基于转录组测序分析骨髓间充质干细胞对子宫内膜癌细胞的影响

目的 探索骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）对子宫内膜癌Ishikawa细胞转录水平的影响。方法 用Lenti-EGFP慢病毒感染Ishikawa细胞,分别将表达增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein,EGFP）的Ishikawa细胞单独培养、与BMSCs接触共培养;通过流式细胞术分离Ishikawa细胞,并进行转录组测序分析筛选差异表达的mRNA和miRNA,通过miRWalk预测差异miRNA靶基因,对两者的交集基因进行GO、KEGG、蛋白网络互作分析;采用qRT-PCR和Western blot验证测序结果的准确性。结果 标记EGFP的Ishikawa细胞与BMSCs共培养后,分离出的Ishikawa-EGFP阳性细胞占33.6%,阴性细胞占10.5%。测序后共筛选出5 928个差异表达mRNA和111个差异表达miRNA。蛋白网络互作分析显示交集基因表达的蛋白之间相互作用,核心节点包括CDKN1A、JAK1、COL1A1、VCAN等。miRNA-mRNA网络图显示CDKN1A与...     

Co-culture of mouse spermatogonial stem cells with sertoli cell as a feeder layer,stimulates the proliferation and spermatogonial stemness profile

Objectives

Sertoli cells effect the fate map of spermatogonial stem cells (SSCs) to self-renew via providing the special microenvironments. Maintenance of proliferation and self-renewal activity of SSCs may be usable as a therapeutic strategy, leads to increase the recovery of male fertility. This research was aimed to evaluate the effect of mouse sertoli cells on spermatogonia stem cells proliferation and the expression pattern of stemness markers.

In vitro evaluation of (S)-ibuprofen toxicity on joint cells and explants of cartilage and synovial membrane

Intra-articular drug delivery systems (DDSs) are envisaged as interesting alternative to locally release nonsteroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs), such as ibuprofen to reduce pain in patients with osteoarthritis. The present study examines the toxicity of (S)-ibuprofen on chondrocytes and synoviocytes isolated from sheep shoulder joint and cultured in monolayers during 72 h, and on joint explants (cartilage and capsule) cultured in mono- or in co-culture for 13 days. (S)-ibuprofen (5 μM up to 1 mM) did not reduce the cell viability and protein content when added on chondrocyte monolayers, while at 1 mM (S)-ibuprofen reduced (by 8%, p = 0.01) the synoviocytes viability compared to untreated cells. During co-culture of joint explants, (S)-ibuprofen at 50 μM significantly reduced by 35% the spontaneous release of glycosaminoglycans (GAGs) from cartilage (p = 0.0065) whereas in monoculture, (S)-ibuprofen was inactive on GAG metabolism. (S)-ibuprofen at 1 mM significantly reduced cell lysis (lactate dehydrogenase leakage) by 74% during monoculture of capsule explants (p = 0.0136) and by 35% during co-culture of explants (p = 0.0013). Our findings demonstrate that the active isomer of ibuprofen at micro- and millimolar levels was not toxic for chondrocytes and synoviocytes and may reduce at 1 mM the cell lysis during culture of joint explants. The limited toxicity of (S)-ibuprofen at low and high concentration in sheep joint shoulder makes this enantiomer a promising drug candidate for the loading of intra-articular DDS.     

骨髓间充质干细胞对INS-1细胞凋亡的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)对过氧化氢(H2O2)诱导胰岛β细胞凋亡的影响。方法以H2O2作用于大鼠胰岛瘤细胞INS-1细胞构建凋亡模型,通过Transwell装置实现INS-1细胞与BMSCs共培养。实验分为4组:单独INS-1细胞培养组(A组);INS-1+H2O2处理组(B组);BMSC+INS-1Transwell共培养组(C组);BMSC+INS-1+H2O2Transwell共培养组(D组)。MTT法检测细胞存活率,Annexin-V/PI染色流式细胞技术检测细胞凋亡水平。结果 H2O2显著降低INS-1细胞存活率,引起INS-1细胞凋亡,且呈剂量依赖性,通过Tran-swell与BMSCs共培养后,由H2O2诱导的INS-1凋亡细胞比例下降,与单独H2O2刺激组相比,细胞凋亡率下降了约26.3%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BMSCs通过Transwell共培养显著抑制H2O2诱导的INS-1细胞凋亡,其作用机制可能与BMSCs旁分泌作用有关,为进一步利用BMSCs防治糖尿病提供了理论依据。     

共培养大鼠内皮祖细胞对白体骨髓基质干细胞成骨作用的影响

目的探讨体外培养大鼠外周血内皮前体细胞（EPCs）与自体骨髓基质细胞（BMSCs）共培养时对BMSCs成骨作用的影响。方法采用密度梯度离心法分离、培养大鼠BMSCs和EPCs,培养细胞分为四组：A组（BMSCs组）、B组（EPCs组）、C组（BMSCs成骨诱导组）及D组（BMSCs和EPCs联合培养组）。通过观察细胞克隆形态、免疫细胞化学、细胞增殖、碱性磷酸酶活性,从酶学、组织学及生化等不同方面观察EPCs对BMSCs成骨活性及生长情况的影响。结果免疫细胞化学染色证实C组培养的细胞具有晚期EPCs的特性。倒置相差显微镜、HE染色均证实共培养的BMSCs和EPCs生长良好,并能够形成与单纯成骨诱导培养的BMSCs相似的钙结节。MTr检测结果：各组细胞增殖差异无统计学意义（P〉0．05）。碱性磷酸酶活性检测结果：C、D组显著高于A、B组（P〈0．05）。结论EPCs和BMSCs联合培养具有良好的细胞相容性,EPCs能够增强成骨细胞的ALP活性,提高成骨细胞的增殖能力。     

医科与理工科联合培养研究生的实践研究

许多高校实施了跨学科联合培养复合型人才的培养模式,但是如何切实可行地提高研究生培养质量尚有待研究.本文总结了大连医科大学和大连理工大学联合培养研究生的实践经验,规范联合培养研究生的方法,期待能够推动高等教育的改革,从而培养出更多高层次复合型的适合多学科发展需要的复合型人才.     

C6胶质瘤细胞对体外共培养大鼠神经干细胞增殖影响的初步研究

目的探索与C6胶质瘤细胞体外共培养后大鼠神经干细胞（Neural Stem Cells NSCs）的增殖变化。方法分别培养神经干细胞、星形胶质细胞和C6胶质瘤细胞。利用共培养池（cell culturetranswell inserts）建立两种细胞的体外共培养模型。应用相差显微镜及电镜观察各组共培养后NSCs的形态变化;共培养后NSCs MTT法作生长曲线。结果原代培养后获得神经干细胞及星形胶质细胞;与C6胶质瘤细胞共培养7天后的NSCs增殖较对照组快,电镜观察可见核质比增高,细胞器较发达。结论 C6胶质瘤细胞对体外共培养的大鼠NSCs的增殖有一定促进作用。     

DFMG 调节 TLR-4抑制损伤内皮细胞对平滑肌细胞增殖和迁移促进作用

目的：观察7-二氟亚甲基-5,4-二甲氧基异黄酮（DFMG）是否能干预损伤内皮细胞对平滑肌细胞增殖和迁移的促进作用,且其干预过程是否与 TLR4信号通路相关。方法：采用 CCK-8法和 Transwell 迁移法测定LPC 诱导的内皮细胞的损伤对平滑肌细胞的增殖和迁移的影响。采用 Western blot 和荧光定量 PCR 测定损伤共培养体系中的内皮细胞 TLR4在蛋白水平和基因水平的表达。运用 TLR4特异性激动剂（LPS）和特异性的抑制剂（CLI095）,采用 CCK8法和 Transwell 迁移法测定损伤共培养体系中平滑肌细胞的增殖能力和迁移能力。结果：①随着 LPC 浓度的增加,LPC 诱导的内皮细胞损伤引起平滑肌细胞的增殖和迁移的效应增强,并且选取30μM 的LPC 作用于内皮细胞并与平滑肌细胞共培养作为实验的损伤共培养模型。②经光密度值分析,LPC 组的内皮细胞TLR4的表达量是对照组的2倍;经荧光定量 PCR 分析,LPC 组的内皮细胞 TLR4的表达量是对照组的2.414倍。③相比,损伤组和 LPS 组的平滑肌细胞的增殖和迁移能力较对照组更强;相比,CLI095组和 DFMG 组的平滑肌细胞的增殖和迁移能力较损伤组更弱。结论：LPC 诱导的内皮细胞的损伤可以引起平滑肌细胞的增殖和迁移,而DFMG 可能是通过抑制 TLR4信号阻碍损伤的内皮细胞对平滑肌细胞增殖和迁移的促进作用。     

共培养体系中重组结核杆菌热休克蛋白10对破骨细胞相关基因表达的影响

目的观察重组结核杆菌热休克蛋白10（CPN10）对成骨细胞（OB）-外周血单个核细胞（PBMs）共培养体系中破骨细胞生成及相关基因表达的影响。方法建立培养上清相通但二者互相不接触的成骨细胞一单个核细胞共育模型。实验分对照组和CPN10（10μg/ml）处理组。主要观察指标：①采用TRAP染色及扫描电镜检测破骨细胞生成及小牛骨磨片吸收陷窝,②应用Realtime PCR检测与破骨细胞生成相关基因NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG的基因表达。结果两组细胞均有TRAP阳性多核破骨细胞生成,并在小牛骨磨片上形成吸收陷窝;但对照组所获TRAP阳性多核细胞数目、吸收陷窝数目及面积均显著小于CPN10组。Realtime PCR检测结果显示CPN10组与对照组相比NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG 相对浓度分别为33.4798±177;2.0929、47.974±177;5.1628、47.0861±177;2.2033、7.4642±177;0.6791（P〈0.05）,对照组各基因表达均显著低于CPN10组。结论 CPN10在成骨细胞-单个核细胞（OB-PBMs）共培养体系中可促进OC的生成及骨吸收,CPN10通过对成骨细胞的作用,致其分泌的OPG/RANKL比例失调,并上调破骨细胞相关基因NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG的基因表达。