不良药物,口服吸收率应小于1％。     

双柏炎痛喷雾剂中有效成分(蒽醌类)含量与药效的相关分析

目的：探讨双柏炎痛喷雾剂中有效成分（蒽醌类）含量与药效的相关性。方法：采用正交试验法对双柏炎痛喷雾剂药材撮工艺进行筛选,同时选用有效成分（蒽醌类）含量和药 实验作为跟踪指标。结果：发现大黄素、总蒽醌、游离蒽醌等的含量与肿胀率成负相关,随着成分含量的增加肿胀率降低。结论：大黄素、总蒽醌、游离蒽醌等蒽醌类成分确为方中有效成分。     

断藤益母汤对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞MEKK2及CIA小鼠关节炎的影响

目的:为了研究断藤益母汤(DTYMD)在类风湿关节炎中对丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)上游激酶的调控作用,阐明DTYMD抗炎的分子机制。方法:培养成纤维样滑膜细胞,将细胞分为空白组,模型组,DTYMD高、中、低质量浓度组(1 000,800,600 mg·l~(-1)),甲氨蝶呤(MTX)组(20μmol·l~(-1))组,采用蛋白免疫印迹法(Western blot),实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)对丝分裂原活化蛋白激酶激酶激酶2(MEKK2)的蛋白和mRNA表达进行分析。将42只雄性DBA/1J小鼠随机分为6组,每组7只,分别为正常组,模型组,MTX组(2 mg·kg~(-1)),DTYMD低、中、高剂量组(6. 25,12. 5,25 mg·kg~(-1))。除正常组外,其他5组均采用二次免疫法构建胶原诱导型关节炎(CIA)模型。给药结束后,取小鼠后肢踝关节行苏木素-伊红(HE)染色并进行关节病理评分。结果:与模型组比较,DTYMD以浓度依赖方式抑制成纤维样滑膜细胞活性(P 0. 01);与空白组比较,模型组细胞增殖率升高(P 0. 01)。与模型组比较,DTYMD高、中质量浓度组降低MEKK2蛋白及mRNA的表达(P 0. 05,P 0. 01)。与模型组比较,DTYMD不同剂量组均降低细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)的表达(P 0. 01);与空白组比较,模型组MMP-1,IL-6,TNF-α表达明显上升(P 0. 05,P 0. 01)。在动物实验中,与模型组比较,DTYMD高、中剂量组可以降低CIA小鼠关节肿胀度(P 0. 05,P 0. 01);与正常组比较,模型组小鼠二次免疫后关节明显肿胀(P 0. 05)。在CIA小鼠踝关节HE染色中,与空白组比较,模型组小鼠病理学评分升高(P 0. 01);与模型组比较,DTYMD高、中剂量小鼠关节病理评分明显下降(P 0. 05,P 0. 01)。结论:DTYMD可能通过下调MEKK2对细胞因子IL-6,TNF-α,MMP-1负性调控,从而缓解类风湿关节炎的炎症反应。     

西红花酸改善大鼠酒精性脂肪肝作用机制研究

目的研究西红花酸对酒精性脂肪肝大鼠的作用及其机制。方法将30只雄性SD大鼠随机分为健康对照组、模型组及西红花酸组,每组各10只。模型组及西红花组大鼠均行酒精性脂肪肝造模,同时西红花酸组予西红花酸50mg／（kg·d）灌胃预防性治疗。比较3组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、甘油三酯（TG）水平及肝脏极低密度脂蛋白（VLDL）分泌速率,肝脏TG、游离脂肪酸（FFA）含量,肝脏脂肪酸线粒体β-氧化速率及脂肪酸过氧化物酶体β-氧化速率,苯胺羟化酶（ANH）、乙醇脱氢酶（ADH）及乙醛脱氢酶（ALDH）活性,肝脏超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽（GSH）含量及丙二醛（MDA）含量。结果模型组与西红花酸组大鼠血清ALT和TG含量、肝脏TG和FFA含量、肝质量系数均高于健康对照组（P〈0．01,P〈0．05）,而西红花酸组均低于模型组（P〈0．01,P〈0．05）;模型组及西红花酸组大鼠肝脏脂肪酸线粒体β-氧化速率、过氧化物酶体β-氧化速率和VLDL分泌速率均低于健康对照组（P〈0．05,P〈0．01）,且西红花酸组脂肪酸线粒体β-氧化速率高于模型组（P〈0．05）;与健康对照组比较,模型组ANH活性及MDA含量升高（P〈0．05）,ADH、ALDH、SOD活性及GSH含量降低（P〈0．01）,而西红花酸组ANH活性及MDA含量较模型组降低（P〈0．05）,ADH、ALDH、SOD活性及GSH含量升高（P〈0．05）。结论西红花酸对酒精性脂肪肝有改善作用,其作用机制可能是通过加速肝脏线粒体脂肪酸氧化,增强血浆中TG消除速度,减轻肝脏脂肪堆积,增强ALDH活性,进而加速乙醇和乙醛的清除。     

兔颈动脉狭窄模型的建立

目的寻求一个家兔颈动脉粥样硬化模型的简单、重复性好的方法。方法利用双氧水化学烧灼12只、大白兔颈动脉内膜,并分别在术后3 d、1周、4周行DSA检查,观察颈动脉狭窄模型的动态变化。结果成功获得颈动脉狭窄模型。结论本方法可以建立一种成熟的颈动脉粥样硬化模型,而且此方法简单、重复性好,有利于进行颈动脉粥样硬化的实验研究。     

蒿甲醚抗SD大鼠原位脑胶质瘤血管生成的 实验

 目的探讨蒿甲醚（Artemether）抗SD大鼠原位脑胶质瘤血管生成作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度蒿甲醚对大鼠C6脑胶质瘤细胞株的生长抑制作用,计算半数抑制浓度(IC₅₀)。采用立体定位仪在SD大鼠大脑皮质层接种C6脑胶质瘤细胞（1×10⁶/μl）40只,雌、雄各半;随机分为5组,每组8只。在接种第3天后,各组采用灌胃给药法连续给药10天。于接种后的第20天解剖大鼠,经活体左心室灌注4%多聚甲醛,固定肿瘤的全脑标本。在大鼠脑部接种穿刺点做冠状切口,按垂直和水平方向测量肿瘤大小。肿瘤体积=a²bπ∕6(a为肿瘤的短径,b为肿瘤的长径)。全脑标本用4%多聚甲醛固定,肿瘤组织做病理观察,免疫组化方法检测移植瘤组织微血管密度。结果各实验组血管计数分别为Ⅰ组（39±4）,Ⅱ组（29±6）,Ⅲ组（12±8）,Ⅳ组（10±5）,生理盐水组为（52±7）。各实验组血管计数均明显少于生理盐水对照组,差异有统计学意义(分别P<0.05, P<0.01)。各实验组SD大鼠原位脑胶质瘤体积较对照组显著减小。结论在一定剂量范围内,蒿甲醚具有明显抑制SD大鼠原位脑胶质瘤血管生成作用;蒿甲醚抑制原位脑胶质瘤生长和转移的机制之一是透过血脑屏障抑制脑胶质瘤血管生成。     

RNAi沉默MCM7基因对人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠移植瘤影响研究

目的探讨微小染色体维持蛋白7(miniehromosome maintenanceprotein7,MCM7)基因RNAi(RNA interference)的重组慢病毒载体,对人肝癌细胞SMMC-7721 MCM7基因表达和裸鼠移植瘤生长的影响。方法构建重组逆转录慢病毒载体MCM7-shRNA,以MCM7基因沉默重组慢病毒颗粒(LV-shRNA-MCM7)感染SMMC-7721细胞,作为实验组;以对照慢病毒颗粒(LV-shRNA-NC)感染SMMC-7721细胞,作为阴性对照组;空白对照组常规培养,不做任何处理。通过嘌呤霉素筛选出稳定转染细胞株。3组细胞分别接种至裸鼠皮下,建立人肝癌裸鼠移植瘤模型。观察裸鼠成瘤情况、移植瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线;4周后测定肿瘤体积和质量,并用RT-PCR、实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法及免疫组织化学法检测移植瘤中MCM7的表达情况。结果 MCM7-shRNA慢病毒载体构建成功。裸鼠接种癌细胞后第6天均有肿瘤形成,与空白对照组和阴性对照组相比,实验组的肿瘤生长速度明显减慢,实验组、阴性对照组和空白对照组的瘤体平均体积分别为(27.72±7.80)、(81.86±10.91)和(79.75±16.61)mm3,差异有统计学意义,F=61.949,P<0.05;实验组、阴性对照组和空白对照组的瘤体平均质量分别为(0.19±0.06)、(0.501±0.14)和(0.509±0.18)g,差异有统计学意义,F=18.41,P<0.05。实验组MCM7mRNA的相对表达量为0.253±0.198,阴性对照组1.213±0.548,空白对照组1.201±0.744,实验组相比阴性对照组和空白对照组明显下降,差异有统计学意义,F=4.091,P<0.05;实验组MCM7蛋白相对表达量为0.207±0.015,阴性对照组1.116±0.062,空白对照组1.088±0.040,实验组相比阴性对照组和空白对照组明显下降,差异有统计学意义,F=292.778,P<0.05。MCM7蛋白在阴性对照组和空白对照组中阳性表达率均为100%(10/10),在实验组中为30%(3/10),实验组明显低于阴性对照组和空白对照组,差异有统计学意义,χ2=18.261,P<0.001。结论慢病毒沉默SMMC-7721细胞MCM7基因表达能有效抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,MCM7基因可能成为肝癌基因治疗的有效靶点。