丹参酮ⅡA在3T3-L1脂肪细胞中促进脂联素的组装(英文)

目的:研究丹参酮IIA对3T3-L1脂肪细胞中脂联素表达和蛋白多聚化的作用。方法:用油红染色鉴定3T3-L1脂肪细胞的分化状态。用Real-time PCR检测基因的mRNA表达水平。用2%15%梯度SDS-PAGE及Western blot检测脂联素三种聚体。用siRNA技术进行基因沉默。结果:本研究发现传统中药丹参中的萘醌二萜类成分丹参酮IIA在脂肪细胞中激活AMPK通路,同时抑制脂肪细胞分化,降低脂联素的表达。而在前体脂肪细胞分化过程或成熟脂肪细胞中加入丹参酮IIA进行处理,均明显促进脂联素的多聚化,增加高聚体的浓度。抑制AMPK通路能够解除丹参酮IIA对脂联素的作用。结论:丹参酮IIA通过激活AMPK在3T3-L1脂肪细胞中促进脂联素的组装。     

穴位埋线联合西药治疗急性加重期慢性阻塞性肺疾病合并肺炎的临床研究

目的观察穴位埋线联合西药治疗急性加重期慢性阻塞性肺疾病（AECOPD）合并肺炎的临床疗效及对患者T淋巴细胞亚群的影响。方法将63例病例随机分为治疗组（31例）和对照组（32例）,治疗组予以穴位埋线联合西医常规治疗,对照组予以单纯西医常规治疗。两组疗程均为14天,观察肺部感染控制（PIC）窗开启时间及辅助呼吸肌动用评分、呼吸困难评分（MMRC评分）、外周血中c反应蛋白（CRP）、T淋巴细胞亚群水平变化情况。结果①治疗组PIC窗开启所需时间为（7．20±1．19）天,对照组为（8．03±1．22）天,组间差异有统计学意义（P〈0．05）。②治疗前后组内比较,两组辅助呼吸肌动用评分、MMRC评分、CRP水平差异均有统计学意义（P〈0．01）;组间治疗后比较,两项评分及CRP水平差异亦有统计学意义（P〈0．05）。③治疗前后组内比较,治疗组CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋／CD8＋差异有统计学意义（P〈0．05,P〈0．01）,对照组差异无统计学意义（P〉0．05）;组间治疗后比较,各项指标差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论穴位埋线联合西药能缓解AECOPD合并肺炎患者呼吸肌疲劳、改善呼吸困难、缩短PIC窗开启时间,有助于控制肺部感染及急性发作,其机制可能与免疫调节有关。     

地龙、乌梢蛇对系膜增生性肾炎模型大鼠肾组织TLR4、TGF—β1表达的影响

目的观察地龙、乌梢蛇对系膜增生性肾炎（MsPGN）大鼠的治疗作用及对Toll样受体4（TLR4）、转化生长因子B,（TGF—β1）表达的影响。方法选用SPF级Wistar大鼠60只,采用改良慢性血清病法复制MsPGN模型并分组,各治疗组大鼠分别予不同剂量地龙、乌梢蛇颗粒制剂灌胃,正常对照组、模型组予等量生理盐水灌胃。治疗8周,检测各组大鼠24h尿蛋白定量,HE染色观察各组大鼠肾组织病理改变;免疫组化（SABC）法检测,TLR4、TGF-β1在各组大鼠肾组织的表达。结果模型对照组24h尿蛋白定量明显高于正常对照组（P＜0．01）,地龙、乌梢蛇各治疗组尿蛋白定量明显低于模型对照组（P〈0．05）,TLR4、TGF—β1的表达模型组较正常组增多（P＜0．01）,各治疗组较模型对照组明显减少（P＜0．01）。结论地龙、乌梢蛇能减少（MsPGN）模型大鼠蛋白尿,改善。肾脏病理变化,这可能与抑制。肾脏组织中TLR4、TGF—β1的过度表达有关。     

补肾生血汤联合间充质细胞治疗再生障碍性贫血临床研究

目的观察补肾生血汤联合间充质细胞对再生障碍性贫血患者免疫功能及骨髓造血微环境的影响。方法将86例再生障碍性贫血患者随机分为2组,对照组43例给予骨髓间充质细胞治疗,1次/周;研究组43例在对照组治疗基础上给予补肾生血汤治疗。2组均治疗4周。检测2组治疗前后血常规、骨髓象、T淋巴细胞亚群、骨髓血清碱性成纤维生长因子(b FGF)、骨髓微血管密度(MVD)和血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果研究组治疗后Hb、WBC、Plt、中性粒细胞、CD4~+、CD4~+CD25~+Foxp3~+、CD3~+CD4~+IL-4~+、骨髓增生活跃率、骨髓b FGF、MVD、VEGF水平均明显高于对照组(P均0.05);转铁蛋白饱和度、CD8~+、CD3~+CD4~+IL-17~+、CD3~+CD4~+INF-γ~+、Th1/Th2、非造血细胞百分率均明显低于对照组(P均0.05)。结论补肾生血汤联合间充质细胞治疗再生障碍性贫血可调整机体免疫功能紊乱和改善骨髓造血微环境。     

黄芪糖蛋白对T细胞增殖与活化的影响

目的:探讨黄芪糖蛋白对大鼠T细胞增殖与活化的影响。方法:无菌制备大鼠脾脏悬浮细胞,分离淋巴细胞,接种后加入黄芪糖蛋白共培养,采用MTT法和流式细胞术分别检测T细胞增殖情况和T细胞亚群分布。结果:MTT实验结果显示黄芪糖蛋白显著抑制了T细胞的增殖(P0.05或P0.01)。流式检测结果显示黄芪糖蛋白显著降低了T细胞中CD3+CD28+、CD3+CD278+细胞的比例(P0.01)。结论:黄芪糖蛋白可有效抑制T细胞的增殖与活化,且主要通过抑制CD278在T细胞表面表达来阻止T细胞的活化。     

银葛双解剂抗甲型H1N1流感病毒的作用机制

目的:研究银葛双解剂体内外抗甲型H1N1流感病毒作用机制。方法:体外实验以利巴韦林为阳性对照药物,采用流式细胞术检测银葛双解剂对甲型H1N1流感病毒所致狗肾细胞凋亡的抑制作用;体内试验以SPF级小鼠滴鼻建立肺炎模型,随机分为6组,正常对照组、模型对照组、利巴韦林组、银葛双解剂高剂量组、银葛双解剂低剂量组、银葛双解剂预防+治疗组,用流式细胞术检测各组小鼠全血中T细胞亚群分类、放射免疫法测定小鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平。结果:在体外试验中,银葛双解剂可抑制甲型H1N1流感病毒诱导的MDCK细胞凋亡,药物浓度越高,细胞凋亡抑制率越大,银葛双解剂浓度越高,抑制作用越强;体内实验中,银葛双解剂可通过下调甲型H1N1流感病毒感染小鼠血清中炎性细胞因子TNF-α、IL-6的表达水平,升高甲型H1N1流感病毒感染小鼠全血中CD3+、CD4+T细胞的表达百分比,降低CD8+T细胞的表达,上调CD4+/CD8+比值。结论:银葛双解剂具有良好的抗甲型H1N1流感病毒的作用。     

淫羊藿苷促前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的实验研究

目的探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)促进前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化的机制。方法采用不同浓度(10~(-10)~10~(-5)mol/L)的ICA干预前成骨细胞MC3T3-E1 3、6、9天后采用碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性检测试剂盒测定ALP活性,确定ICA最适促分化浓度。最适ICA浓度干预前成骨细胞MC3T3-E1 7天后应用实时定量PCR法(real time-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测骨形态发生蛋白(BMP)和Wnt/β-catenin信号通路相关分子(BMP-2、Runx2、β-catenin、cyclin D1)基因表达。ICA分别与BMP、Wnt/β-catenin信号通路抑制剂(Noggin、DKK-1)联合干预前成骨细胞MC3T3-E1后,茜素红钙结节染色观察钙化程度以及Western blot检测BMP-2蛋白表达变化。结果 ICA促进前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化,且10~(-9)mol/L ICA促进分化的能力最强。与对照组比较,ICA能明显上调BMP和Wnt/β-catenin信号通路相关分子(BMP-2、Runx2、β-catenin、cyclin D1)mRNA表达(P0.01)。Noggin或DKK-1能抑制前成骨细胞MC3T3-E1钙化,且两者联合作用时抑制更加明显。与ICA单独作用比较,ICA与DKK1联合干预后BMP-2蛋白表达水平下降(P0.01)。结论 ICA可能通过Wnt/β-catenin/BMP-2信号通路调控前成骨细胞MC3T3-E1的成骨分化。     

针刺对支气管哮喘患者T细胞亚群和IL—4的影响

对６１例支气管哮喘患者针刺大椎、定喘、风门、肺俞、足三里、三阴交、孔最等穴治疗,总有效率８１９７％,同时检测患者治疗前后的Ｔ淋巴细胞亚群、血清ＩＬ４和ＩｇＥ。结果表明：针刺能使支气管哮喘患者过低的ＣＤ＋８升高（Ｐ＜００１）;增大的ＣＤ＋４／ＣＤ＋８比值减小（Ｐ＜００１）;过高的ＩＬ４和ＩｇＥ降低（Ｐ＜００１,Ｐ＜０００１）,使上述指标趋向于正常。     

二妙散对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎中Th17/Treg细胞分化的影响

目的 观察古代经典名方二妙散（EMS）对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎（CIA）中辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）分化的影响。方法 按体质量将20只DBA/1小鼠随机分为正常组、CIA组,EMS（5.4 g·kg^-1）组及甲氨蝶呤（MTX,0.5 mg·kg^-1）组。CIA组、EMS组及MTX组在第1天以等体积牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂免疫DBA/1小鼠,于第21天以等体积牛Ⅱ型胶原和不完全弗氏佐剂于尾根部有别于第1次免疫部位免疫DBA/1小鼠建立CIA模型（此为第2次免疫）,并于第2次免疫当天开始灌胃给药,除MTX为每周3次外,其余每天1次,共给药28 d。第22天开始观察CIA小鼠的关节红肿等症状并进行关节炎评分,第49天取材后,采用苏木素-伊红（HE）染色观察CIA小鼠关节滑膜炎症的情况;免疫荧光（IF）双标法检测CIA小鼠关节中CD4⁺T细胞中Th17细胞标志物白细胞介素-17（IL-17）和Treg细胞标志物叉头框转录因子P3（FoxP3）在关节滑膜中的表达情况;流式细胞术检测小鼠脾脏及淋巴结中Th17和Treg的细胞比例情况。结果 与正常组比较,CIA组小鼠关节滑膜炎症情况明显,小鼠关节结构严重紊乱,关节软骨及骨破坏明显,骨侵蚀严重（P<0.01）;小鼠关节组织中Th17/Treg值显著升高（P<0.01）;小鼠脾脏及淋巴结中Th17的细胞表达比例显著增高（P<0.01）,Treg细胞表达比例显著减少（P<0.01）;与CIA组比较,EMS组和MTX组两组小鼠关节结构均相对正常,骨侵蚀、骨破坏较轻,关节面相对完整光滑;EMS组和MTX组两组中Th17/Treg值显著降低（P<0.01）;小鼠脾脏及淋巴结组织中,EMS组、MTX组Th17细胞表达比例显著降低（P<0.01）,Treg细胞的表达比例显著增加（P<0.01）。结论 EMS通过调节Th17/Treg平衡,抑制CIA小鼠中Th17细胞的表达,促进Treg细胞的表达,进而治疗RA。     

加味甘草干姜汤联合维生素B12治疗复发性口腔溃疡的临床效果

目的：探讨加味甘草干姜汤联合维生素B12治疗复发性口腔溃疡（ROU）的临床效果。方法：选取2016年8月至2018年8月重庆市人民医院收治的ROU患者124例作为研究对象,随机分成观察组和对照组,每组62例。对照组口服维生素B12治疗,观察组在此基础上内服加味甘草干姜汤治疗,疗程均为14 d。比较2组疗效及安全性。结果：观察组总有效率达96.8%（60/62）,显著高于对照组85.5%（53/62）,差异有统计学意义（P<0.05）。与治疗前比较,2组治疗后疼痛指数、溃疡面积和平均溃疡期均显著改善,差异有统计学意义（P<0.05）,外周血CD3+、CD4+水平和CD4+/CD8+比值及唾液中链球菌、韦荣菌数量均显著上升,差异有统计学意义（P<0.05）,外周血CD8+水平均显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）;且观察组比对照组对以上指标的改善更显著,差异有统计学意义（P<0.05）。2组均未见明显不良反应。随访6个月,观察组复发率为11.3%（7/62）,较对照组的25.8%（16/62）显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：加味甘草干姜汤联合维生素B12治疗ROU的整体疗效确切,可能与其显著纠正外周血T淋巴细胞亚群免疫失衡、维持口腔微环境稳态有关。