缺氧缺血对体外血脑屏障通透性的影响及其机制的研究

目的：探讨血脑屏障紧密连接（BBB-tight junction，BBB—TJ）蛋白和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在缺氧缺血诱导的体外血脑屏障（BBB）模型通透性增加中的作用及相互关系。方法：ECV304与原代培养的星形胶质细胞共培养建立体外BBB模型。实验分为正常对照组（C组）、缺氧缺血组（H／I组）、BB-1101预处理组（P组）3组。透射电镜分别观察各组BBB-TJ变化；通过吖计数仪测定核素标记牛血清白蛋白（^125I-BSA）通透量检测BBB屏障功能。直接免疫荧光观察细胞骨架蛋白Actin分布的改变，Westemblot检测Actin、Occludin、ZO-1和MMP-9表达量的改变。结果：电镜观察见C组内皮细胞间形成光滑、连续、较高密度的紧密连接，免疫荧光检测见细胞骨架蛋白Actin主要分布在细胞膜及细胞核周边。形成肌动蛋白丝带，轮廓内包含大量柬状排列有序的微丝结构，细胞间连接紧密。缺氧缺血后．H／I组细胞间连接开放，形成裂隙，而胞膜及胞核周边肌动蛋白丝带模糊、部分断裂，并有应力纤维形成，出现细胞间裂隙，BBB对岱I—BSA通透性明显增高，与C组和P组比较，差异有显著性（P〈0．01），同时ZO-1的表达量显著减少，MMP-9的表达显著增多，而Occludin和Actin的表达量无改变。BB-1101预处理后，P组细胞BBB-TJ破坏减少．周边肌动蛋白丝带重新出现，细胞间裂隙较少，岱I-BSA通透量较H／I组明显下降（P〈0．01）．MMP-9的表达较H／I组也明显减少（P〈0.01）。结论：（1）缺氧缺血能促使BBB—TJ的开放进而导致BBB通透性增加；（2）BBB-TJ的开放可能与BBBActin的重组及ZO-1的表达量降低有关；（3）缺氧缺血能增加MMP-9的表达：（4）MMP-9与缺氧缺血时BBBActin的重组及ZO—1的表达减少相关。     

腹腔镜全胃切除术两种消化道重建方式对肠道通透性影响研究

目的比较非离断式与传统式Roux-en-Y吻合在腹腔镜根治性全胃切除术重建中的疗效及对患者肠道黏膜通透性的影响。方法回顾性分析2017年1月至2019年2月收治的60例行腹腔镜根治性全胃切除术的胃癌患者。根据术中消化道重建方式不同,将行非离断式Roux-en-Y吻合的30例患者列为A组,传统式Roux-en-Y吻合的30例列为B组。应用SPSS23.0统计软件进行统计分析,围手术指标、肠道黏膜通透性指标等计量资料以(±s)表示,比较采用独立t检验;术后并发症采用χ^2检验,P<0.05表示差异有统计学意义。结果A组术中出血量少于B组,术后恢复排气时间短于B组(P<0.05)。B组发生RSS的发生率高于A组(P<0.05)。A组L/M数值、血浆D-乳酸水平、血清内毒素水平、DAO值均低于B组,血浆Gln水平高于B组,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论非离断式Roux-en-Y吻合较传统式相比具有出血量少、肛门恢复排气时间快、Roux瘀血综合征发生率低等临床优势,且对患者肠道通透性的影响较小,可推广应用。     

oxLDL对人脐静脉内皮细胞通透性影响及机制研究

目的探讨氧化低密度脂蛋白（ox LDL）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）通透性的影响及其可能机制。方法采用Transwell单层细胞模型系统和油红O染色,观察ox LDL对单层血管内皮细胞通透性的影响以及THP-1巨噬细胞内脂质的蓄积情况;采用蛋白质印迹法及免疫荧光技术检测ox LDL对HUVECs紧密连接occludin蛋白的表达及分布改变。结果 ox LDL增加单层内皮细胞对LDL的通透性和THP-1巨噬细胞脂质的蓄积;ox LDL降低occludin蛋白的表达,同时免疫荧光染色显示,ox LDL处理后,血管内皮细胞间隙增宽,occludin染色减少或脱失,而抑制氧化应激可以减弱ox LDL对内皮细胞的高通透性反应和occludin蛋白表达和形态学的影响。结论 ox LDL可能是通过occludin蛋白表达下降使内皮细胞构改变来介导内皮通透性增加,从而促进内皮下巨噬细胞内的脂质蓄积。     

对氧磷对血管内皮细胞的损伤作用及机制探讨

目的为探讨有机磷酸酯对血管内皮细胞和血管内皮功能是否有直接的损伤作用。方法用不同浓度的对氧磷分别与大鼠离体血管环和培养的人脐静脉单层内皮细胞共孵不同的时间,以乙酰胆碱引起的血管内皮依赖性舒张反应和单层内皮细胞通透性等为观察指标,检测对氧磷对血管内皮的损伤作用。结果对氧磷（36.3nmol/L-36.3μmol/L）与血管环共孵,呈浓度和时间依赖性地显著抑制乙酰胆碱诱导的内皮依赖性舒张反应,而对硝普钠引起的非内皮依赖性舒张反应没有明显的影响。对氧磷与内皮细胞共孵不同的时间,呈浓度和时间依赖性地显著增加单层内皮细胞的通透性。对氧磷在损伤血管内皮的同时也导致了血管组织及细胞培养液中一氧化氮浓度和超氧化物歧化酶活性的降低、脂质过氧化代谢产物丙二醛浓度的升高。加入左旋精氨酸能部分拮抗对氧磷对血管内皮功能的损伤作用,用阿托品预处理则不影响对氧磷的作用。结论该研究提示对氧磷对血管内皮细胞有直接损伤作用,其机制可能与对氧磷诱发氧化应激,进而导致脂质过氧化反应发生和增加内皮细胞的通透性有关。     

壳聚糖改性丝素合金膜的制备及其相关性质研究

以无毒氧化葡萄糖醛作交联剂 ,采用溶液共混交联法制备壳聚糖改性丝素合金膜。用 FTIR、DSC表征其结构 ,测定其等电点、力学性能、不同 p H条件下的溶胀率和对模型药物 5 - Fu的渗透性。结果表明 :改性丝素合金膜中丝素和壳聚糖分子间存在着强烈的氢键相互作用及良好的相容性。改性膜的等电点对应的 p H值是 5 .35 ,而丝素膜的等电点是 4 .5。改性膜的力学性能优于单组分膜 ,当壳聚糖含量为 4 0 %～ 6 0 %时 ,具有最大的抗张强度和拉伸率 ,分别为 71.4～ 72 .7MPa和 2 .96～ 3.82 %。改性丝素合金膜对 5 - Fu的渗透量与壳聚糖的含量和时间成正相关关系 ,渗透系数随 p H值增大 (5→ 9)先逐渐减小然后略有增大 ,在 p H=7时最小。     

腹膜通透性对腹膜透析患者心脏结构的影响

目的探讨持续非卧床腹膜透析(CAPD)患者不同腹膜通透性对患者心脏结构的影响。方法选择透析12个月的CAPD患者52例,根据腹膜平衡实验(PET)结果将患者分为两组:高转运、高平均转运的患者为高通透性(H)组27例,低转运和低平均转运患者为低通透性(L)组25例。检测患者左心房内径(LAD)、左心室内径(LVD)、室间隔厚度(IVST)、左室后壁厚度(LVPWT)及左心室射血分数(LVEF),并进行比较。结果与L组相比,H组患者血浆白蛋白[(33.46±3.08)g/L比(35.72±2.62)g/L,P=0.006)]明显降低,腹透液白蛋白丢失量[(6.41±1.15)g/24h比(5.51±1.18)g/24h,P=0.008]明显增多,室间隔厚度[(11.67±1.14)mm比(10.96±0.97)mm,P=0.020]、左室后壁厚度[(10.16±0.93)mm比(9.52±0.91)mm,P=0.016]明显增厚,左室射血分数[(59.37±3.31)%比(61.76±4.57)%,P=0.035]明显下降。单因素相关分析结果显示:腹透液白蛋白丢失量与血浆白蛋白及LVEF呈负相关关系(r=-0.503,P0.01;r=-0.406,P=0.003);与IVST、LVPWT呈正相关关系(r=0.442,P=0.001;r=0.328,P=0.018)。结论高通透性CAPD患者较低通透性CAPD患者,左心室肥厚与左室射血功能的下降明显;腹透液白蛋白丢失量与CAPD患者的心脏改变有相关性。     

RNA干扰抑制缺氧诱导因子1α表达对缺氧内皮细胞通透性的影响

目的 了解RNA干扰技术特异性抑制缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达对缺氧血管内皮细胞通透性的影响.方法 利用质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR构建针对人HIF-1α基因的RNA干扰表达载体.将VE细胞分为正常对照组、缺氧组(置于含体积分数1%O_2的混合气体环境中缺氧处理6 h)、转染组、转染缺氧组(转染载体后再进行缺氧处理).采用RT-PCR法检测正常对照组、转染组HIF-1αmRNA表达,采用蛋白质印迹法检测4组细胞HIF-1α蛋白表达.荧光分光光度计检测单层VE细胞的通透性.将上述缺氧处理替换为HIF-1α特异性诱导剂1 mmol/L二甲氧乙二酰甘氨酸(DMOG),分为DMOG组、转染DMOG组、正常对照组、转染组,采用蛋白质印迹法观察各组HIF-1α蛋白表达.除通透性检测数据用荧光强度值表示外,其他数据用密度比值表示.实验结果进行组间两两t检验.结果 正常对照组细胞HIF-1α mRNA相对含量为0.765±0.069,转染组细胞HIF-1α mRNA相对含量为0.093±0.007,组间比较,差异有统计学意义(t=16.696,P<0.05).转染缺氧组细胞HIF-1α蛋白含量为0.591±0.029,显著低于缺氧组(2.612±0.259,t=13.415,P<0.05);转染DMOG组HIF-1α蛋白含量为0.566±0.008,显著低于DMOG组(3.243±0.551,t=6.975,P<0.05).缺氧组单层血管内皮细胞通透性(41.6±11.1)较正常对照组(9.4±1.5)显著升高(t=6.238,P<0.05),转染缺氧组单层血管内皮细胞通透性(13.3±4.5)显著低于缺氧组(t=5.430,P<0.05).结论 采用特异性针对HIF-1α基因的RNA干扰技术,能有效抑制内皮细胞HIF-1α表达,并明显抑制缺氧引起的血管内皮细胞通透性增强.     

Luminal Salmonella Endotoxin Affects Epithelial and Mast Cell Function in the Proximal Colon of Pigs

Background: The effects of proximal small-bowel resection on absorption and synthesis of cholesterol are unclear. Methods: To study cholesterol absorption and synthesis after proximal gut resections of variable length, plasma plant sterols, cholestanol, and cholesterol precursors were measured 1 and 2 months after 50% and 75% proximal small-bowel resection or transection. To examine the effect of increased crypt cell proliferation and brush border development on cholesterol absorption, the results were related to the mucosal morphology, crypt cell proliferation, and disaccharidase activities of the remaining small bowel. Results: Campesterol levels in proportion to cholesterol decreased markedly more, and those of cholestanol markedly less, than would be expected simply due to the amount of proximal small intestine removed, whereas sitosterol proportions decreased in proportion to the length of gut resection. Campesterol proportions markedly (P = 0.06) increased between 1 and 2 months after 50% resection but remained unchanged after 75% resection. Crypt cell proliferation was only increased in the 75% resection group (P &lt; 0.05). The longer the proximal gut resection, the lower was the mucosal enzyme activity. Both resection groups showed increased plasma cholesterol precursor proportions and crypt depth (P &lt; 0.05), whereas villus height remained unchanged. After massive proximal resection campesterol and sitosterol proportions were inversely related to crypt cell proliferation (r = -0.86-0.83, P &lt; 0.01). Conclusions: Increased crypt cell proliferation activated by massive proximal gut resection may act as a previously unrecognized factor in aggravating cholesterol malabsorption and retarding its recovery during the early postoperative period. These findings warrant further investigation.     

A CaPful of mechanisms regulating the mitochondrial permeability transition

Despite the lack of its molecular identification, the mitochondrial permeability transition pore (PTP) is a fascinating subject because of its important role in cell death. This holds especially true for cardiovascular diseases and in particular for ischemia–reperfusion injury, where research on PTP inhibition has been successfully translated from bench to clinical evidence of cardioprotection. In addition, recent reports extend the relevance of PTP to heart failure and atherosclerosis. This review summarizes the major factors involved in PTP control with specific emphasis on cardiovascular pathophysiology, and highlights recent findings on the pivotal role of inorganic phosphate as a mediator of the inhibitory effects of cyclosporin A and cyclophilin D ablation.