阿霉素肾病大鼠肾皮质nephrinmRNA的表达及来氟米特对其表达的影响

目的：观察阿霉素肾病大鼠肾皮质nephrin mRNA的表达及来氟米特对其表达的影响，探讨nephrin在蛋白尿发生发展中的作用以及来氟米特治疗肾脏病的可能机制。方法：建立阿霉素肾病模型，第4周进一步将模型组分为治疗组和非治疗组，治疗组给予来氟米特管饲。应用光镜、电镜观察不同时期（第2、4、6、8周）各组大鼠肾组织的病理改变；BCA法检测尿蛋白排泄量；半定量RT—PCR的方法检测肾皮质中nephrin mRNA的表达。结果：（1）模型组尿蛋白量逐渐增加，而治疗组第6周和第8周的尿蛋白量均低于同时期的非治疗组水平（P=0．02和P＜0．01）；（2）模型组nephrin mRNA表达量在2、4、6、8周分别为对照组的0．5、1．0、2．0、1．6倍，并与尿蛋白量呈正相关（r=0．699，P＜0．001）；（3）模型治疗组nephrin mRNA的表达第8周达非治疗组的1．3倍。结论：（1）随着阿霉素肾病大鼠尿蛋白排泄量的增加，肾皮质nephrin mRNA的表达发生了显著变化，并与蛋白尿的发生发展之间具有一定的相关性；（2）来氟米特可减少肾病大鼠尿蛋白量，同时增加肾皮质nephrin mRNA的表达。     

血管紧张素Ⅱ灌注诱导nephrin表达改变与足细胞凋亡

目的 研究血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）灌注对大鼠足细胞裂隙膜分子nephrin表达及足细胞凋亡的影响，以及探讨AngⅡ引起蛋白尿及肾小球硬化的机制。方法 36只雄性Sprague Dawley大鼠分为AngⅡ灌注组(400 ng&#8226;kg-1&#8226;min-1)、生理盐水灌注组和正常对照组，测定28 d内大鼠血压及尿蛋白。分别于14、28 d处死动物取肾，观察组织学改变，并用免疫荧光、免疫电镜检测nephrin分布。RT-PCR及Western印迹法分别检测nephrin mRNA及蛋白表达。TUNEL法检测足细胞凋亡。结果 (1) AngⅡ灌注组大鼠血压升高，14 d达峰值并维持该水平至28 d；AngⅡ灌注7 d即出现蛋白尿，并持续增加。(2) AngⅡ灌注14 d时，足细胞裂隙膜变窄；灌注28 d时，足突增宽及节段性融合，部分足细胞有凋亡小体形成，少数肾小球出现节段性硬化。TUNEL法检测发现足细胞凋亡[（2.7±1.6）个/肾小球切面]，凋亡数与蛋白尿量呈正相关（r = 0.86，P < 0.01）。(3) AngⅡ灌注14 d时，肾皮质nephrin mRNA及蛋白表达上调（P < 0.05）。nephrin由正常的沿毛细血管袢线状分布向粗颗粒、团块状分布模式转变。AngⅡ灌注28 d时，肾皮质nephrin mRNA及蛋白表达下降（P < 0.05），且nephrin蛋白表达与足细胞凋亡数呈负相关（r = －0.63，P < 0.01）。 结论 AngⅡ灌注诱导的nephrin表达及分布改变可能导致了足细胞凋亡及肾小球硬化的发生与发展。     

足细胞蛋白Nephrin、Podocin与肾小球疾病

肾小球疾病是指累及两侧肾小球的一类疾病,多以蛋白尿为主要临床表现,由于发病机理尚不明确,因此疾病早期缺乏准确有效的检测和诊断手段。近来研究发现足细胞蛋白Nephrin和Podocin在多种肾小球疾病发生发展和诊断预测中起重要作用。本文就近几年Nephrin、Podocin与肾小球疾病的相关研究进行综述。     

地塞米松影响足细胞活动力的相关分子研究

Objective To investigate the potential roles of dexamethasone (Dex) in podocyte motility, and to explore the mechanism of modulating α-actinin-4, nephrin. Methods Podocytes were divided into three groups: Dex group [1 ?滋mol/L Dex+50 mg/L puromycin aminonucleoside (PAN)], PAN group (50 mg/L) and normal control group. Scrape wound assay and Transwell migration assay were used to detect cell motility. Filtering ratio of podocytes was measured by FITC labeled BSA. Real-time PCR and Western blotting were used to examine the expressions of α-actinin-4 and nephrin. Results From the scrape wound assays, the ability of wound repair in podocytes of PAN group was significantly increased (P＜0.01), and the number of migrating cells in this group also rose (P＜0.01). Compared to PAN group, podocytes in Dex group did not enhance the motility after treatment with the same dose PAN (P＜0.01). Real-time PCR and Western blotting showed that Dex could significantly inhibit the up-regulated expression of α-actinin-4 and nephrin induced by PAN. Conclusions Dex can relieve the enhanced motility induced by PAN. Its mechanism may be associated with the modulation of the expressions of α-actinin-4 and nephrin.     

五重散对C-BSA肾炎大鼠肾小球足细胞Nephrin mRNA、VEGF mRNA表达的影响

目的:观察五重散对阳离子化牛血清蛋白(C-BSA)肾病大鼠肾小球Nephrin mRNA、VEGFmRNA表达的影响.方法:通过多次腹腔注射C-BSA建立C-BSA肾病大鼠模型,将其随机分成五重散高剂量组(TCM1)、低剂量组(TCM2),雷公藤多甙片组(GTW),模型组,并设空白对照组,每组各7只,观察各组24 h尿蛋白定量、血浆蛋白、血脂、肾小球足细胞Nephrin mRNA、VEGF mRNA表达.结果:五重散能减少C-BSA肾病大鼠蛋白尿,与模型组相比(P＜0.01),能够上调Nephrin mRNA 表达和减少VEGFmRNA表达,降低血脂,升高血浆白蛋白.结论:五重散对C-BSA模型大鼠具有明显的治疗作用,表现为减少蛋白尿,改善血脂状况,恢复足细胞相关蛋白的表达及其分布,逆转足细胞病变.     

基于疾病归经理论的一半汤对IgA肾病大鼠蛋白尿及Nephrin、CD2AP表达的影响

目的观察一半汤对IgA肾病(IgAN)大鼠蛋白尿及Nephrin、CD2AP表达的影响。方法将56只SPF级Wistar雄性大鼠随机抽取10只作空白组,其余46只造模。采用牛血清白蛋白(BSA)+四氯化碳(CCl4)+脂多糖(LPS)的方法建立IgAN大鼠模型,持续12周,将造模完成后所剩的40只大鼠随机分为模型组、肾炎康复片组、二半汤组、一半汤组,每组各10只。肾炎康复片组、二半汤组、一半汤组分别给予肾炎康复片、二半汤、一半汤灌胃,持续8周。分别于造模第12周,治疗第4,6,8周末测24h尿蛋白定量(24h-UPr),尿常规。治疗第8周末处死大鼠心脏取血,检测血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN),取大鼠肾皮质检测Nephrin、CD2APmRNA及相关蛋白的表达。结果造模完成后,模型组24h-UPr和尿红细胞计数较空白组显著增多(P0.05);治疗完成后,肾炎康复片组、二半汤组、一半汤组24h-Upr较模型组显著降低(P0.05),一半汤组较肾炎康复片组显著降低(P0.05);肾炎康复片组、二半汤组、一半汤组之间红细胞计数无统计学差异(P0.05);肾炎康复片组、二半汤组、一半汤组SCr,BUN较模型组显著降低(P0.05),一半汤组较肾炎康复片组显著降低(P0.05)。肾炎康复片组、二半汤组、一半汤组Nephrin、CD2APmRNA及相关蛋白的表达较模型组显著降低(P0.05),一半汤组较肾炎康复片组显著降低(P0.05)。结论一半汤能降低尿蛋白,保护肾功能,其作用可能与调节Nephrin、CD2AP的表达有关,且疗效较二半汤进一步提高。     

血管紧张素Ⅱ输注诱导大鼠足突滤孔膜改变增加蛋白尿产生

目的:通过直接输注血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的方法观察大鼠尿蛋白及足细胞足突和裂孔结构损伤的变化,分析这些改变与足细胞裂孔膜蛋白nephrin表达改变的相互关系。方法:Wistar大鼠随机分为两组,AngⅡ组通过皮下埋置渗透性微泵(osmotic minipump)以400 ng/(kg.min)持续给予AngⅡ,对照组由生理盐水代替AngⅡ。大鼠每周检测24 h尿蛋白并收集肾组织标本,连续4周。电镜观察并计算肾小球足突宽度。Nephrin蛋白和mRNA检测分别应用免疫荧光及RT-PCR的方法。结果:AngⅡ组大鼠在第1周即出现蛋白尿,且与对照组相比具有显著性差异(P<0.05),并且随试验的进展蛋白尿逐渐增加。肾小球形态学显示在第1周时肾小球基底膜被拉伸变薄,裂孔膜宽度增加,nephrin表达增加;至第2周可见足细胞足突数量明显增多,单位长度基底膜上的裂孔数量增加,同时观察到nephrin的表达较对照组明显增加(P<0.05);到第3,4周时,随着足细胞进一步损伤,基底膜出现有不规则增厚和裸露,足突出现部分的融合和足突裂孔膜的消失,nephrin的表达逐渐下降至低于对照组水平。结论:AngⅡ可以直接导致足细胞结构完整性的破坏,引起蛋白尿,并与肾小球内nephrin的表达密切相关。表明在某些肾小球疾病或损伤中,足突裂孔膜结构和蛋白表达异常是蛋白尿产生的主要原因。