蛋白质组学技术鉴定的PC12细胞的细胞骨架蛋白

目的:使用蛋白质组学的技术手段,鉴定大鼠肾上腺皮质细胞瘤细胞系PC12细胞内的细胞骨架蛋白。方法:提取PC12细胞的蛋白质,建立固相pH梯度双向电泳图谱,应用图像扫描仪及ImageMaster 2D Elite分析软件获得蛋白质点的数字化和匹配性信息,挑选匹配良好的高峰度蛋白点,进行基质辅助激光解吸／电离飞行时间质谱(MALDI- TOF-MS)分析,鉴定。结果:用二维电泳技术分离,并用MALDI-TOF-MS成功鉴定出5个PC12细胞的细胞骨架蛋白。结论:PC12细胞蛋白质组中部分细胞骨架蛋白胶图位点的建立,为今后探讨这一类蛋白在神经系统疾病中的作用奠定了基础,并提供了新的侯选治疗靶点。     

黄芩苷温敏凝胶在家兔体内的药动学研究

目的：研究黄芩苷温敏凝胶直肠给药后在家兔体内的药动学。方法：家兔经直肠分别给予黄芩苷温敏凝胶剂和水溶性栓剂,采用高效液相色谱法检测血清中的药物浓度,色谱柱为Shim-packVP-ODSC1（8150mm×4.6mm,5μm）,流动相为甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2,V/V/V）,流速为0.8mL·min^-1,柱温为40℃,进样量为10μL,检测波长为274nm。结果：黄芩苷温敏凝胶与黄芩苷水溶性栓剂主要药动学参数Cmax分别为（3.639±0.23）和（2.832±0.18）μg·L^-1;AUC0～∞分别为（796.46±65.35）和（493.86±42.52）μg·h·L^-1。与水溶性栓剂比较,黄芩苷温敏凝胶直肠给药后,Cmax和AUC0～∞均有增加,且有显著性差异,其相对生物利用度为161.2%。结论：黄芩苷制成温敏凝胶直肠给药后,生物利用度显著提高。     

丙烯酰胺和葡萄糖烯丙基酰胺共聚水凝胶的合成与性能

用葡萄糖内酯与烯丙基胺反应制备了葡萄糖烯丙基酰胺单体（AAG），然后与丙烯酰胺和亚甲基双丙烯酰胺共聚得到含糖结构的水凝胶，研究了交联剂浓度和单体配比对共聚合的影响，用红外光谱和热重分析对其结构和热稳定性进行了表征，并计算了干凝胶的热分解活化能，研究了温度、盐的浓度，溶液的PH值及蛋白质对水凝胶的膨胀比的影响，结果发现水凝胶的膨胀比随着温度的提高或盐浓度的增大而略有增加，在高或低的PH时膨胀比由于糖组分的水解也有一定的增加，水凝胶在蛋白质丰在时发生收缩，表明二者发生了键合作用。     

运用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳和图像软件分析TPA处理NIH3T3细胞前后的蛋白质表达谱差异

目的建立及优化聚丙烯酰胺双向凝胶电泳技术,并应用图像软件分析伏波醇酯(TPA)刺激前后小鼠成纤维细胞NIH3T3系的蛋白质差异表达,为进一步鉴定与TPA生物学作用有关的蛋白质奠定基础。方法分别提取TPA处理前后的NIH3T3细胞总蛋白质,经双向电泳,硝酸银染色后用软件分析显示两者蛋白质的差异表达。结果软件分析显示TPA刺激前后的细胞蛋白质有明显的差异表达。结论高质量的双向电泳设备、熟练的电泳操作和图像处理技能是寻找稳定可信的功能蛋白质的必要条件。     

复合基质细胞衍生因子-1β、转化生长因子-β1的新型温敏性壳聚糖水凝胶修复兔关节软骨缺损

目的 探讨复合基质细胞衍生因子(SDF)-1β、转化生长因子(TGF)-β1的新型温敏性壳聚糖水凝胶结合软骨下骨钻孔修复兔关节软骨缺损的可行性.方法 依照软骨缺损处理方法的不同将48侧股骨髁随机均分为3组:(1)凝胶组:软骨下骨钻孔+复合SDF-1β、TGF-β1的新型温敏性壳聚糖水凝胶充填软骨缺损;(2)钻孔组:单纯软骨下骨钻孔;(3)对照组:不作处理.术后4、8、12周取材观察其大体、光镜、透射电镜、免疫组织化学情况.结果 除对照组仅有纤维组织修复外,其余2组均有不同程度的软骨修复,但结合组的修复在组织细胞形态、超微结构、Ⅱ型胶原含量等方面均明显优于钻孔组,组织学评分两组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 复合SDF-1β、TGF-β1的新型温敏性壳聚糖水凝胶结合软骨下骨钻孔能有效修复兔膝关节软骨的全层缺损.     

Differential proteome analysis of diabetes mellitus type 2 and its pathophysiological complications

The prevalence of Diabetes Mellitus Type 2 (DM 2) is increasing every passing year due to some global changes in lifestyles of people. The exact underlying mechanisms of the progression of this disease are not yet known. However recent advances in the combined omics more particularly in proteomics and genomics have opened a gateway towards the understanding of predetermined genetic factors, progression, complications and treatment of this disease. Here we shall review the recent advances in proteomics that have led to an early and better diagnostic approaches in controlling DM 2 more importantly the comparison of structural and functional protein biomarkers that are modified in the diseased state. By applying these advanced and promising proteomic strategies with bioinformatics applications and bio-statistical tools the prevalence of DM 2 and its associated disorders i-e nephropathy and retinopathy are expected to be controlled.     

Utilization of recombinant Fab fragments in a cTnI immunoassay conducted in spot wells

OBJECTIVES: To evaluate the performance of a new cTnI immunoassay utilizing site-specifically biotinylated recombinant Fab fragments on recently established spot wells. DESIGN AND METHODS: Two different cTnI-specific recombinant site-specifically biotinylated Fab fragments were produced. The performance of the new sandwich-type cTnI immunoassay in spot wells was evaluated in terms of binding capacity, assay kinetics and assay sensitivity and compared with a cTnI immunoassay carried out in conventional microtitration wells. Furthermore, the functionality of the recombinant Fab fragments was compared to the corresponding monoclonal antibodies in assay with one, two or three capture antibodies. RESULTS: The signal-to-background level was improved, providing an analytical detection limit of 0.002 microg/l with a surface of two capture Fab fragments. The spot wells increased the signal levels 2-fold and a further 4-fold improvement was detected with the Fab fragments already after 5 min assay time. CONCLUSIONS: The spot-concept in combination with site-oriented capture Fab fragments carries great promise as a very useful approach to improve the immunoassay performance of future point-of-care cTnI assays.     

两种硅水凝胶角膜接触镜在近视患者LASIK术后早期应用的比较研究

目的 比较近视患者接受准分子激光原位角膜磨镶术(LASIK)术后早期佩戴2种硅水凝胶角膜接触镜的上皮修复、术后并发症及眼部不适症状.方法 前瞻性选取2019年4月至10月于首都医科大学附属北京友谊医院行LASIK手术的近视患者35例(70眼),采用自身对照,LASIK术后随机给予35眼配戴Lotrafilcon A角膜...     

改性聚乙二醇水凝胶封装生长因子和内皮祖细胞及其可控性缓释

背景：大量研究表明,为了实现聚合物材料的内皮细胞化,向材料表面负载生物活性因子是一种重要的手段,并且在聚合物材料表面引入人体血管内皮细胞将有助于提高材料的生物相容性。 目的：合成封装碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子和内皮祖细胞的水凝胶,观察生长因子的缓释效果,以及内皮祖细胞在水凝胶中的培养状态。 方法：合成含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽段的聚乙二醇水凝胶,先后加入大鼠内皮祖细胞、碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子溶液、基质金属蛋白酶反应底物肽段溶液。将上述水凝胶浸泡于PBS中,每12h用ELISA法检测上清液中生长因子的水平;72h后在水凝胶PBS溶液中再分别加入不同质量的基质金属蛋白酶2（100,1000ng）、基质金属蛋白酶9（100,1000ng）,每12h用ELISA法检测上清液中生长因子的水平。将封装内皮祖细胞的聚乙二醇水凝胶置于培养基中培养5d,消化后用流式细胞仪检测存活细胞数。 结果与结论：12—72h内,碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子的释放百分比一直维持在41％左右,72h后分别加入不同质量的基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9,发现两种细胞因子的释放百分比呈稳步上升,72h后已达95％以上,且基质金属蛋白酶质量越大两种因子的检测释放百分比越高。培养5d后,在聚乙二醇水凝胶中仍有88．17％的内皮祖细胞存活。表明白组装聚乙二醇水凝胶既可以实现碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子的可控性释放,又可以支持内皮祖细胞的增殖生长。