氯化钴诱导PC12细胞凋亡的分子机制

目的确定氯化钴(CoCl2)诱导PC12细胞凋亡的分子机制。方法500μmolLCoCl2诱导PC12细胞24h后,检测活性氧(ROS)生成量的变化以及抗氧化剂N乙酰半胱氨酸(NAC)、二硫代苏糖醇(DTT)对细胞存活率和ROS生成量的影响;琼脂糖凝胶电泳检测NAC、DTT对CoCl2诱导PC12细胞DNA片段化的影响;利用RTPCR法检测凋亡相关基因bclxl和bax在PC12细胞调亡过程中的表达及NAC、DTT对基因表达的影响;化学发光法检测NAC、DTT对Caspase3表达的作用。结果在CoCl2诱导PC12细胞凋亡中,ROS生成量明显上升,为正常时的2.92倍;NAC、DTT可提高细胞存活率,由53.1%上升为94.8%和92.3%(P<0.01),并有效抑制ROS的生成,为正常时的24.2%和82.1%(P<0.01);同时抑制DNA片段化的发生。bclxl在细胞凋亡过程中表达明显下降,bax表达无明显变化;NAC和DTT可使bclxl的表达明显上升。Caspase3在细胞凋亡中被激活,NAC、DTT可抑制Caspase3的表达(P<0.01)。结论ROS介导了CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,这一过程与抑制bclxl表达,激活Caspase3有关。     

补肾方含药血清促进PC12细胞增殖及其拮抗谷氨酸神经毒作用的研究

目的运用中药血清药理学方法研究补肾复方含药血清(BS)促进体外培养的PC12细胞增殖及其拮抗谷氨酸兴奋性神经毒损伤的作用.方法以MTT法观察BS对体外培养的PC12细胞活力的影响及其拮抗谷氨酸损伤的作用,采用流式细胞仪观察BS对谷氨酸所诱导PC12细胞凋亡的影响.结果 BS含药血清可以增强PC12细胞活力,拮抗谷氨酸的兴奋性神经毒作用且在20%浓度时作用最强,并且能够抑制谷氨酸诱导的PC12细胞早期凋亡.结论补肾方BS可能具有神经保护作用.     

Study of effect of oxygen／glucose-deprived culture on the brain-pancreas relative protein in PC12 cells and the mechanism

AIM: To study the effect of oxygen/glucose-deprived (OGD)culture on the expression of a novel protein, brain-pancreas relative protein (BPRP), and the possible regulating mechanism in vitro. BPRP was a key protein found in our previous study of cerebral ischemia. METHODS: PC12 cells was selected and exposed to the Eagle‘s solution containing 1 mmol/L Na2S2O4 for     

五味子超临界萃取物对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤后生存状态和活力的保护作用

目的:研究五味子超临界萃取物对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)所致的PC12细胞损伤后生存状态和活力的保护作用。方法:体外培养PC12细胞,建立Aβ引起的细胞损伤的AD细胞模型,采用MTT法和LDH法检测细胞生存活力。结果:五味子超临界萃取物能降低LDH含量,升高细胞线粒体脱氢酶的活性,增加活细胞数。结论:五味子超临界萃取物能减轻Aβ25-35损伤后的PC12细胞的受损程度,保护细胞膜,提高细胞生存活力。     

隐丹参酮对IGF-1促PC12细胞存活的作用及机制探讨

目的:研究隐丹参酮对类胰岛素样生长因子-1(IGF-1)促进PC12细胞存活的影响及可能机制.方法:首先采用剥夺血清造成细胞损伤模型确定IGF-1发挥促存活作用的剂量,然后不同剂量的隐丹参酮预先作用PC12细胞,再加入IGF-1处理,MTT检测隐丹参酮对IGF-1促PC12细胞存活的影响;Western blot检测隐丹参酮对IGF-t诱导其受体(1GF-IR)磷酸化及下游信号通路磷酯酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)及细胞外信号调节激酶(ERK) 1/2的影响.结果:MTT显示隐丹参酮能剂量依赖性地阻断IGF-1的促存活作用,抑制PC12细胞的增殖;Western blot结果显示IGF-1能明显诱导其受体(IGF-1R)磷酸化,而隐丹参酮则起抑制作用,并使下游Akt及ERK1/2的磷酸化水平下调,呈明显的剂量依赖性.结论:隐丹参酮可通过抑制IGF-1R及其下游信号分子Akt和ERK1/2的磷酸化,从而抑制IGF-1的促存活功能,发挥其自身抑制细胞存活,促使细胞凋亡的作用.     

麝香酮对氰化钠加缺糖致PC12细胞缺血损伤的保护作用

目的:研究麝香酮对PC12细胞缺血损伤的影响。方法:在离体培养的PC12细胞,用NaCN加缺糖造成拟缺血损伤模型,通过细胞形态学观察、MTT微量比色、培养介质LDH活力测定,研究了麝香酮对该模型的保护作用。结果:10-7~510-5mol/L范围内,麝香酮呈浓度依赖性地降低NaCN加缺糖造成拟缺血损伤模型培养介质内LDH的释放,其IC50为:43.33μmol/L。在10-7~510-5mol/L范围内,麝香酮呈浓度依赖性地增加NaCN加缺糖造成拟缺血损伤模型培养介质的MTT比色值,其IC50为30.62μmol/L。结论:麝香酮对PC12细胞缺血损伤具有保护作用。     

针刺内关穴与非穴的fMRI脑功能成像研究

目的:观察针刺健康志愿者右侧内关穴和非穴时不同脑区的激活情况,探讨针刺穴位对脑中枢的激活效应。方法:将14例健康志愿者随机分为内关穴组和非穴组,分别针刺右侧内关穴和非穴;同时,运用GE公司1.5T超导核磁共振系统完成脑部fMRI扫描,获得局部脑组织激活与否的试验数据,采用感兴趣区(ROI)法进行处理和分析。结果:针刺内关穴和非穴,对双侧顶叶、额叶、枕叶、颞叶、基底节区、扣带回、小脑、脑桥、脑岛等多个脑区分别有不同程度的激活;从激活几率、激活数量和激活强度上看,针刺右侧内关穴以激活左侧顶叶、额叶、颞叶、枕叶为主,并且特异性激活左侧海马和双侧桥脑;尽管在脑区的激活上,有上述趋势,但是在统计学上无显著性意义(P>0.05)。结论:针刺内关穴和非穴激活的脑区有相对的差异性,针刺外周穴位能特异性的激活脑中枢。     

白藜芦醇对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡与线粒体跨膜电位影响

目的探讨白藜芦醇对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡和线粒体跨膜电位的影响。方法 20μmol/LAβ25-35刺激PC12细胞后分别给予160,80,40,20μg/L,CCK-8法检测细胞活力,AnnexinV-FITC流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察细胞形态,罗丹明染色后测线粒体跨膜电位。结果与模型组比较,白藜芦醇呈剂量依赖性的提高Aβ25-35诱导的PC12细胞存活率和线粒体跨膜电位,降低PC12细胞凋亡率,有统计学差异(P<0.05)。结论白藜芦醇对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡有保护效应。     

肉苁蓉总苷对β淀粉样蛋白25-35诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的研究肉苁蓉总苷(GCs)对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞凋亡的保护作用。方法体外培养的大鼠PC12细胞分6组:正常对照组、模型组、银杏叶片组(40mg·L-1)、GCs低剂量组(25mg·L-1)、GCs中剂量组(50mg·L-1)和GCs高剂量组(100mg·L-1)。细胞培养至对数生长期时分别加入上述各组药物,每日1次。培养h96时,模型组、银杏叶片组和GCs各剂量组分别加入终浓度20μmol·L-1的Aβ25-35,正常对照组以等体积培养基替代。继续培养24h和48h时,光镜观察各组细胞的形态及生长情况,MTT比色法检测各组细胞的存活率,分光光度法检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)活性,流式细胞术AnnexinⅤ/PI法检测细胞凋亡率。结果与正常对照组比较,模型组细胞数目显著减少,部分细胞皱缩,变圆、脱落的细胞数目较多,其存活率显著降低、LDH活性明显提高、凋亡率显著增加(P<0.01)。与模型组相比,GCs各剂量组细胞数目显著增多,细胞形态学变化明显改善,细胞的存活率增高、LDH活性下降、凋亡率降低,有非常显著差异(P<0.01)。其中,GCs高剂量作用48h效果最显著。结论GCs对Aβ25-35引起的PC12凋亡细胞损伤具有明显的保护作用。     

麝香酮对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护及作用机制研究

目的:考察麝香酮对谷氨酸引起PC12细胞损伤的保护作用及作用机制.方法:将大鼠嗜铬细胞瘤细胞株(pheochromocytoma,cells,PC12)分为正常组、模型组、麝香酮10.0,1.0,0.1 μmol·L~(-1)高、中、低剂量组和1μmol·L~(-1)尼莫地平组,用500μmol·L~(-1)谷氨酸造成PC12细胞损伤,采用药物预处理给药方法,MTT法测定细胞存活率,流式细胞仪测定细胞凋亡率,采用Fura3/AM为荧光指示剂,用Vector~2 1420多标记免疫分析仪研究麝香酮对谷氨酸所致损伤PC12细胞内Ca~(2+)的作用,流式细胞仪检测线粒体跨膜电位,考察不同浓度麝香酮对PC12细胞的保护作用.结果:麝香酮可明显提高谷氨酸诱导的PC12细胞还原能力,抑制该细胞LDH的释放,提高细胞存活率;抑制兴奋性氨基酸所引起的细胞内Ca~(2+)含量的升高;降低PC12细胞的凋亡百分率,并呈剂量相关性.结论:麝香酮可抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,其作用机制可能与抑制细胞内钙超载,稳定细胞线粒体跨膜电位有关.