兔膀胱出口部分梗阻所致逼尿肌超微结构的改变

目的　观察兔膀胱出口部分梗阻后逼尿肌细胞超微结构的改变。　方法　建立雄性兔膀胱出口部分梗阻动物模型 ,利用透射电镜观察其逼尿肌细胞内超微结构 ,应用ImagineTool图像分析软件检测粗面内质网面积和线粒体密度。　结果　梗阻组逼尿肌细胞内单位面积平均 1 1 5 .2 8μm2 ,胞质中粗面内质网面积 (5 .377± 2 .31 8) μm2 ,较对照组的 (0 .476± 0 .31 9) μm2 明显扩大 ;线粒体相对密度为 1 .0 2 7± 0 .0 64 ,较对照组的 0 .830± 0 .0 58明显下降 ,P均 <0 .0 1。　结论　膀胱出口部分梗阻后逼尿肌细胞内质网扩张 ,提示其合成蛋白质功能增强 ,从而引起膀胱壁增厚 ;而线粒体水肿明显 ,密度下降 ,提示逼尿肌细胞能量代谢障碍 ,导致其收缩功能下降     

维生素C碳点对口腔鳞状细胞癌KB细胞增殖、自噬和凋亡的影响

目的：研究维生素C碳点对口腔黏膜鳞状细胞癌（口腔鳞癌）KB细胞的杀伤作用,探讨其相关作用机制。方法：以不同浓度（5、10、20、40和80 mg·L^-1）维生素C碳点体外处理口腔鳞癌KB细胞作为实验组,以0 mg·L^-1维生素C碳点组作为空白对照组。MTT法检测各组细胞增殖率,克隆形成实验检测各组细胞克隆形成能力,Western blotting法检测各组细胞中自噬相关蛋白LC3蛋白表达水平,流式细胞术检测KB细胞的凋亡率。结果：与空白对照组比较,20、40和80 mg·L^-1维生素C碳点组KB细胞的增殖率及克隆形成能力均明显降低（P<0.01）,40 mg·L^-1维生素C碳点组KB细胞中LC3 Ⅱ蛋白表达水平和细胞凋亡率明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：维生素C碳点能够有效地杀伤口腔鳞癌KB细胞,抑制KB细胞的增殖并减弱其克隆形成能力,其杀伤作用可能与KB细胞自噬和凋亡的发生有关。     

内质网应激在乙酰化低密度脂蛋白引起的人单核巨噬细胞凋亡中的作用

目的 观察在脂质引起佛波酯（PMA）促分化后人单核细胞源性巨噬细胞（THP-1）凋亡中有无内质网（ER）应激，探讨巨噬细胞凋亡在慢性肾脏疾病并发加速进展的动脉粥样硬化和心血管事件中的作用。 方法 密度梯度法提取低密度脂蛋白，制备乙酰化低密度脂蛋白（ACLDL）。Hoechst染色定量计数凋亡细胞比例。caspase3,7活性测定检测凋亡。油红O染色观察细胞内脂滴变化。酶学反应法测定细胞内游离胆固醇（FC）和胆固醇酯（CE）的含量。Western印迹和实时定量PCR测定细胞乙酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶（ACAT）、生长停滞及DNA损伤基因（CHOP）和Bcl-2的表达。 结果 ACLDL呈剂量依赖和时间依赖促进细胞凋亡。100 mg/L ACLDL与THP-1巨噬细胞作用24 h，油红O染色下细胞内脂滴显著增多，细胞内FC和CE含量显著增加（P < 0.01）。Western印迹显示，ACLDL 100 mg/L作用3～24 h，ACAT1、CHOP表达较作用前持续升高，Bcl-2表达持续降低。实时定量PCR显示，ACLDL作用12～24 h，较作用前促进CHOP mRNA表达（P < 0.01），抑制Bcl-2 mRNA表达（P < 0.01）；ACLDL作用24 h点，较无ACLDL作用组促进CHOP mRNA表达（P < 0.01），抑制Bcl-2 mRNA表达（P < 0.01），但对ACAT1表达没有影响。 结论 在ACLDL引起的THP-1巨噬细胞凋亡中存在ER应激。     

4-苯基丁酸对糖尿病肾病大鼠的作用

目的 探讨化学分子伴侣4-苯基丁酸（4-PBA）对糖尿病肾病（DN）大鼠的治疗作用及其机制。 方法 54只大鼠随机分为正常对照组（NC）、糖尿病肾病组（DN）和4-PBA治疗组（4-PBA）,每组各18只。在治疗第4、8及12周末分别检测各组大鼠肾质量指数（KI）、24 h尿蛋白排泄率（UAER）、血肌酐（Scr）、尿素氮(BUN)、尿丙二醛（MDA）含量和超氧化物岐化酶（SOD）活性;观察肾脏病理改变;实时荧光定量PCR法检测各组大鼠肾组织p47phox mRNA的表达变化;Western印迹检测p47phox和硝基酪氨酸（NT）的蛋白表达变化。 结果 与NC组大鼠比较,在4、8和12周时,DN大鼠的KI显著增高（P < 0.05）,UAER（mg/24 h）也显著增高（4.92±0.70 比 0.26±0.07、 5.29±0.83 比0.28±0.08、5.54±0.81比0.29±0.04,均P < 0.05）。12周时病理显示DN大鼠肾小球系膜细胞增生,系膜基质积聚;而与DN组大鼠比较,4-PBA治疗组大鼠KI显著降低（P < 0.05）,UAER（mg/24 h）亦显著降低（4、8和12周分别为3.71±0.37、3.47±0.36和3.28±0.40,P < 0.05）,4-PBA能显著减轻肾脏的病理变化。在4、8和12周,与NC组大鼠比较,DN大鼠肾组织p47phox mRNA表达分别升高了154.72%、148.60%和91.95%（均P < 0.05）;p47phox蛋白表达分别升高了118.00%、140.10%和177.82%（均P < 0.05）;硝基酪氨酸蛋白表达分别升高了45.29%、59.13%和89.28%（均P < 0.05）;尿MDA含量分别增加了2.05倍、2.26倍和2.43倍;尿SOD活性分别下降了64.78%、71.29%和79.32%。与DN组比较,在8和12周时,4-PBA治疗组DN大鼠肾组织p47phox mRNA和蛋白表达均显著减少（均P < 0.05）;硝基酪氨酸蛋白表达显著减少（P < 0.05）,且与NC组差异已无统计学意义。另外,在4~12周,4-PBA治疗可显著减少DN大鼠尿中MDA含量,增加尿SOD活性（均P < 0.05）。 结论 4-PBA能显著抑制糖尿病大鼠肾脏病理变化,其机制可能与抑制肾组织氧化应激有关。     

Apogossypolone, a novel inhibitor of anfiapoptotic Bcl-2 family proteins, induces autophagy of PC-3 and LNCaP prostate cancer cells in vitro

Limited treatment options are available for aggressive prostate cancer. Gossypol has been reported to have a potent anticancer activity in many types of cancer. It can increase the sensitivity of cancer cells to alkylating agents, diminish multidrug resistance and decrease metastasis. Whether or not it can induce autophagy in cancer cells has not yet been determined. Here we investigated the antiproliferative activity of apogossypolone （ApoG2） and （-）-gossypol on the human prostate cancer cell line PC3 and LNCaP in vitro. Exposure of PC-3 and LNCaP cells to ApoG2 resulted in several specific features characteristic of autophagy, including the appearance of membranous vacuoles in the cytoplasm and formation of acidic vesicular organelles. Expression of autophagy-associated LC3-Ⅱ and beclin-1 increased in both cell lines after treatment. Inhibition of autophagy with 3-methyladenine promoted apoptosis of both cell types. Taken together, these data demonstrated that induction of autophagy could represent a defense mechanism against apoptosis in human prostate cancer cells.     

雷公藤甲素对U251细胞自噬活性的影响及机制研究

目的 探讨雷公藤甲素对U251细胞自噬活性的影响及机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测雷公藤甲素对U251细胞的增殖抑制率、半数抑制浓度(IC50);免疫荧光化学法测定细胞中LC3-Ⅱ表达,Western blot法测定LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin-1、磷酸化P70、磷酸化Erk、磷酸化AKT蛋白的表达.结果 雷公藤甲素作用于U251细胞后,细胞增殖受抑制,24 h的IC50为0.73 μmol/L,48 h的IC50为0.27μmol/L.免疫荧光法测定6、12、24 h后LC3-Ⅱ水平增高;Western blot法测定LC3-Ⅱ水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值随时间增高;Beclin-1水平增高,磷酸化P70、磷酸化Erk表达降低、磷酸化AKT无明显变化.结论 雷公藤甲素可抑制U251细胞增殖并促进自噬,并可通过上调Beclin-1表达和抑制mTOR的活性来促进自噬.     

内质网应激相关蛋白与CXCL12蛋白在特发性肺纤维化中的表达及意义

目的 探讨内质网应激相关蛋白及CXCL12在特发性肺纤维化中的表达及意义.方法 收集荆州市中心医院2004～2014年诊断为特发性肺纤维化且存有活检或手术标本的患者共18例,并收集正常肺组织20例作为对照,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测内质网应激相关蛋白(GRP78、CHOP)及CXCL12蛋白(SDF-1)的表达,通过逆转录PCR(RT-PCR)检测肺组织中GRP78 mRNA及CXCL12 mRNA的表达.结果 与对照相比,肺纤维化患者肺泡上皮中GRP78、CHOP、CXCL12蛋白表达均上调,且GRP78 mRNA及CXCL12 mRNA也表达上调.结论 内质网应激相关蛋白及CXCL12在特发性肺纤维化的发病过程中起重要作用,可能参与了特发性肺纤维化的发生与发展.     

自噬对口腔鳞状细胞癌CAL-27和KB细胞放疗敏感性的影响及其机制

目的：利用自噬抑制剂联合放射疗法作用于口腔鳞状细胞癌CAL-27和KB细胞,探讨自噬对口腔癌放射治疗敏感性的影响及其作用机制。方法：选择人口腔鳞状细胞癌CAL-27和KB细胞,分为对照组、氯喹（CQ）组、3-甲基腺嘌呤（3-MA）组、放射组（IR组）及联合放射组（CQ+IR组和3-MA+IR组）。应用MTT法检测细胞生存率,采用免疫荧光法激光共聚焦显微镜观察CAL-27细胞自噬水平（即LC3Ⅱ免疫荧光强度）,Western blotting法检测自噬相关蛋白LC3和beclin-1表达水平,AnnexinV/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：与IR组比较,联合放射组细胞生存率明显降低（P < 0.05）。IR组细胞自噬水平明显高于对照组、CQ组、3-MA组和联合放射组（P < 0.05）。IR 组LC3和beclin-1蛋白表达水平明显高于对照组和联合放射组（P < 0.05）。与对照组比较,IR组和联合放射组细胞凋亡率明显升高（P < 0.05）;与IR组比较,联合放射组细胞凋亡率也明显升高（P < 0.05）。结论：放射疗法可以诱导口腔鳞状细胞癌细胞自噬水平升高。自噬抑制剂可以通过对口腔鳞状细胞癌细胞的增殖抑制及促凋亡作用,提高其对放射治疗的敏感性。     

着色性干皮病C组基因蛋白缺失对膀胱癌细胞自噬的影响

目的 探讨膀胱癌细胞中着色性干皮病C组基因(xeroderma pigmentosum group C,XPC)蛋白缺失对自噬的影响.方法 利用shRNA策略,建立稳定干扰XPC的膀胱癌T24细胞模型,蛋白印迹技术检测干扰XPC后自噬表征蛋白LC3Ⅱ的表达,瞬时转染GFP-LC3,荧光显微镜观察细胞荧光聚集情况,CCK-8法检测细胞的增殖状况,免疫印迹技术检测自噬及凋亡相关蛋白的表达.结果 成功建立干扰XPC的膀胱癌T24细胞模型;干扰XPC后,膀胱癌T24细胞自噬小体的形成[(1.53±0.81)％ vs(3.30 ±0.70)％,P＜0.05]明显减少,顺铂作用下膀胱癌T24细胞自噬小体的形成[(2.19±0.37)％ vs(3.20 ±0.29)％,P＜0.05]明显减少;顺铂促进XPC缺失后的膀胱癌T24细胞自噬;XPC缺失后的自噬为非保护性自噬.结论 XPC蛋白参与调控膀胱癌T24细胞的自噬.