大肠癌患者VEGF和Endostatin的表达及其与临床病理特征的关系

目的：探讨大肠癌患者手术前后血清血管内皮生长因子（VEGF）和Endostatin的动态变化规律及其与临床病理特征的关系。方法：ELISA法检测大肠癌患者（大肠癌组）术前及术后2周血清VEGF和Endostatin水平,并与大肠腺瘤患者（大肠腺瘤组）和健康对照者（对照组）进行比较。结果：1）大肠癌组术前血清VEGF水平显著高于大肠腺瘤组及对照组（P均〈0.01）。2）大肠癌组术前血清Endostatin水平显著高于大肠腺瘤组及对照组（P均〈0.01）。3）大肠癌组术前血清VEGF、Endostatin水平与原发肿瘤大小、细胞分化程度、区域淋巴结转移、肝转移及Dukes分期密切相关（P均〈0.05）,与性别、肿瘤部位等因素无关（P〉0.05）。4）大肠癌组术后2周血清VEGF水平较术前显著下降,而血清Endostatin水平较术前升高（P均〈0.01）。结论：大肠癌患者血清VEGF和Endostatin水平升高,且与原发肿瘤大小、细胞分化程度、区域淋巴结转移、肝脏转移及Dukes分期等因素有密切关系;血清VEGF和Endostatin水平是评价大肠癌恶性行为、预测浸润和转移程度的有效指标。     

分子标记物预测直肠癌新辅助放化疗效果初步评价

目的：寻找预测直肠癌新辅助治疗效果的分子标志物。方法：对26例行新辅助治疗的进展期中低位直肠癌的治疗前活检标本的K-ras基因进行测序,同时通过免疫组织化学方法对分子标志物增殖细胞核抗体（Ki-67）、核转录因子（NF-KB）、细胞周期蛋白依赖性激酶1（CDK1）进行检测。对手术标本行病理分析和肿瘤消退分级评估。结果：本组病例新辅助治疗后获得病理完全缓解（pCR）的患者7例（26．9％）均为K-ras基因野生型,治疗后降期患者17例（65．4％）。K-ras基因是否突变同新辅助放化疗（CRT）能否达到pCR密切相关（P=0．048）。K-ras基因野生型患者的降期率和肿瘤消退率均为77．8％（14／18）,同突变型的降期率和肿瘤消退率比较P=0．063。结论：中低位直肠癌患者新辅助治疗前K-ras基因野生型可能预示着较好的新辅助治疗效果。     

重症急性胰腺炎病程后期并发急性胆囊炎危险因素分析

目的：探讨重症急性胰腺炎（SAP）病程后期并发急性胆囊炎（AC）的危险因素。方法：采用病例对照研究的方法,回顾性收集确诊的20例SAP并发AC（SAP-AC）患者为病例组和86例SAP患者为对照组的各项资料,采用单因素和多因素非条件Logistic回归法筛选危险因素。结果：单因素Logistic回归分析显示Balthazar’CT评分、APACHEⅡ评分、全身并发症、局部并发症、生长抑素时间、EN持续时间、输血、手术等12个变量影响并发AC的发生;多因素Logistic回归分析显示APACHEⅡ评分（OR=1.333）、肠道营养（EN）持续时间（OR=1.020）、胰头部坏死组织感染（OR=3.301）为并发AC的重要影响因素。结论：APACHEII评分越高、EN持续时间越长、胰头部坏死组织感染,其并发AC的风险性就越大,均为危险因素。     

热休克蛋白47在转化生长因子β1诱导肾小管间质纤维化中的作用

目的 探讨热休克蛋白47（HSP47）在肾小管间质纤维化中的作用及其可能机制。 方法 常规培养人肾小管上皮细胞（HK-2）,分为对照组、转化生长因子β1（TGF-β1）组、HSP47-siRNA组。RT-PCR检测HSP47、胶原Ⅳ、纤连蛋白（FN）、组织型纤溶酶原激活物抑制剂1（PAI-1）的mRNA表达。Western印迹检测HSP47、胶原Ⅳ、FN蛋白表达。ELISA检测PAI-1的蛋白量。 结果 HK-2细胞有HSP47表达。不同浓度TGF-β1（0、2.5、5、10 μg/L）干预不同时间（12、24、48 h）时,HSP47基因和蛋白表达呈浓度和时间依赖性增高,10 μg/L TGF-β1干预HK-2细胞48 h时,HSP47 mRNA和蛋白表达最强。不同浓度 TGF-β1（0、5、10 μg/L）干预HK-2不同时间（12、24、48 h）时,胶原Ⅳ、FN 、PAI-1 mRNA和蛋白表达亦呈浓度和时间依赖性增高,10 μg/L TGF-β1作用48 h时,3者mRNA和蛋白表达最强。与TGF-β1组比较,HSP47-siRNA组的HSP47、胶原Ⅳ、FN、PAI-1 mRNA和蛋白表达都明显下调。 结论 HSP47可促进肾小管间质纤维化,其机制可能与上调胶原Ⅳ、FN、PAI-1表达有关。     

胆道肿瘤的潜在标志物Mrp14

目的 探讨胆道肿瘤特异性的标志物,为胆道肿瘤的早期诊断、判断预后、监测复发以及治疗等提供帮助,同时为进一步研究胆道肿瘤的发病机制提供线索。方法 收集经病理结果证实的胆道癌和胆囊癌患者的组织、胆汁标本以及良件胆道和胆囊疾病患者的组织、胆汁标本,应用双向电泳和MALDI-TOF-MS质谱技术检测出恶性和良性组织、恶性和良性病变患者胆汁之间差异表达的蛋白。对同时高表达于胆道癌、胆囊癌及恶性病变胆汁的蛋白Mrp14进行Western blot、免疫组化验证,RT-PCR监测基因表达水平。结果3组蛋白标本双向电泳后质谱成功鉴定出30个差异表达的蛋白,其中Mrp14同时在胆道癌、胆囊癌及恶性病变胆汁中高表达。Western blot、免疫组化及RT-PCR验证其在蛋白和基因水平于恶性组织中高表达。结论 Mrp14在胆道系统恶变后表达增高,可能为胆道肿瘤发生、发展的候选肿瘤标志物。     

抑制miRNA-21表达对胆管癌细胞凋亡、侵袭的影响及其靶基因探讨

目的 探讨抑制miRNA-21表达对胆管癌细胞株凋亡、侵袭的影响及其可能调控的靶基因。方法通过RNAi技术抑制胆管癌细胞株RBE中miRNA-21的表达并加以验证。通过荧光定量PCR技术及蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测RBE细胞中RECK基因表达的改变。应用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。用体外侵袭实验分析胆管癌细胞侵袭能力的改变。结果miRNA-21在胆管癌细胞株RBE中的表达得到有效抑制,并且RECK基因及其蛋白的表达明显上调。流式细胞仪显示RBE细胞凋亡率明显增高,且抑制miRNA-21的表达后胆管癌细胞的侵袭性明显下降。结论抑制miRNA-21的表达可促进RBE细胞的凋亡,并降低其侵袭能力,RECK作为miRNA-21的靶基因参与调控过程。     

Tumor volume to fetal weight ratio as an early prognostic classification for fetal sacrococcygeal teratoma

Purpose

This study was designed to develop a prognostic factor for fetuses with sacrococcygeal teratoma (SCT) that may be useful to predict outcome and guide counseling early in pregnancy. We hypothesize that, in fetuses with SCT, the ratio of tumor size to estimated fetal weight in the second trimester predicts outcome.

Methods

We retrospectively reviewed charts of all patients evaluated at our Fetal Center for SCT between 2004 and 2009. Estimated fetal weight and tumor volume were calculated based on prenatal ultrasound or fetal magnetic resonance imaging. Patients were stratified based on tumor volume to fetal weight ratio (TFR), and their outcomes were analyzed by Fisher's Exact test.

Results

Tumor volume to fetal weight ratio before 24 weeks' gestation was predictive of outcome. Those with a TFR less than or equal to 0.12 (n = 5) had a significantly better outcome than patients with a TFR greater than 0.12 (n = 5, P < .05). All patients with poor outcomes had a TFR greater than 0.12 by 24 weeks' gestation. A TFR greater than 0.12 predicted poor outcome with 100% sensitivity and 83% specificity. All 4 patients who developed hydrops had a TFR greater than 0.12.

Conclusion

In our series of fetuses with SCT, TFR before 24 weeks' gestation correlates with outcome. This novel, prenatal diagnostic tool may be useful in prenatal counseling and for early identification of high-risk fetuses.     

乳腺癌表皮生长因子受体-2分子靶向治疗临床应用策略

乳腺癌分子靶向治疗显著改善了人表皮生长因子受体-2（HER-2）阳性患者的疗效,本文总结了HER-2靶向治疗中若干临床应用策略,包括复发转移乳腺癌患者转移病灶需要重活检进行HER-2重检测;曲妥珠单抗治疗进展后继续应用或者换用拉帕替尼均可获益;乳腺癌临床实践指南（NCCN）推荐HER-2阳性大于1cm肿瘤辅助化疗同时联合曲妥珠单抗治疗,目前曲妥珠单抗标准治疗时间为1年;目前NCCN不推荐新辅助采取双重靶向药物治疗;在HER-2阳性乳腺癌新辅助、辅助、复发转移治疗阶段,均可能产生靶向治疗耐药,区分为原发耐药与继发耐药;在临床实践中建议根据患者耐药类型选择后续靶向治疗,同时需要继续寻找耐药相关生物学指标,预测耐药的发生,从而使患者从分子靶向治疗中最大程度获益。     

缓释PDGF-BB的纳米珍珠层/聚乳酸/纤维蛋白胶复合支架的制备

[目的]探讨缓释血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)的纳米珍珠层/聚乳酸/纤维蛋白胶复合支架的制备方法及其性能.[方法]采用溶剂浇铸-粒子沥滤法制备聚乳酸支架(S1)和纳米珍珠层/聚乳酸支架(S2),接着将PDGF-BB与纤维蛋白胶混合注入S2,冷冻干燥后制成缓释PDGF-BB的纳米珍珠层/聚乳酸/纤维蛋白胶复合支架(S3).3种支架通过万能测试机测试抗压强度、扫描电子显微镜观察表面形貌以及阿基米德法测定孔隙率;利用ELISA法检测S3降解过程中PDGF-BB释放量.[结果]3种支架材料均具有良好的三维多孔结构,孔径分别为(330.0 ±55.6)μm、(322.5±50.8)μm和(303.3±47.0)μm,差异无统计学意义(P>0.05);孔隙率分别为81.0%±1.1%、82.5%±0.8%和80.2%±0.7%,差异无统计学意义(P>0.05);抗压强度分别为(3.6 ±0.12)MPa、(5.0±0.35)MPa和(5.1 ±0.26)MPa,S1与S2和S3有显著性差异(P<0.01).ELISA实验结果表明支架中复合的PDGF-BB释放长达30 d,呈持续缓慢释放.[结论]缓释PDGF-BB的纳米珍珠层/聚乳酸/纤维蛋白胶复合支架为三维多孔结构,具有较好的力学性能,持续缓慢释放PDGF-BB,有望成为一种理想的骨组织工程支架材料.     

生长分化因子5诱导人骨髓间充质干细胞微团成软骨分化的研究

[目的]探讨应用生长分化因子5(growth differentiation factor 5,GDF-5)诱导人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hMSCs)微团成软骨分化的可行性及效果。[方法]体外分离培养hMSCs,取第3代细胞实验。将hMSCs分别用无血清H-DMEM和含10、20、50、100 ng/ml GDF-5的软骨诱导液(chondrogenic medium,CM)诱导,显微镜下观察细胞形态变化,MTT法检测各组细胞的增殖情况。诱导2周后重悬细胞,以5×106/ml的细胞密度离心构建微团,继续诱导2周。RT-PCR检测两组细胞Ⅱ型胶原mRNA的表达。免疫组化、甲苯胺蓝染色检测Ⅱ型胶原和蛋白多糖表达。[结果]hMSCs呈梭形、漩涡状生长。100 ng/ml GDF-5诱导的hMSCs呈圆形或多角形。五组微团分别由无血清H-DMEM、含10,20,50,100 ng/ml GDF-5的软骨诱导液诱导2周后,除H-DMEM组无Ⅱ型胶原mRNA、Ⅱ型胶原蛋白和蛋白多糖的表达外,其他各组Ⅱ型胶原mRNA、Ⅱ型胶原蛋白和蛋白多糖的表达呈...