靶向抑制miR-155增加骨髓瘤细胞对化疗药物的敏感性

目的:探讨靶向抑制miR-155对骨髓瘤细胞化疗敏感性的影响,并研究其分子作用机制.方法:利用qRT-PCR测定人骨髓瘤细胞株及耐药株中miR-155的表达水平;利用LipofectamineTM 2000将miR-155 inhibitor和阴性对照转染至人骨髓瘤耐药细胞株中;利用MTT法检测转染后人骨髓瘤耐药细胞对...     

改进的PCR在抑癌基因启动子CpG岛甲基化检测中的应用

目的改进聚合酶链反应（PCR）,并检验改进后的方法在甲基化检测中的可行性。方法培养人乳腺癌细胞株MCF-7,提取基因组DNA,利用亚硫酸氢盐测序法,用常规、降落及改进PCR分别扩增,比较扩增效果,PCR产物纯化回收后,TA克隆入载体pGEM-T,转化大肠杆菌（E．coli DH5α）,筛选阳性克降,经PCR扩增鉴定后获得阳性重组质粒,测序比对。结果改进后PCR与常规、降落PCR相比,扩增效率增高,二聚体及非特异性扩增减少;测序结果显示,MCF-7细胞基因组DNA中,RASSFIA基因启动子CpG岛是高甲基化的,E-cadherin基因启动子CpG岛末呈现高甲基化状态。结论改进后方法提高了以PCR为基础的甲基化分析的可行性,更适用于基因甲基化状态的检测,并为扩增富含CG的基因启动子区域提供参考。     

Anxa5 mediates the in vitro malignant behaviours of murine hepatocarcinoma Hca-F cells with high lymph node metastasis potential preferentially via ERK2/p-ERK2/c-Jun/p-c-Jun(Ser73) and E-cadherin

ObjectiveAnnexin A5 (Anxa5) is associated with the progression of some cancers, while its role and regulation mechanism in tumor lymphatic metastasis is rarely reported. This study aims to investigate the influence of Anxa5 knockdown on the malignant behaviours of murine hepatocarcinoma Hca-F cell line with high lymph node metastatic (LNM) potential and the underlying regulation mechanism.MethodsRNA interfering was performed to silence Anxa5 in Hca-F. Monoclonal shRNA-Anxa5- Hca-F cells were obtained via G418 screening by limited dilution method. Quantitative real-time RT-PCR (qRT-PCR) and Western blotting (WB) were applied to measure Anxa5 expression levels. CCK-8, Boyden transwell-chamber and in situ LN adhesion assays were performed to explore the effects of Anxa5 on the proliferation, migration, invasion and adhesion capacities of Hca-F. WB and qRT-PCR were used to detect the level changes of key molecules in corresponding signal pathways.ResultsWe obtained two monoclonal shRNA-Anxa5-transfected Hca-F cell lines with stable knockdowns of Anxa5. Anxa5 knockdown resulted in significantly reduced proliferation, migration, invasion and in situ LN adhesion potentials of Hca-F in proportion to its knockdown extent. Anxa5 downregulation enhanced E-cadherin levels in Hca-F. Moreover, Anxa5 affected Hca-F behaviours specifically via ERK2/p-ERK2/c-Jun/p-c-Jun(Ser73) instead of p38MAPK/c-Jun, Jnk/c-Jun and AKT/c-Jun pathways.ConclusionsAnxa5 mediates the in vitro malignant behaviours of murine hepatocarcinoma Hca-F cells via ERK2/c-Jun/p-c-Jun(Ser73) and ERK2/E-cadherin pathways. It is an important molecule in metastasis (especially LNM) and a potential therapeutic target for hepatocarcinoma.     

MiR-122在肝细胞癌中的表达及其与肿瘤表型标志物的相关性研究

目的：检测肝细胞癌（HCC）组织中 miR-122和上皮性钙粘蛋白（E-cadherin）、转化生长因子-β1（TGF-β1）的表达,并分析miR-122与E-cadherin、TGF-β1之间的相关性。方法应用实时荧光定量PCR技术检测45例HCC及其配对癌旁组织中miR-122的表达情况;免疫组织化学法检测上述HCC及其配对癌旁组织中E-cadherin、TGF-β1的表达,分析miR-122的表达量与E-cadherin、TGF-β1之间的相关性。结果 miR-122在肝癌组织低表达,肝癌组织中miR-122表达量低于其癌旁组织者有41例,表达量相仿或高于其癌旁组织者4例,差异具有统计学意义（P＜0.05）。E-cadherin在HCC组织中的表达显著低于癌旁组织（P＜0.05）,HCC组织中TGF-β1表达显著高于癌旁组织（P＜0.05）。HCC组织中miR-122表达与E-cadherin呈正相关（r＝0.827）,与TGF-β1表达呈负相关（r＝-0.356）。结论 miR-122在HCC组织中低表达,其表达量与肝癌分化程度正相关。     

辣椒碱对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及机制

目的:观察辣椒碱(capsaicin)对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及可能的分子机制。方法:设立不同浓度辣椒碱组以及空白组,采用细胞计数试剂盒-8法(CCK-8)检测辣椒碱(0,25,50,75,100,150,200,250μmol·L-1)处理肝癌SMMC-7721细胞24 h后的细胞活性;穿透小室(transwell)检测辣椒碱(0,50,75,100μmol·L-1)的肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测辣椒碱(0,50,75,100μmol·L-1)处理肝癌SMMC-7721细胞24 h后,对细胞中的E-钙黏蛋白(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin),基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达水平的影响。结果:与空白组比较,辣椒碱(25,50,75,100μmol·L-1)作用24 h后均对细胞存活率未产生明显影响,从150μmol·L-1开始,随着辣椒碱浓度逐渐升高,细胞存活率逐渐下降(P0.01),且呈剂量依赖效应;与空白组比较,辣椒碱(50,75,100μmol·L-1)干预能显著抑制肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭,且呈浓度依赖效应(P0.01);与空白组比较,辣椒碱(50,75,100μmol·L-1)干预能明显上调肝癌SMMC-7721细胞中E-cadherin蛋白表达水平(P0.01),下调Vimentin,MMP-2,MMP-9蛋白的表达水平(P0.01)。结论:辣椒碱干预对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭具有抑制作用,可能与其上调肝癌SMMC-7721细胞中E-cadherin蛋白的表达,下调肝癌SMMC-7721细胞中Vimentin,MMP-2和MMP-9蛋白的表达有关。     

辣椒素对人大细胞肺癌NCI-H460细胞侵袭能力及E-钙黏蛋白、Snail蛋白表达的影响

目的观察辣椒素对人大细胞肺癌NCI-H460细胞侵袭能力及E-钙黏蛋白(E-cadherin)和Snail蛋白表达的影响,探讨其抗非小细胞肺癌的可能机制。方法体外培养NCI-H460细胞,以不同终浓度辣椒素进行处理,未加辣椒素为对照组。采用Hoechst33342核染色分析、Transwell小室细胞侵袭实验及Western blot检测,观察辣椒素对NCI-H460细胞凋亡、侵袭能力及E-cadherin、Snail蛋白表达变化的影响。结果与对照组比较,Hoechst33342核染色分析表明,辣椒素各浓度组可明显诱导NCI-H460细胞凋亡(P0.05);Transwell体外侵袭实验结果显示,辣椒素可显著抑制侵袭穿膜细胞数(P0.05);Western blot检测结果表明,辣椒素各浓度组E-cadherin表达水平明显升高、Snail表达水平明显降低(P0.05)。结论辣椒素能明显诱导NCI-H460细胞凋亡;降低Snail表达、刺激E-cadherin的表达从而抑制NCI-H460细胞侵袭能力,可能是其抗非小细胞肺癌的机制之一。     

乳腺浸润性导管癌组织中表皮钙黏蛋白的表达及其意义

目的 探讨乳腺浸润性导管癌中表皮钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)的表达及其意义.方法 选取2005年1月-2009年12月的组织病理切块,用免疫组织化学EnVision二步法检测63例乳腺浸润性导管癌(invasiveductal carcinoma,IDC)组织中E-cad的表达情况,设为IDC组;另检测...     

口腔鳞癌中S100A4蛋白和E-cad的表达及意义

目的 探讨口腔鳞状细胞癌（oral squarnous cell carcinoma,OSCC）中S100A4蛋白和上皮钙粘蛋白（E—cadherin,E—cad）的表达及意义。方法 采用免疫组化SP法检测61例OSCC组织中S100A4、E—cad表达情况,分析二者的表达与临床病理特征之间的关系。结果 S100A4蛋白的表达与组织学分级无关（P〉0．05）,与淋巴结转移呈正相关（P〈0．05）;E-cad的表达与组织学分级呈正相关（P〈0．05）,与淋巴结转移呈负相关（P〈0．05）;S100A4蛋白和E—cad的表达呈负相关（P〈0．05）。结论 E-cad对OSCC的分化起重要作用;E-cad、S100A4蛋白和OSCC的侵袭和转移密切相关;S100A4蛋白和E-cad的表达与口腔鳞癌的进展密切相关,是判断口腔鳞癌生物学行为、预测转移趋势的有价值的指标。     

低氧对食管癌Eca109细胞体外迁移及侵袭的影响

 目的 探讨低氧对食管癌迁移及侵袭能力的影响及其作用机制。方法 采用CoCl2化学低氧法模拟肿瘤低氧微环境,半定量RT-PCR和免疫细胞化学分别检测不同低氧时相时食管癌Eca109细胞中低氧诱导因子-1α（HIF-1α）、E-钙粘蛋白及基质金属蛋白酶-2（MMP-2）mRNA及蛋白的表达。Western印迹法检测雷帕霉素联合低氧处理Eca109细胞后,HIF-1α、E-钙粘蛋白及MMP-2的变化。细胞划痕试验和Transwell实验检测雷帕霉素联合低氧对Eca109细胞迁移及侵袭能力的影响。结果 Eca109细胞在低氧状态下,HIF-1αmRNA无明显变化（P>0.05）,仅蛋白表达增多;E-钙粘蛋白的mRNA表达明显降低（P<0.05）,蛋白表达减少;MMP-2 mRNA表达明显升高（P<0.05）,蛋白表达增多。雷帕霉素在低氧状态下可显著抑制HIF-1α及MMP-2表达,促进E-钙粘蛋白高表达。经雷帕霉素处理后,Eca109细胞在低氧状态下,迁移速度减慢,侵袭穿膜细胞数减少（P<0.05）。结论 低氧使Eca109细胞中HIF-1α蛋白表达增多,后者可能通过下调E-钙粘蛋白、上调MMP-2表达促进食管癌在低氧状态下的迁移及侵袭。