α-突触核蛋白聚集及传播模型的构建

目的 建立α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)聚集及传播的细胞和动物模型,为帕金森病的发病机制研究提供基础。方法 亲和层析法纯化α-syn蛋白,体外诱导其聚集成为α-syn纤维(Preformed fibrils,PFFs); 培养稳定表达GFP-α-syn的HEK293细胞系及原代神经元,转导α-synPFFs后免疫荧光染色法观察细胞内α-syn聚集情况; 小鼠立体定位注射α-syn PFFs,免疫组织化学法检测内源性α-syn的聚集及传播情况。结果 纯化的α-syn可在体外聚集形成聚集体; 在细胞及动物水平观察到α-syn PFFs可诱导内源性蛋白的聚集和传播。结论 本研究建立了α-syn聚集及传播的细胞和动物模型,为帕金森病的相关研究打下了基础。     

脑缺血后自噬的信号转导通路

脑缺血后自噬可被激活,且参与到缺血性脑损伤的发生和发展过程中,因此自噬相关信号转导通路的研究有可能为缺血性脑损伤提供新的治疗靶点。文章就脑缺血后自噬的信号转导通路进行了综述。     

神经元核心抗原和神经元特异性烯醇化酶在人胚胎小肠发育阶段的表达

 目的：探讨神经元核心抗原（neuronal nuclear antigen,NeuN）和神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase, NSE)在人胚胎小肠发育阶段的分布规律及其表达意义。方法：应用免疫组织化学法检测第2~4月龄段共16例人胚胎小肠壁细胞NeuN和NSE的表达、分布状况。结果：第2~4月胎龄段,NSE在人胚胎小肠肌间神经丛内的神经元及神经纤维均呈强阳性表达,在黏膜下层,随着胎龄的增大,NSE阳性表达细胞和纤维数量逐渐增多,在肠腺内均有少量散在分布的NSE阳性细胞;在黏膜层的腺体和上皮组织内均有散在的NeuN阳性细胞分布,随着胎龄的增大,NeuN阳性细胞数量增多;在肌间神经丛,第3月龄段开始,有少量NeuN阳性细胞,随着胎龄的增大, NeuN阳性细胞数量逐渐增多;在黏膜下层,未见NeuN阳性细胞分布。结论: 人胚胎小肠发育阶段,NeuN和NSE在小肠壁的阳性表达和分布不一致,均参与小肠壁神经元及神经内分泌细胞的发育过程。     

谷氨酸致原代培养皮层神经元损伤中自噬的激活

目的: 体外观察谷氨酸介导的神经元氧化性损伤中自噬的激活,以及抑制自噬对谷氨酸致神经元毒性损伤的保护作用。方法: 体外培养皮层神经元,给予谷氨酸以及自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤干预,MTT法检测细胞活力,透射电镜观察自噬泡的产生,激光共聚焦显微镜观察自噬特异性蛋白LC3的表达。结果: 给予谷氨酸干预后皮层神经元细胞存活率下降,自噬体数目明显增加,自噬标志性蛋白LC3表达增加。给予3-甲基腺嘌呤后,神经元细胞存活率增加,细胞自噬水平下降。结论: 谷氨酸诱导的神经元毒性损伤中存在自噬相关性细胞死亡,抑制自噬可能对谷氨酸毒性损伤有抑制作用,自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤具有一定的神经保护作用。     

蒺藜皂苷对缺氧/复氧诱导大鼠皮层神经元凋亡及细胞内钙变化的作用

目的： 观察蒺藜皂苷(TTLS)对缺氧/复氧诱导的大鼠皮层神经元凋亡及细胞内游离钙离子浓度变化的影响。方法： 原代培养大鼠皮层神经元，建立缺氧/复氧损伤的皮层神经元凋亡模型。比色法测定细胞乳酸脱氢酶（LDH）释放漏出率；Annexin V-FITC/PI双染，流式细胞仪定量分析细胞凋亡百分率；Fluo-3荧光染色，激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内钙平均荧光值变化。结果： 缺氧3 h复氧12 h可诱导出皮层神经元凋亡，引起细胞内钙离子浓度增高,高于对照组（P<0.01）。蒺藜皂苷(0.025 g/L)能明显降低缺氧/复氧诱导的神经元凋亡，并可降低细胞内钙浓度,与模型组比较有显著差异（P<0.01）。结论： 蒺藜皂苷可降低由缺氧/复氧诱导的皮层神经元的凋亡，减轻细胞损伤，这种作用机制可能与其抑制神经细胞内钙超载有关。     

胚鼠大脑皮层神经元培养方法的改进

目的建立一种简单、高效的胚鼠大脑皮层神经元原代培养的方法。方法17d胎鼠大脑皮质,直接机械切碎后经200目滤网研磨过滤,得到细胞悬液进行培养。结果神经元生长良好。相邻细胞的突起交错形成网络,鉴定神经元纯度为（94．7±5．6）％。结论本方法简单可行。可以获得高纯度的胚鼠大脑皮层神经元。     

Zfp521在大鼠骨髓间充质干细胞向神经元分化过程中的表达变化及意义

目的: 探讨锌指蛋白521(Zfp521)在大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元过程中的表达变化及意义。方法: 体外培养大鼠MSCs,实验分为未转染组、转染组(转染Rn-Zfp521-siRNA)和阴性对照组(转染negative control siRNA),采用β-巯基乙醇诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元。倒置荧光显微镜下观察MSCs转染后荧光表达情况。采用免疫细胞化学法、RT-PCR法及Western blotting法检测诱导后神经元特异性烯醇化酶(NSE)和微管相关蛋白2(MAP-2)的表达情况及诱导前、后Zfp521的表达变化。结果: (1)siRNA转染72 h荧光表达最强,转染率可达84.1%±2.3%,转染组骨髓间充质干细胞的Zfp521 mRNA表达下降(P<0.05);(2)β-巯基乙醇可以诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元,以转染组诱导效果最佳,NSE和MAP-2表达显著高于其它各组(P<0.05);(3)Zfp521在各组细胞中均有表达,诱导后Zfp521表达明显低于诱导前(P<0.01)。结论: Zfp521在大鼠骨髓间充质干细胞神经分化中表达下降,抑制Zfp521表达可促进神经元的分化,提示Zfp521在骨髓间充质干细胞的神经分化中可能发挥重要调控作用。     

局灶性脑梗死后半暗带区皮层血流量与神经细胞凋亡的实验研究

目的：研究大鼠局灶性脑梗死后半暗带区皮层血流量及神经细胞凋亡。 方法： 光化学法诱导大鼠局灶性脑梗死模型，应用激光多普勒微循环测量仪检测局灶性脑梗死后各时间点坏死区和半暗带皮层血流量；TdT-介导dUTP-生物缺口末端标记（TUNEL）法检测凋亡细胞。 结果： 脑梗死后坏死区皮层血流量呈波浪样改变，3 h降至最低，为正常血流量的9.36%±1.72%，6h后回升，12 h达高峰，为正常31.18%±1.44%，24-48 h血流量再度下降，与3 h相比无显著差异（P＞0.05）。半暗带皮层血流量6 h降至最低，为正常皮层血流量的30.88%±7.11%，9-48 h上升，至48 h血流恢复至正常91.90%±4.56%，与其它组差异显著 (P<0.05)。TUNEL结果显示，局灶性脑梗死组 6 h 开始出现凋亡细胞，主要集中于半暗带区，呈半球状向四周放射样扩展，随梗死时间的延长凋亡细胞逐渐增多，梗死48 h后凋亡细胞达峰值。 结论： 局灶性脑梗死后半暗带区皮层血流量与神经细胞凋亡具有明显的关系，其血流量的恢复引起的再灌注损伤最终导致了迟发性神经细胞凋亡。     

丹参酮ⅡA定向诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的研究

目的:丹参酮ⅡA体外定向诱导成人骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞。方法:采用Ficoll-Paque液离心和贴壁法分离成人MSC,体外扩增,流式细胞仪检测MSC表面抗原表达,FGF-2对MSC增殖和分化的影响。采用含丹参酮ⅡA的无血清达乐伯克改良必需基本培养基(DMEM)诱导MSC分化为神经元样细胞,免疫组化鉴定神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF-M)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白(nestin)的表达。结果:成人骨髓间质干细胞在体外扩增原代可获得0.5×10⁶,15代可获得(2-3)×10¹²个细胞,流式细胞仪检测结果显示CD29、CD44、CD90、CD105、CD166表达阳性,CD11a、CD14、CD34、CD38、CD45、CD80、CD86为阴性。FGF-2促进hMSC生长,并且对MSC的分化能力基本没有影响。丹参酮ⅡA诱导后,MSC胞体收缩,突起伸出;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF-M、nestin表达阳性,GFAP阴性。结论:丹参酮ⅡA可以在体外诱导成人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。     

Connectionist networks learn to transmit chaos

Evidence presented in the preceding paper indicates that the activity of some neurons during the generation of coordinated motor patterns may be attributable to chaos. Because even "simple" biological systems are difficult to control, we have used connectionist networks in order to inquire into the question of whether a chaotic signal originating in one part of the nervous system can be learned and transmitted by another. We have examined a number of different architectures, and report here the findings for a simple network consisting of one input unit, four hidden units, and one output unit. During training sessions, the input of the circuit was given analog values of either the 3.60 or 3.95 logistic equation, or of one variable of the three-variable R?ssler attractor. The backpropagated error in the learning algorithm was a function of the difference between the input value and the output at each iteration. Iterations involving small changes in analog value resulted in good similarity between the input and output signals, but little learning occurred because of the small error propagated back to the synapses. With larger differences in the analog values (and larger feedback error) at each iteration, we found that networks learned to transmit different chaotic attractors. Once the network learned one input, it could transmit another without changing the synapses. Increasing the number of hidden units increased the rate of learning.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)