仙台病毒RT-PCR检测方法的建立及灰仓鼠中流行情况调查

目的建立仙台病毒(SV)RT-PCR检测方法,并对灰仓鼠仙台病毒感染情况进行调查。方法根据NCBI发表的SV(gi:9627219)基因组序列设计引物,建立RT-PCR方法,对方法的特异性和灵敏性进行验证,并用该方法检测60份灰仓鼠的肺脏样本。结果建立的SV RT-PCR方法显示有较好的敏感性和特异性:以仙台病毒为模板扩增产生197 bp的单一目的条带,经测序比对与NCBI数据库中SV相关序列的一致率为98%,而以猴副流感病毒(SV5)、犬瘟热病毒、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒III型及腮腺炎病毒为对照无任何条带产生;能检出的SVcDNA最低浓度是96.8 ng/mL;用该方法检测60份灰仓鼠,SV的感染率为3.33%(2/60)。结论建立的SV RT-PCR方法可用于实验类啮齿动物动物SV的常规检测,自然条件下灰仓鼠感染SV的问题不容忽视。     

仙台病毒高滴度病毒制备方法的建立

目的：建立使用传代细胞稳定大量地制备高滴度的仙台病毒（SeV）的方法,取代成本高、周期长、操作繁琐、易污染的鸡胚制备仙台病毒的方法,用于实验研究。方法：首先观测不同细胞感染仙台病毒后发生病变的时间、程度以及产毒量,确定仙台病毒敏感细胞株并确定病毒产量高峰期,连续在细胞中传3代测量上述指标。其次观测染毒时病毒吸附时间不同对病毒滴度的影响。综合分析后建立制备高滴度仙台病毒的方法。结果：大鼠脑胶质瘤细胞C6株对仙台病毒高度敏感,细胞出现病变所需时间短且明显,病毒产量最高。仙台病毒滴度与染毒时的吸附时间呈正相关,病毒最佳吸附时间为90min。接种病毒后72h收获的病毒滴度最高,平均为11 TCID50,并且病毒可以在细胞内连续稳定传代。结论：确认大鼠脑胶质瘤细胞C6株为仙台病毒的敏感细胞。且病变快、明显,病毒产量高。为在体外深入研究仙台病毒和大量繁殖高滴度仙台病毒提供了实验方法。     

Lysosomal enzymes in human tear fluid collected by filter paper strips

Protein concentrations and lysosomal enzyme activities in tear fluid collected by filter paper strips were studied. The magnitude of the wetted area on the filter paper did not affect the apparent protein concentration in the tear fluid. Lysosomal enzyme activities in tear fluid were higher than those in serum. The pH and enzyme activity curves in tear fluid were similar to those in serum. The optimal pH of acid phosphatase, beta-D-glucuronidase, N-acetyl-beta-D-glucosaminidase, alpha-L-fucosidase and alpha-D-mannosidase in tear fluid were determined.     

Persistent inflammation and hyperresponsiveness following viral rhinosinusitis

OBJECTIVES: To develop a murine model of viral rhinosinusitis. STUDY DESIGN: Randomized, controlled, animal model. METHODS: Mice were intranasally inoculated with Sendai virus (SeV) or ultraviolet (UV)-inactivated virus. On days 3 and 10 postinfection, nasal lavage fluid was obtained for viral culture. On days 4, 10, and 38 postinfection, sinus mucosa was harvested and analyzed by flow cytometry for CD3-, CD4-, CD8-, CD25-, CD11b-, CCR3-, and GR1-positive cells. Nasal hyperresponsiveness to histamine challenge was measured on days 8 and 36 postinoculation. RESULTS: On day 3, viral cultures were positive from all SeV-inoculated mice but from none of the UV-inactivated mice (P相似文献   

仙台病毒F基因的克隆及原核表达

目的利用原核表达系统表达仙台病毒(Sendai Virus)F蛋白主要抗原片段FP(S),并对表达产物进行免疫学初步研究。方法根据GenBank公布的仙台病毒F蛋白(gi:9627219)的基因序列设计特异性引物,通过RT-PCR扩增出F基因的主要抗原片段FP(S),插入pMD-18-T载体中,鉴定正确后克隆入pQE31原核表达载体中,将鉴定正确的pQE31-FP(S)转化大肠埃希菌M15,IPTG诱导表达,对大肠埃希菌裂解物进行SDS-PAGE和Western-blot验证。结果大肠埃希菌表达的FP(S)相对分子质量约26×103,与预期相符;能与SeV阳性血清发生特异性反应,出现单一条带。结论原核表达的FP(S)蛋白有良好的抗原性,为检测仙台病毒抗体的ELISA检测方法的研究奠定了基础。