重组人促红细胞生成素在肝癌行肝移植患者中的应用

目的评价重组人促红细胞生成素在纠正原发性肝癌而预行原位肝移植术受者的术前贫血状态的疗效,以及减少受者在原位肝移植手术中和手术后异体血液输注量的效果.方法对诊断为原发性肝癌准备肝移植的受者,20人随机分为治疗组和对照组,治疗组应用人重组促红细胞生成素-β皮下注射,同时口服琥珀酸亚铁.对照组单纯口服琥珀酸亚铁.分别测定研究对象在用药前、用药结束、第4天的外周血指标,记录研究对象术中和术后失血量、异体血液输注量和研究期间可能出现的用药相关性并发症.结果患者用药前治疗组和对照组基础参数值亦无差别(P＞0.05),用药后对照组无明显变化(P＞0.05),而治疗组用药后各参数指标均明显提高,;术后第4日各参数指标比较两组有差别,治疗组略高于对照组(P＜0.05);术中失血量两组无差别(P＞0.05),而治疗组异体输血量为510±255ml,对照组为925±239ml,两组比较有明显差别(P＜0.01),治疗组明显小于对照组.治疗组和对照组术后输注异体血液的人数,治疗组均少于对照组.结论应用重组人促红细胞生成素可以明显改善肝移植受者术前存在的贫血状态,减少术中异体血液的输注量和术后继续需要输注异体血液的可能.     

促红细胞生成素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨促红细胞生成素(促红素)预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制.方法:40只SD大鼠随机分为5组(每组8只):假手术组、模型组、促红素组、锌原卟啉组、促红素 锌原卟啉组,建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,缺血45 min,再灌注180 min,采用免疫组织化学及逆转录-聚合酶链反应分别测定大鼠心肌组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、血红素氧合酶-1(HO-1)和mRNA的表达,电镜观察心肌超微结构的病理学改变.结果:与假手术组比,其余4组缺血再灌注心肌中MCP-1、HO-1免疫组化平均光密度值和逆转录-聚合酶链反应mRNA表达增多(P均＜0.01),差异有统计学意义;与模型组比,促红素预处理能明显上调HO-1 mRNA表达,并降低缺血再灌注心肌MCP-1 mRNA表达(P均＜0.05～0.01),差异有统计学意义,同时改善心肌超微结构的损伤,使用锌原卟啉后,促红素预处理的保护作用消失(P＞0.05);与促红素组比较,锌原卟啉组和促红素 锌原卟啉组大鼠心肌中HO-1mRNA表达均降低,MCP-1 mRNA表达均增高(P＜0.05～0.01),差异有统计学意义,且心肌超微结构损伤加重.结论:促红素预处理可能通过增强HO-1表达并降低MCP-1表达,改善心肌超微结构的损伤,对大鼠心肌缺血再灌注损伤产生保护作用.     

促红细胞生成素对新生大鼠心脏成纤维细胞氧化应激时一氧化氮合酶系统的影响

目的:探讨促红细胞生成素(EPO)对心脏成纤维细胞(CFs)氧化应激时一氧化氮合酶(NOS)系统的影响,以及PI3-K/Akt信号途径在其中的作用。方法:应用胰酶和胶原酶双酶法分离培养新生大鼠CFs,EPO、过氧化氢(H2O2)和PI3-K抑制剂LY294002不同因素干预。化学酶法检测CFs培养液中的NO浓度以及总NOS和其亚型的活性。Western blot检测Akt、p-Akt、eNOS、iNOS蛋白的表达。结果:氧化应激使CFs中iNOS的表达显著上调,活性增强;eNOS蛋白的表达明显下降。同时CFs培养液中NO的合成增加显著,达到(25.94±2.57)μmol/L,是对照组的4倍多(P<0.01)。EPO显著抑制CFs氧化应激时iNOS蛋白的表达,同时上调eNOS蛋白,总的NO浓度也显著下降。Akt磷酸化形式p-Akt的表达水平也明显提高。PI3-K抑制剂LY294002能阻断EPO促进eNOS和p-Akt蛋白表达的作用,但EPO抑制iNOS的作用不能完全被阻断。结论:EPO能促进新生大鼠CFs氧化应激时eNOS蛋白的合成,抑制iNOS蛋白的表达。其促进eNOS的表达是通过激活PI3-K/Akt细胞信号途径来实现,抑制iNOS的机制有待进一步探讨。     

促红细胞生成素与粒细胞集落刺激因子联合应用对创伤性脑损伤大鼠神经再生的影响

目的探讨促红细胞生成素(EPO)和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)联合治疗对创伤性脑损伤(TBI)大鼠神经功能恢复及神经细胞再生的影响。方法将125只雄性Wistar大鼠随机分成假手术对照组(Sham组)、脑创伤模型组(TBI组)、EPO治疗组(T+E组)、G-CSF治疗组(T+G组)、EPO和G-CSF联合治疗组(T+E+G组),然后再按照1、3、5、7、14 d随机分为5个亚组,每个亚组5只。用Feeney法制备脑创伤模型,各治疗组大鼠均于造模后立即给予相应的干预措施,共3 d。各组大鼠分别于术后1、3、5、7、14 d进行神经功能缺失评分(mNSS),并处死大鼠取脑组织行5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)单标及BrdU/神经元核抗原(NeuN)、BrdU/胶质纤维酸性蛋白(GFAP)双标免疫荧光染色检测新生增殖细胞数量及其分化方向。各组大鼠mNSS评分、血液学指标及免疫荧光染色结果的差异用单因素方差分析,两两比较用LSD-t检验。结果 (1)各治疗组在用药后5、7、14 d时mNSS评分明显低于TBI组(P0.05),T+E+G组mNSS评分又明显低于单独治疗组。(2)T+E+G组从第3天开始创伤周围脑组织BrdU阳性细胞数明显高于其他各组(P0.05),于7 d时达高峰;对比各组7 d时脑组织BrdU/NeuN和BrdU/GFAP双阳性细胞数,T+E+G组均明显高于其他各组(P0.05),两单独治疗组也明显高于Sham组和TBI组(P0.05)。结论联合应用EPO和G-CSF能明显改善TBI后大鼠神经功能症状,促进创伤周围脑组织神经细胞再生,并向神经元和星形胶质细胞方向分化。     

H2O2对大鼠骨骼肌卫星细胞凋亡和线粒体膜电位的影响及EPO的保护作用

目的: 探讨过氧化氢(H2O2)对大鼠骨骼肌卫星细胞(SMSC)凋亡和线粒体膜电位(MMP)的影响以及促红细胞生成素(EPO)的保护作用。方法: 取体外培养的骨骼肌卫星细胞,随机分为正常对照组、H2O2组、H2O2+EPO组,采用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率和MMP的平均荧光强度,Hoechst 33258染色后荧光显微镜观察凋亡细胞的形态学变化。结果: H2O2组凋亡发生率最高,为(22.13±1.79)%,经10、20、40 kU/L浓度的EPO预处理后凋亡率分别为(16.47±2.53)%、(4.97±0.55)%、(2.93±0.47)%;H2O2干预组MMP最低,为9.70±0.09,经10、20、40 kU/L浓度的EPO预处理后MMP分别为12.67±0.32、27.90±0.66、44.53±0.93,对照组凋亡率为(1.93±0.57)%,MMP为51.37±0.64;在H2O2干预组和低剂量EPO预干预组,Hoechst 33258染色呈现明显的凋亡征象。结论: EPO可抑制H2O2诱导的细胞凋亡并稳定线粒体膜电位。     

Acute anoxia stimulates proliferation in adult neural stem cells from the rat brain

Hypoxic-ischemic damage is a major challenge for neuronal tissue. In the present study, we investigated the effects of anoxia and glucose deprivation on adult neural stem cells (NSCs) in vitro. We assessed glucose deprivation, anoxia and the combination of the latter separately. After 24 h of anoxia, cell numbers increased up to 60% compared to normoxic controls. Whereas nearly all normoxic cells incorporated the mitotic marker BrdU (99%), only 85% of the anoxic cells were BrdU-positive. Counting of interphase chromosomes showed 8-fold higher cell division activity after anoxia. The number of necrotic cells doubled after anoxia (14% compared to 7% after normoxia). Apoptosis was measured by two distinct caspases assays. Whereas the total caspase activity was reduced after anoxia, caspase 3/7 showed no alterations. Glucose deprivation and oxygen glucose deprivation both reduced cell viability by 56 and 53%, respectively. Under these conditions, total caspases activity doubled, but caspase 3/7 activity remained unchanged. Erythropoietin, which was reported as neuroprotective, did not increase cell viability in normoxia, but moderately under oxygen glucose deprivation by up to 6%. Erythropoietin reduced total caspase activity by nearly 30% under all the conditions, whereas caspase 3/7 activity was not affected. Our results show that anoxia increases proliferation and viability of adult NSCs, although a fraction of NSCs does not divide during anoxia. In conclusion, anoxia increased cell viability, cell number and proliferation in NSCs from the rat brain. Anoxia turned out to be a highly stimulating environmental for NSCs and NSCs died only when deprived of glucose. We conclude that the availability of glucose but not of oxygen is a crucial factor for NSC survival, regulating apoptotic pathways via caspases activity other than the caspases 3/7 pathway. Therefore, we conclude that NSCs are dying from glucose deprivation, not from hypoxic-ischemic damage.     

急性白血病患者血清促红细胞生成素变化及其与化疗的关系

目的 分析急性白血病患者血清促红细胞生成素(Epo)水平及其与血红蛋白(Hb)的关系,以及化疗对其的影响.方法 应用ELISA法检测急性白血病患者血清Epo水平,并观察化疗后Epo变化.结果 32例急性白血病患者化疗前Epo水平(49.58±14.87mIU/mL)高于健康对照者(11.96±4.78mIU/mL)(P＜0.01);Epo水平与Hb水平存在负相关(r =-0.541,P＜0.01);化疗2疗程和4疗程后,Epo水平分别为52.12±15.16mIU/mL和63.15±16.42mIU/mL,与化疗前比较,差异有统计学意义(F =4.547,P＜0.01);化疗2疗程和4疗程后一周,Hb分别为62.0±12.3g/L和56.8±11.1g/L,与化疗前Hb(78.0±14.9g/L)比较,差异有统计学意义(F=4.007,P＜0.01).结论 急性白血病患者Epo合成机制完整,虽然贫血,但EPO水平是增高的,化疗抑制期内随着贫血加重,Epo水平升高.     

rhIL－6、rhGM－CSF和rhEPO对人骨髓造血干细胞的调节作用

重组人白细胞介素６（ｒｈＩＬ－６）和重组人粒—单细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）与正常人造血干细胞培养１周后，ｒｈＩＬ－６组干细胞数增至４．７±０．７倍；ｒｈＧＭ－ＣＳＦ组增至９．３±１．０倍；ｒｈＩＬ－６＋ＧＭ—ＣＳＦ组增至１３．４±３．３倍。与对照组比较，Ｐ均＜０．０１．造血干细胞ＣＦＵ－Ｅ集落分析：ｒｈＩＬ－６组未见ＣＦＵ－Ｅ集落形成；ｒｈＩＬ－６＋ＥＰＯ组则ＣＦＵ－Ｅ集落明显高于ｒｈＥＰＯ组，ｐ＜０．０１．造血干细胞ＣＦＵ－Ｍｉｘ集落分析：ｒｈＩＬ－６组和ｒｈＧＭ－ＣＳＦ组可见ＣＦＵ－ＧＭ浆落，无ＣＦＵ＋Ｍｉｘ集落形成；ｒｈＩＬ－６＋ＧＭ－ＣＳＦ组有ＣＦＵ－Ｍｉｘ集落形成；ｒｂＩＬ－６＋ＧＭ－ＣＳＦ＋ＥＰＯ联合应用，有ＣＦＵ－ｎ，ｍ，Ｍ，Ｅ混合集落数增多。实验结果提示ｒｈＩＬ－６对造血干细胞有直接的刺激作用，主要刺激粒—单系组细胞增殖。ｒｈＩＬ－６与ｒｈＥＰＯ有协同作用，能促进ｒｈＥＰＯ刺激红系祖细胞的作用。ｒｈＩＬ－６与ｒｈＧＭ－ＣＳＦ亦有协同作用，可以刺激多能干细胞形成混合集落。     

人重组促红细胞生成素增强耐缺氧作用的实验研究

目的观察人重组促红细胞生成素(EPO)对小鼠缺氧耐受力的影响。方法小鼠随机分为EPO组和对照组,经皮下注射不同剂量的EPO和0.9%氯化钠注射溶液,1次/d,连续1周。检测小鼠血红蛋白、红细胞比容改变,测定常压耐氧实验、亚硝酸中毒存活试验以及急性脑缺血性缺氧试验等指标。结果EPO能明显增加小鼠血液内血红蛋白含量和红细胞比容(与对照组相比,P<0.01),缺氧存活时间显著延长(与对照组相比,P<0.01)。结论EPO能明显增强机体的耐缺氧能力。     

促红细胞生成素对环孢素致人肾小管上皮损伤保护作用

目的体外探索促红细胞生成素（EPO）拮抗环孢素A（CsA）所致肾小管上皮损伤的作用机制。方法采用人近曲肾小管上皮细胞作为体外实验模型,实验分对照组、CsA对照组、EPO 15U/mL与CsA合用组、EPO 30U/mL与CsA合用组,MTT法检测细胞增殖抑制率,采用金氏公式评价EPO与CsA合用拮抗作用效果,采用ELISA方法检测细胞培养上清液中肾损伤分子-1（KIM-1）的表达量,采用流式细胞仪检测细胞生存情况。结果采用金氏公式评价结果显示,EPO在15U/mL与30U/mL浓度时可以拮抗CsA对肾小管上皮的损伤作用;对比CsA对照组,EPO在15U/mL与30U/mL浓度可降低细胞培养上清液中KIM-1的表达量（P〈0.05）,降低凋亡细胞比率（P〈0.05）,降低坏死细胞比率（P〈0.05）,增加活细胞比率（P〈0.05）。结论 EPO拮抗CsA所致肾小管上皮损伤,可能通过减少细胞凋亡而实现。