用RT—PCR法分析合肥地区HCV基因型

应用逆转录－ＤＮＡ聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ），对合肥地区的１９５例病人的血清进行了ＨＣＶＲＮＡ检测及基因型分析。结果显示，８０例ＨＣＶＲＮＡ阳性标本中，７０例（８７．５％）为Ⅱ／１ｂ型ＨＣＶ感染，７例（８．８％）为Ⅲ／２ａ型，３例（３．７％）为Ⅱ和Ⅲ型混合感染，未发现Ⅰ／１ａ和Ⅳ／２ｂ型ＨＣＶ感染。     

应用聚合酶链反应（PCR）检测乙型肝炎患者的HBV一DNA

应用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）检测１０８例乙型肝炎患者血清中ＨＢＶ一ＤＮＡ，在不同类型的ＨＢＶ感染标志物（ＨＢＶＭ）的血清中结果有所不同：（１）在ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ和抗ＨＢｃ阳性血清中，ＰＣＲ阳性率８６．１１％（３１／３６）；（２）在ＨＢｓＡｇ、抗ＨＢｅ和抗ＨＢｃ阳性血清中，ＰＣＲ阳性率５５．８８％（１９／３４）；（３）在抗ＨＢｓ、抗ＨＢｅ和ＨＢｃ阳性血清中，ＰＣＲ阳性率为２０％（２／１０）；（４）在抗ＨＢｅ和抗ＨＢｃ阳性血清中，ＰＣＲ阳性率为２５％（２／８）；文中就ＰＣＲ检测的结果及临床意义作了扼要的讨论。     

图象分析法检测乳腺癌细胞DNA含量及其意义

目的：检测乳腺癌及其癌变过程中细胞DNA的含量，探讨DNA含量在这一过程中的变化规律和临床意义。方法：对1988年63例在我院手术治疗的浸润性乳腺癌，以及1984～1992年间手术治疗的13例导管内癌（ductal carcinoma in situ,DCIS)、6例导管内癌伴早期浸润(DCIS Ca)、6例导管上皮高度增生(proliferative breast disease,PBD)的原发灶进行DNA图象分析(image cytometry，ICM)．结合临床资料，分析63例浸澜性乳腺癌细胞DNA含量与预后关系的观察。结果：发现浸润性乳腺癌与：DCIS及PBD相比，有较高的DNA指数(DNA index，DI)、异倍体检出率、核面积(nuclear area，NA）和5C细胞阳性率（P<0.05）。在DCIS与PBD两组病人中，DI、NA无明显差别（P<0．05)，而异倍体肿瘤，5C细胞出现在DCIS中(P<0.05)，且PBD中无5C细胞，异倍体出现。在乳脉癌病人预后的单因素分析中，发现5C细胞阳性、异倍体肿瘤等的无病生存率低(P<0．01)。结论：异倍体细胞群的出现是细胞癌变的早期标志，DNA含量随着乳腺癌恶性程度增加而发生显著改变。     

应用地高辛标记探针检测以Vero传代细胞制备人用狂犬疫苗中残余细胞DNA含量

用地高辛标记正常Ｖｅｒｏ细胞ＤＮＡ，制成特异探针，通过与制备人用狂犬疫苗的基质Ｖｅｒｏ细胞同源ＤＮＡ杂交，检测人用狂犬疫苗中残余Ｖｅｒｏ细胞ＤＮＡ含量，达到ＷＨＯ规程中“以传代细胞制备生物制品中残余细胞ＤＮＡ含量，每剂量ＤＮＡ须低于１００ｐｇ”的检测要求。检测灵敏度可达１ｐｇ，杂交反应特异性高，重复性好。测得以Ｖｅｒｏ细胞制备人用狂犬疫苗粗制原液中残余细胞ＤＮＡ含量为１００～１０００ｐｇ／ｍｌ，超滤浓缩后为１０４～１０６ｐｇ／ｍｌ，纯化后低于１０～１００ｐｇ／ｍｌ。这对以传代细胞为基质的生物制品中残余细胞ＤＮＡ的检测提供了一种常规可行的方法，因而具有重要的应用价值     

建立只标记加成碱基的^32P后标记法以用于检测致癌物—DNA加成物

本文报道建立~(32)P后标记方法(~(32)P-Postlabeling Method)以用于检测致癌物-DNA加成物。其基本原理:用核酸酶P1(Nu.P1)完全消化DNA,释出5′单磷酸脱氧核苷(pN),而加成的碱基(Xi),则释出5′磷酸二脱氧核苷(pXipN);经前列腺酸性磷酸酶(PAP)作用后,分别生成N和XipN,然后经T_4多聚核苷酸激酶(PNK)作用,将[γ-~(32)P]ATP的~(32)P转移XipN的5′末端上,生成标记*pXipN而N不被标记。经聚乙烯亚胺(PEI)纤维素薄层纯化、分离和放射自显影,则可确定已加成的碱基,若DNA量已知,则可进行定量分析。在人羊膜上皮细胞FL中,适量苯并(a)芘[B(a)P]处理24b后,可分离到4个加成物斑块,其总相对标记量(Relative Adduct Labeling,RAL)有剂量依赖性关系。     

自人脑胶质瘤基因文库克隆到一种未知基因片段

利用神经瘤鞘蛋白ＰＭＰ－２２基因（一种细胞生长休止期特异表达的基因）的编码区５′及３′－序列为引物，藉ＰＣＲ方法自人脑胶质瘤ｃＤＮＡ文库中扩增出一个１８１ｂｐ的基因片段，并测定了其序列，在基因资料库中未查到任何同源基因存在，但该片段与蛋白激酶Ｃ基因有５３．８％的同源性，提示它是一种新的未知基因的片段。     

特异性DNA倍增技术检测t-PA cDNA基因在表达细胞中的稳定性

利用特异性DNA倍增技术(polymerase chain Reaction,PCR)检测t-PA cDNA基因在表达细胞基因组中的稳定性,并对所得的PCR反应产物进行了限制性内切酶片段、分子杂交和核苷酸顺序分析等方面的研究,证实了t-PA cDNA基因已插入到表达细胞染色体中。这种方法快速、简便、灵敏度和特异性高,是检测基因工程表达细胞中cDNA基因稳定整合状况的好方法。     

碳酸锂抗诱变作用的研究

锂具有广泛的生物学作用，毒性低，现有资料认为无致突变性，临床上有效地用于精神病及血液病的治疗．本研究首次用人胚纤维母细胞(HEF)和活体小鼠，选择4种不同性质的诱变剂：短波紫外线（UV)，盐酸氮芥(NH2HCI)、亚砷酸钠(NaAsO2)、环磷酰胺(CP)建立诱变模型，诱导3种不同效应水平：非程序DNA合成(UDS)、染色体畸变(CA)、微核(MN)．