雷帕霉素纳米粒对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的:观察雷帕霉素( RAPA)聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米微粒(RAPA-PLGA-NPs)对血管平滑肌细胞( VSMCs)增殖的抑制作用.方法:原代培养大鼠VSMCs,并采用α-肌动蛋白免疫组化染色进行鉴定;透射电镜观察VSMCs对RAPA-PLGA-NPs的摄取;分别用MTT法和Western blot法检测RAPA-PLGA-NPs对VSMCs增殖的抑制作用以及RAPA靶蛋白(mTOR)下游蛋白表达的影响,并同时以游离RAPA作为对照.结果:成功培养VSMCs并鉴定;透射电镜显示RAPA-PLGA-NPs可被VSMCs大量摄取于细胞质中;MTT结果显示,RAPA-PLGA-NPs(1,10,100 ng/mL)能浓度依赖性地抑制VSMCs增殖(均P＜0.05),且1 ng/mL的RAPA-PLGA-NPs与10 ng/mL游离RAPA的抑制作用相似(p＞0.05);Western blot结果显示,2个浓度(1,10 ng/mL)的RAPA-PLGA-NPs均能降低VSMCs中S6K1和4E-BP1磷酸化水平,且作用均较游离RAPA( 10 ng/mL)明显.结论:RAPA-PLGA-NPs穿透力强,能迅速被细胞摄取,生物学效应明显强于其游离药物.     

Effect of vitamin K2 on β-glycerophosphate-induced calcification in rat vascular smooth muscle cells and the mechanism

Objective To explore the effect of vitamin K2 on β-glycerophosphate(β-GP)-induced rat vascular smooth muscle cells (VSMCs) calcification and and the mechanism. Methods VSMCs were obtained from rat aortic, and identified by immunocytochemistry, then randomly divided into control group, high phosphorus group, vitamin K2 group (the group was settled three subgroups according to the concentration of vitamin K2 based on the high phosphorus medium, namely 10 μmol/L, 25 μmol/L, 50 μmol/L) and noggin (bone morphogenetic protein pathway inhibitor) group. Calcification was visualized by Alizarin red staining, calcium load in cells was quantified by o-cresolphthalein complexone method and alkaline phosphatase (ALP) activity was measured after stimulating 14 days, gene expressions of bone morphogenetic protein - 2 (BMP-2), SMAD1, SMAD7 and Runx2 mRNA were detected by RT-PCR, Runx2 protein levels was detected by Western blotting after stimulating 3 days. Results Compared with the cells in control group, high phosphorus induced cell calcification, increased ALP activity, up-regulated the expression of BMP-2, SMAD1, Runx2 mRNA (P＜0.05) and down-regulated the expression of SMAD7 (P＜0.01),while compared with high phosphorus group, the calcium deposition, ALP activity and the expression of BMP-2, SMAD1, Runx2 mRNA were remarkably reduced in a dose-dependent manner by treatment with vitamin K2 (P＜0.05) and the expression of SMAD7 was increased (P＜0.01). Compared with high phosphorus group, SMAD1 and Runx2 expression in noggin group were remarkably reduced(P＜0.01). Conclusion Vitamin K2 inhibits β-glycerophosphate-induced VSMCs calcification which correlates with the suppression of the expression of osteoblast markers through the down-regulation of bone morphogenetic protein pathway.     

高分子修饰细菌纤维素细胞相容性的初步研究

目的筛选适于平滑肌细胞附着生长的聚乳酸－共－聚乙醇酸(PLGA)修饰的细菌纤维素材料。 方法不同比例PLGA修饰的细菌纤维素材料分为5组：单纯PLGA材料(50P组);经PLGA修饰的细菌纤维素材料组则包括聚乳酸(PLA) ∶聚乙醇酸(PGA)＝50 ∶50的50PB组、PLA ∶PGA＝75 ∶25的75PB组和PLA ∶PGA＝90 ∶10的90PB组;单纯细菌纤维素为空白对照组。将平滑肌细胞接种于不同组别的材料上培养7 d,扫描电镜观察细胞的生长状态,并用荧光染色计数活/死细胞,CCK8法测定材料上的细胞增殖情况并绘制增殖曲线。不同材料上细胞数量及增殖数据用单因素方差分析比较、两两比较用SNK检验。 结果接种后第3天的扫描电镜可见细胞均能在各组材料上成功附着并生长,但75PB组和空白对照组细胞生长形态较差。活/死细胞染色结果显示,平滑肌细胞可以在各组材料中均匀的分布以及生长,活细胞计数各组差异无统计学意义(F＝1.454,P>0.05)。细胞生长曲线检测显示,接种后3 d及5 d,平滑肌细胞在各组材料上的增殖量差异无统计学意义(3 d F＝1.672,P>0.05; 5 d F＝1.19,P>0.05);接种后7 d, 50PB组和空白对照组的平滑肌细胞增殖优于90PB组及75PB组(F＝13.328,P<0.01)。 结论PLA/PGA比例为50 ∶50的PLGA修饰细菌纤维素后的材料细胞相容性更优,可以成为用于组织修复的生物材料。     

兔骨髓间充质细胞分化为肌细胞的实验研究

目的　探讨兔骨髓间充质细胞 (BMSCs)体外分化为肌细胞的可能性。方法　穿刺法抽取成年新西兰兔双侧股骨骨髓 ,分离培养BMSCs ,5 -溴脱氧尿苷 (bromod eoxyuridine)标记 ,再经过 5一氮杂胞苷 (5 azacytidine)诱导或与乳鼠心肌细胞共培养 ,通过免疫细胞化学染色及透射电镜检查 ,研究其分化情况。结果　体外培养的BMSCs无论是在 5 aza诱导还是在与心肌细胞共培养的条件下 ,均有部分细胞表达横纹肌肌动蛋白 (α actin)。电镜检查显示分化后的细胞具有原始肌小节样结构。结论　成年兔BMSCs在 5 aza诱导或与心肌细胞共培养的条件下均可向肌细胞方向分化     

通脉养心丸中心肌保护活性物质的筛选

目的基于细胞模型以及高效液相色谱—质谱联用技术对通脉养心丸中心肌保护活性物质进行筛选研究。方法利用高效液相制备技术对通脉养心丸进行制备分离,然后采用过氧化氢氧化损伤H9c2大鼠心肌细胞模型对通脉养心丸活性组分进行筛选。利用高效液相色谱—质谱联用技术对活性组分进行分析,通过查阅文献和根据化合物裂解规律,鉴定推断出可能的活性化合物。结果发现通脉养心丸中10个组分具有明显的心肌保护活性,考察了其中5个组分的半数有效浓度并发现其呈现良好的量效关系。从这5个组分中推断出11个可能的活性化合物,包含甘草酸、甘草香豆素、甘草利酮、Glyasperin A等。结论筛选出通脉养心丸中心肌保护活性物质,有望为中药复方制剂活性物质筛选研究提供借鉴。     

心肌梗死后抑郁大鼠心室肌细胞L型钙电流的动力学改变

目的:观察心肌梗死后抑郁大鼠心室肌细胞L型钙电流(ICa-L)的动力学特性。方法:将60只SD大鼠随机分为4组:正常对照组(n=10),心梗组(n=20),抑郁组(n=10),心梗后抑郁组(n=20)。通过结扎冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,予慢性不可预见性温和刺激建立抑郁模型,利用酶解法分离梗死周边区心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术记录L型钙电流的变化,研究抑郁对心肌梗死后大鼠心室肌细胞ICa-L的动力学影响。结果:与心梗组比较,心梗后抑郁组的I-V曲线上移,激活曲线右移,并延长失活后恢复时间。结论:抑郁可能通过改变心肌梗死后心室肌细胞L型钙通道的动力学来诱发室性心律失常。     

Aβ25-35诱导大鼠心肌细胞内质网应激和细胞凋亡的研究

目的 研究β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)对培养大鼠心肌细胞的凋亡及内质网应激相关蛋白的影响,探讨内质网应激在A β25-35所致心肌损伤中的作用.方法 体外培养大鼠心肌细胞,给予不同浓度Aβ25-35刺激,用MTT方法观察心肌细胞的存活率,采用Hoechst33258染色观察心肌细胞的形态,流式细胞术检查细胞凋亡率,采用Western blot方法检测内质网应激蛋白X盒结合蛋白-1(XBP-1)、葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的水平,以及凋亡蛋白cleaved caspase-3和cleaved PARP的水平.结果 Aβ25-35可以降低体外培养大鼠心肌细胞的存活率,促进凋亡,且呈现浓度依赖的方式.给予Aβ25-35后内质网应激蛋白XBP-1、GRP78和CHOP表达增加,同时凋亡蛋白cleaved caspase-3和cleaved聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)表达也增加.结论 Aβ25-35可以导致体外培养的大鼠心肌细胞发生凋亡,而内质网应激可能参与了心肌细胞发生凋亡过程,为有效防治AD相关性心肌损伤提供新思路.     

胰岛素样生长因子1调节胃平滑肌细胞表达干细胞因子的ERKMAPK通路

目的 探讨胰岛素样生长因子1(IGF-1)调节胃平滑肌细胞(SMC)表达干细胞因子(SCF)的信号传导途径.方法 培养SD大鼠胃SMC,α-肌动蛋白免疫荧光鉴定,Western印迹、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃SMC表达SCF的变化情况:(1)IGF-1作用后;(2)IGF-1受体(IGF-1Rα)抗体阻断IGF-1R后;(3)PD-98059、LY-294002分别抑制丝裂原激活蛋白激酶的激酶(MEK)、磷脂酰激醇3激酶(PI3K)后.结果 在无血清培养条件下,SCF在大鼠胃SMC中少量表达,低剂量IGF-1(5和10μg/L)对SCF表达均无影响(均P>0.05);中、高剂量IGF-1(50、100、150 μg/L)诱导分别使SCF蛋白表达上调达2.79、5.51及5.35倍,mRNA表达上调达1.81、2.54及2.38倍(均P<0.05);且促进SCF合成的最高峰在第16小时(蛋白表达上调达2.36倍,mRNA表达上调达5.51倍,均P<0.05).IGF-1Rot抗体可抑制SCF合成,抑制作用呈浓度依赖性(均P<0.05).分别用PD-98059、LY-294002预处理SMC、再用IGF-1诱导,PD-98059能部分阻断SCF的表达(蛋白抑制率为23%,mRNA抑制率为48%,均P<0.05)、LY-294002对SCF的表达无影响(P>0.05).结论 IGF-1可通过IGF-1R以时间和剂量依赖性方式诱导胃SMC产生SCF,且IGF-1诱导SCF的表达可能依赖于ERKMAPK信号传导通路.