肛门直肠及畸形发育胚胎学的研究

[目的]通过采用乙烯硫脲(ETU)诱导孕鼠胎仔肛门直肠畸形,研究胚胎发育过程中肛门内括约肌间神经节细胞及神经丛的数目及形态。[方法]采用Wastar孕鼠16只,随机分为空白对照组及模型组,每组8只,在妊娠的d7、d9、d11.5及d13.5、d14.5、d15、d16由胃管注入125mg/kg的乙烯硫脲(ETU),空白对照组8只Wastar大鼠于d11.5、d13.5、d14、d16,模型组4只Wastar大鼠于11.5d、13.5d、14d、15d、16d进行取材,取胎仔行正中矢状面进行连续切片,取材标本进行HE及PAS染色,观察直肠肛管发育情况及肛门内括约肌肌间神经节细胞及神经丛数的数目。[结果]11d、13d模型组产生的肛门直肠畸形的发生率为75.00%(6/8),模型组肛门直肠畸形胎仔每个视野下肛门内括约肌肌间神经节的细胞数为(1.341±0.024),神经丛数为(0.406±0.029),空白对照组胎仔为(3.156±0.074)、(1.375±0.053),两者比较差异有统计学意义(P﹤0.05);其中模型组中正常胎仔的数值分别为(3.087±0.059)、(1.324±0.031),与空白对照组比较差异无统计学意义(P﹥0.05)。[结论]乙烯硫脲是良好的诱导肛门直肠畸形的致畸剂,肛门内括约肌肌间神经节细胞数及神经丛数的减少是肛门直肠畸形的病理学改变的重要影响因素。     

Semaphorin3A通过Notch1对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的：探讨轴索导向分子Semaphorin3A（SEMA3A）对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞（RGC）凋亡的影响及可能机制。方法：40只SPF级成年雄性SD大鼠随机分为对照组（正常喂养）、模型组（建立DR模型）、si-SEMA3A组（建立DR模型后玻璃体内注射SEMA3A-siRNA慢病毒）、si-SEMA3A+DAPT组（建立DR模型后玻璃体内注射SEMA3A-siRNA慢病毒和Notch1通路抑制剂DAPT），每组10只。双标记免疫荧光染色检测视网膜SEMA3A蛋白表达定位；HE染色检测RGC密度；TUNEL法检测RGC凋亡；ELISA检测视网膜炎症因子IL-6和TNF-α表达水平；Western-blot检测视网膜SEMA3A、Notch1及Caspase-3蛋白表达水平。结果：通过SEMA3A和Brn3a（RGC标志物）双标确定SEMA3A在RGC中特异性表达，这说明SEMA3A对视网膜的损伤作用可能是通过RGC实现的。与对照组比较，模型组RGC密度较低（P＜0.05）。与模型组比较，si-SEMA3A组RGC密度较高（P＜0.05），而si-SEMA3A+DAPT组RGC密度低于si-SEMA3A组（P＜0.05）。对照组大鼠视网膜组织中未检测到TUNEL阳性RGC。与模型组比较，si-SEMA3A组细胞凋亡率较低（P＜0.05），而si-SEMA3A+DAPT组细胞凋亡率高于si-SEMA3A组（P＜0.05）。与对照组比较，模型组IL-6、TNF-α、SEMA3A和Caspase-3表达水平较高，而Notch1表达水平较低（P＜0.05）；与模型组比较，si-SEMA3A组IL-6、TNF-α、SEMA3A和Caspase-3表达水平较低，而Notch1表达水平较高（P＜0.05）；而si-SEMA3A+DAPT组IL-6、TNF-α、SEMA3A和Caspase-3表达水平高于si-SEMA3A组，Notch1表达水平低于si-SEMA3A组（P＜0.05）。结论：SEMA3A可能通过Notch1信号通路参与糖尿病大鼠RGC凋亡，有望成为糖尿病视网膜病变的治疗靶点。     

RNFL和GCC在慢性闭角型青光眼神经损伤评价中的意义

目的探讨视网膜视盘周围神经纤维层（retinanervefiberlayer，RNFL）厚度和黄斑区神经节细胞复合体（ganglioncellcomplex，GCC）厚度在评价慢性闭角型青光眼神经损伤中的意义。方法按视野缺损程度将慢性闭角型青光眼患者分成轻度、中度、重度视野缺损组。测量3组的RNFL平均厚度（AVGRNFL）、上方厚度（SUPRNFL）及下方厚度（INFRNFL）和GCC平均厚度（AVGGCC）、上方厚度（SUPGCC）及下方厚度（INFGCC）。计算各个参数的ROC曲线，AUC越大（越接近1）则诊断价值越大。多元线性回归分析慢性闭角型青光眼视野缺失与RNFL及GCC的相关性。结果轻/中度视野缺损组与重度视野缺损组AVGRNFL、SUPRNFL、INFRNFL、AVGGCC、SUPGCC、INFGCC差异均有统计学意义（均P＜0.01）；轻度视野缺损组与中重度视野缺损组间RNFL和GCC厚度的AUC比较，以INFGCC的AUC最大（0.801），诊断灵敏度最大。慢性闭角型青光眼视野缺损值与SUPRNFL（B=-0.156，P＜0.05）和INFGCC（B=-0.450，P＜0.01）均呈负相关。结论RNFL和GCC厚度是青光眼视神经损伤结构定量检测的重要指标，其中以INFGCC厚度参数灵敏度最高，与视野缺损呈高度负相关。需要开发更先进的技术和相关软件来获取早期青光眼的视神经结构损伤。