非融合重组人碱性成纤维细胞生长因子在大肠杆菌中的克隆及高效表达

目的:获得大肠杆菌中高效表达的非融合重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF).方法:采用RT-PCR技术,以人胎儿脑组织的总RNA克隆出hbFGF基因,再以此为模板,设计引物,对hbFGF的TIR(翻译起始区)部分碱基进行改造和降低G C含量,最后将该新基因克隆于质粒载体pET-3C,转化于大肠杆菌中表达.结果:非融合rhbFGF在大肠杆菌中高效表达,占总蛋白量的30％以上.采用离子交换和亲和层析方法纯化后,生物活性与标准蛋白一致.结论:非融合rhbFGF及调整TIR区域的碱基序列能有效提高重组蛋白的表达效率.     

钙调神经磷酸酶调控血管升压素诱导大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的作用

目的：探讨钙调神经磷酸酶（CaN）信号通路对血管升压素（AVP）诱导新生大鼠心脏成纤维细胞（CF）胶原合成的调控作用。方法：采用胰酶消化法培养新生SD大鼠CF，应用羟基脯氨酸比色法测定细胞培养上清中羟基脯氨酸含量，CaN活性通过分光光度计测定。结果：①CF培养上清中羟基脯氨酸含量随着AVP浓度的升高而增加，其中10^-7mol／LAVP和10^-6mol／LAVP组羟基脯氨酸含量与空白对照组比较有显著性差异（均P〈0．01）；在0．5μg／mlCaN的特异性抑制剂环孢素共同干预下，羟基脯氨酸含量明显减少，并有统计学意义（P〈0．01）。②随着AVP浓度的升高，CF内CaN活性亦随之增高，与空白对照组比较，10^-7和10^-6mol／LAVP组细胞内CaN活性显著增高（P〈0．01）。③在10^-7mol／LAVP作用下，随着细胞内CaN活性的升高，CF培养上清中羟基脯氨酸含量随之增加，两者之间呈显著正相关（r=0．91，P〈0．05）：④在10^-7mol／LVI受体拮抗剂[d（CH2）5-Tyr2（Me）]AVP和10^-7mol／LAVP共同作用下，CF中CaN活性和培养上清中羟基脯氨酸含量与单独10^-7mol／LAVP作用组比较均显著降低，并有统计学意义（均P〈0．01）：结论：CaN信号通路在AVP诱导CF胶原合成过程中起到了重要的调控作用，该通路的激活可能是通过V1受体介导的.     

不同月龄雌性SD大鼠成骨细胞内雌激素受体表达规律分析

目的探讨不同月龄雌性SD大鼠成骨细胞内雌激素受体表达规律,以此拟描述不同年龄人类女性个体成骨细胞内雌激素受体表达的生理曲线。方法以不同月龄雌性SD大鼠为标本,二次酶消化法收集成骨细胞并培养,倒置相差显微镜观察成骨细胞形态,钙钴法碱性磷酸酶染色、上清液碱性磷酸酶(ALP)及骨钙素(OCN)检测对成骨细胞进行鉴定。结果二次酶消化法获得的成骨细胞,形态呈多边形,碱性磷酸酶染色阳性细胞染色率80%,不同培养时间的成骨细胞和成纤维细胞上清液碱性磷酸酶和骨钙素含量相比较成骨组明显高于成纤维组。结论二次酶消化法可获得较多的成骨细胞,符合成骨细胞的生物学特性,可作为成骨细胞相关研究的细胞来源。     

bFGF和IGF-Ⅰ对人PDL细胞在牙面生长的影响

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)对人牙周膜(PDL)细胞在离体牙根面上附着、增殖的影响。方法应用细胞计数法和扫描电镜观察法,观察细胞因子作用离体正常和牙周病患牙根面上PDL细胞附着和增殖的情况。结果正常对照组人牙周膜细胞增殖率为80·0%,而病变对照组为50%。加入bFGF和IGF-Ⅰ后,正常牙根面细胞附着数量比正常对照增加22·2%和37·26%,比病变根面多36·4%和37·6%,病变根面组比病变对照组增加12·34%和25·03%;正常牙根面组增殖率为212·8%和205·5%,牙周病牙根面增殖率为185·7%和177·0%。扫描电镜下病变牙根面上PDL细胞数量少,形态细长,突起伸展不够充分,边缘皱缩,附着较松散;经生长因子作用后,细胞附着较为紧密,数量有所增加,状态明显改善。结论无论是否加入生长因子,PDL细胞在正常牙根面上的附着数量均明显多于病变根面;生长的因子能有效促进PDL细胞在牙根面的附着和增殖。     

他莫昔芬治疗绝经后骨质疏松症的临床研究

目的观察选择性雌激素受体拮抗剂他莫昔芬治疗绝经后骨质疏松症的疗效.方法将52例绝经后骨质疏松症患者随机分为观察组和对照组(各26例),观察组服他莫昔芬20mg/d,对照组服倍美力0.625mg/d+安宫黄体酮2.5mg/d,治疗并观察半年(本课题总疗程为1年).治疗前、治疗后6个月行骨密度、骨钙素、碱性磷酸酶测定,并行阴道超声测量子宫内膜厚度.结果两组腰椎(L2～4)、股骨颈(FN)及大转子(GT)、Ward's的骨密度均升高,两组疗效相近(P＞0.05),BGP及ALP有不同程度下降,两组间比较无显著性差异,但子宫内膜增厚、乳房胀痛及阴道点状出血对照组明显高于观察组(P＜0.05).结论他莫昔芬能明显提高绝经后骨质疏松症患者的骨密度,对子宫内膜刺激轻,对乳腺组织无不良刺激.     

贝复济促进慢性创面愈合的临床观察

目的观察碱性成纤维细胞生长因子(贝复济bFGF)对创面的促修复作用并探计其促修复作用机制。方法38例共45个慢性难愈合创面,其中,创伤性溃疡18例(22个创面),压迫性溃疡10例(13个创面),糖尿病溃疡8例,不明原因者2例。所有创面经清创后用bFGF治疗(150U/cm2创面,1次/d)。结果所有经bFGF治疗的创面都产生了明显愈合,其中2周内愈合者27个创面,3周内愈合者7个创面,4周内愈合者8个创面,超过4周愈合者3个创面。4周内总愈合率为93.3%。结论bFGF可以显著地加速慢性难愈合创面愈合。     

HGF、bFGF、ColⅣ、LN在保存羊膜中的表达

目的 研究肝细胞生长因子（HGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）、层粘连蛋白（LN）在不同保存方法和保存时间的羊膜中的表达，探讨保存羊膜的生物学活性。方法 取健康剖宫产产妇胎盘羊膜，随机分成两组保存：DMEMi甘油-800℃组、纯甘油4℃组。保存后1个月、3个月应用免疫组织化学方法，检测HGF、bFGF、colⅣ和LN在羊膜中的表达，并以新鲜羊膜作对照。结果（1）HGF、bFGF主要分布于羊膜上皮层。HGF在DMEMi甘油组和纯甘油组保存1个月、3个月和bFGF在两组保存3个月时的表达明显低于新鲜羊膜组，有显著统计学意义（P〈0．01）。（2）colⅣ和LN主要分布于羊膜基底膜。ColⅣ、LN在DMEMi甘油组和纯甘油组保存1个月、3个月时的表达与新鲜羊膜组相比无统计学意义（P〉0．05）。结论 羊膜经DMEM／甘油-80℃、纯甘油4℃保存后，其上皮生长因子减少．并随保存时间的延长活性逐渐下降，但羊膜基底膜成分并无明显变化。     

2型糖尿病患者血清骨钙素测定80例

选择2001—2005年在我院内分泌科及烧伤科住院的2型糖尿病患者80例。男38例，女42例。年龄26—76岁。病程5月至20年。对照组为我院体检健康成人60人，男女各30人，年龄与糖尿病患者相匹配。对所有受试者均采空腹静脉血，离心，分离血清，置-20℃保存，同批待测。骨钙素（BGP）用免疫放射法测定。药盒购自北免东雅生物技术研究所。胰岛素（Ins）、雌二醇（E2）均用放射免疫法测定。药盒购自天津德普公司。血钙（Ca）、磷（P）及碱性磷酸酶（ALP）用生化法测定。组间比较用t检验，相关分析采用直线分析。     

蛋白酪氨酸磷酸酶1B小分子抑制剂的研究进展

蛋白酪氨酸磷酸酶IB（PTP-1B）是胰岛素和瘦索信号转导通路的负调节因子。小鼠PTP-1B基因敲除及反义核苷酸治疗实验表明PTP-1B是治疗糖尿病和肥胖症的潜在靶标。按PTP-1B小分子抑制剂的结构类别对近年来文献报道的代表性小分子PTP-1B抑制剂进行综述。指出采用小分子抑制PTP-1B酶可能成为治疗胰岛素抵抗、2型糖尿病以及肥胖症的新途径。     

基于报告基因的雌激素受体β亚型激动剂细胞筛选模型的建立

目的建立基于报告基因和雌激素受体β(estrogen receptor β，ERβ)亚型信号通路的药物筛选模型，以期发现ERβ亚型激动剂。方法构建带有雌激素应答序列(estrogen responsive element，ERE)靶序列和报告基因的诱导性表达载体pTAL-ERE-SEAP，并将其转入人胚肾(HEK293)细胞中，筛选报告基因分泌型碱性磷酸酶(secreted alkaline phosphatase，SEAP)表达受雌二醇(17β-estradiol，E₂)诱导的阳性克隆。选取相关核受体配体进行模型的特异性考察，同时考察模型的稳定性及时效量效关系，以及免疫细胞化学染色鉴定转染后ERβ的表达情况。利用此模型对本实验室样品库中的2 622个化合物进行筛选。结果转染pTAL-ERE-SEAP的HEK293细胞中，SEAP报告基因的表达受E₂的诱导并呈剂量与时间依赖关系，E₂对阳性克隆细胞无增殖作用，本模型的Z′因子值为0.7，免疫细胞化学染色结果表明，转染后ERβ表达、地塞米松以及其他配体的诱导表达率低。结论利用此模型通过测定SEAP报告基因的诱导表达水平可筛选ERβ亚型激动剂。