人骨髓间充质干细胞体外分离培养及向血管内皮样细胞分化的研究

目的:研究人骨髓间充质干细胞(hMSCs)的体外分离培养方法及在特定微环境下分化为血管内皮样细胞的潜能,可能为银屑病研究提供实验基础.方法:密度梯度离心法结合贴壁法分离人骨髓间充质干细胞(hMSCs),体外扩增培养并进行鉴定.加入血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)定向诱导hMSCs向血管内皮细胞分化,流式细胞仪进行细胞表型鉴定,Dil-ac-LDL摄取实验鉴定血管内皮细胞功能.结果:经流式细胞仪测定分离培养的hMSCs CD71、CD44阳性表达,CD54、CDl06、CD45弱阳性表达,CD34、CD31、VWF、KDR、HLA-DR阴性表达;经bFGF、VEGF诱导后的hMSCs可见类似内皮细胞样改变,经流式细胞术检测,与对照组相比内皮细胞特异表面标志CD34、CD31、VWF、KDR表达转为阳性(P＜0.01),而HLA-DR、CD54、CDl06、CD45表达明显上调(P＜0.01);诱导分化后的内皮样细胞具有摄取Dil-ac-LDL的能力.结论:密度梯度离心法结合贴壁法可获得较纯的MSCs;在bFGF、VEGF诱导作用下,hMSCs具有向内皮细胞分化潜能,产生功能性内皮细胞.     

细菌脂多糖联合高体积分数氧对未成熟大鼠脑发育的影响

目的 探讨细菌脂多糖(LPS)、高体积分数氧(高氧)单独或联合应用对新生大鼠脑发育的影响及其相关机制.方法 2日龄(P2)新生SD大鼠120只随机分为4组:空气组、LPS组、高氧组、LPS+高氧组,分别观察各组大鼠的一般情况,记录其每日体质量.7日龄(P7)时,免疫组织化学法检测各组大鼠脑组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、核转录因子P65(NF-κB P65)的表达情况,ELISA法检测各组大鼠脑组织中IL-6、8-异-前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)水平;12日龄(P12)时,免疫组织化学法检测各组大鼠脑组织碱性髓鞘蛋白(MBP)的表达.结果不同处理组中Caspase-3及NF-κB P65表达水平高低依次为LPS+高氧组、LPS组/高氧组、空气组,前3组与空气组相比差异均有统计学意义(P均＜0.05),且LPS+高氧组与高氧组、LPS组相比差异亦均有统计学意义(P均＜0.01);MBP的表达水平高低依次为空气组、高氧组、LPS组、LPS+高氧组,后3组与空气组相比差异均有统计学意义(P均＜0.05),且LPS+高氧组与高氧组、LPS组相比差异亦均有统计学意义(P均＜0.01).各组新生大鼠IL-6表达水平高低依次为LPS+高氧组、LPS组、高氧组、空气组;8-iso-PGF2α表达水平高低依次为LPS+高氧组、高氧组、LPS组、空气组,而且各组之间比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 感染及高氧均可致新生大鼠脑损伤,导致神经细胞凋亡和MBP表达减少,且感染与高氧同时存在时能加重二者单独作用时脑损伤的程度.其机制可能为炎性反应及氧化应激通过Toll样受体后发生协同作用,激活核转录因子NF-κB P65,并通过Caspase-3介导神经细胞凋亡及脑白质损伤.     

碱性成纤维细胞生长因子在肺炎链球菌脑膜炎大鼠室管膜下区表达的动态变化

目的探讨肺炎链球菌脑膜炎大鼠碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在脑组织神经发生区域室管膜下区(SVZ)表达的特点。方法取3周龄SD大鼠36只,随机分为感染组和对照组,感染组用肺炎链球菌Ⅲ型菌悬液脑池内注射,对照组用等量9g/L盐水脑池内注射,建立肺炎链球菌脑膜炎模型和正常对照模型,分别于接种肺炎链球菌Ⅲ型菌悬液或注射9g/L盐水24、72h和第6天经多聚甲醛灌流内固定后取脑,采用免疫组织化学染色技术和图像分析,观察不同时间点bFGF在SVZ表达的变化。结果肺炎链球菌感染后24h,SVZ区bFGF表达明显增加,表现为bFGF阳性细胞着色较深,数量明显增加,与对照组比较有显著性差异(P<0.01);感染后72h表达逐渐下降,与24h比较差异有显著性(P<0.01),但仍高于对照组。感染第6天bFGF降至正常水平,与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。感染组大鼠侧脑室脉络丛、蛛网膜下腔渗出的中性粒细胞和巨噬细胞也有bFGF表达,对照组未见炎性渗出。结论肺炎链球菌脑膜炎病程中,SVZ区bFGF表达升高可能对促进神经前体细胞增殖、SVZ区神经发生发挥重要作用,有利于脑神经元的再生和修复,可能是脑膜炎脑损伤后机体的自我保护机制之一。     

新生儿佝偻病骨代谢转换生化标志物检测的意义

目的探讨骨代谢转换生化标志物血清β胶原分解片断（β-CTx）、骨碱性磷酸酶（BALP）和骨钙素（BGP）测定在新生儿佝偻病诊断中的意义。方法选取30例佝偻病新生儿（病例组）和30例健康新生儿（健康对照组）,每例儿童均采集空腹静脉血2mL,电化学发光免疫分析法检测血清β-CTx,ELISA法测定BALP和BGP水平,并对这三项测定指标的灵敏度、特异度、漏诊率、误诊率、诊断符合率、Youden指数、阳性预测值和阴性预测值进行计算和分析,同时测定其血清钙、磷和AKP水平,并进行左手腕关节X线摄片。结果病例组血清β-CTx、BALP和BGP水平分别为（1.58&#177;0.49）μg/L、（291.5&#177;78.4）U/L和（15.2&#177;5.9）μg/L,健康对照组分别为（1.16&#177;0.38）μg/L、（137.1&#177;64.7）U/L和（10.1&#177;4.3）μg/L,病例组明显高于对照组,二组比较均有极显著性差异（Pa〈0.001）。病例组血清β-CTx、BALP和BGP水平异常者分别为28例（93.3%）、26例（86.7%）和24例（80.0%）,明显高于对照组[2例（6.7%）、2例（6.7%）和3例（10.0%）]（Pa〈0.001）。血清β-CTx的灵敏度、特异度、诊断符合率、Youden指数、阳性预测值和阴性预测值均高于血清BALP和BGP,但无统计学意义,其漏诊率和误诊率显著低于血清BALP和BGP（χ^2=9.7124,11.2913,16.9212,18.3671Pa〈0.01）。结论血清BALP和BGP水平测定是准确反映骨代谢转换的生化标志物,也是诊断新生儿佝偻病特异而敏感的指标;血清β-CTx水平测定是诊断新生儿佝偻病、反映骨吸收活动特异性很高的敏感指标。     

新生儿磷酸酶过少症

低磷酸酯酶症是一种少见的先天性代谢疾病。该文对其发病机制、分型及临床表现、鉴别诊断、治疗和预后进行了综述,并介绍了在该院诊断明确的1例新生儿型的罕见病例,患儿为出生30 min女婴,产前B超提示胎儿双顶径与四肢长骨不成比例,生后即有明显的颅骨软化、呼吸困难和紫绀等表现,血碱性磷酸酶（ALP）显著低下,X线表现及尸检结果均提示骨骼矿化极度低下,4 d后因呼吸衰竭死亡。     

一种以虾原肌球蛋白为致敏原的Th2 反应小鼠模型的建立

目的:采用虾原肌球蛋白为致敏原建立Th2 反应小鼠模型。方法:虾原肌球蛋白腹腔注射小鼠6 周诱导Th2反应,ELISA 测定小鼠血清总IgE、sIgE 和sIgG 水平、脾淋巴细胞分泌Th1 和Th2 细胞因子的含量,采用流式细胞术检测血液中嗜碱性粒细胞的活化。结果:与对照组比较,致敏6 周的小鼠血清总IgE、sIgE 和sIgG(sIgG1、sIgG2a 和sIgG2b)均显著升高;脾淋巴细胞在抗原刺激后分泌Th2 细胞因子(IL-4、IL-5、IL-10 和IL-13)增加,而Th1 细胞因子INF-α则出现明显降低;血液中嗜碱性粒细胞表面标志物CD200R 和CD41 表达增强。结论:成功建立一种以虾原肌球蛋白为致敏原的Th2 反应小鼠模型。     

晚发型胎儿生长受限胎盘组织碱性成纤维细胞生长因子表达及超微结构的观察

目的:观察晚发型胎儿生长受限(fetal growth restriction,FGR)患者胎盘组织中碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growthfactor,bFGF)的表达及其超微结构的变化。方法:FGR组和足月正常妊娠组的胎盘组织标本各15例,应用免疫组织化学法检测bFGF的表达,2组标本各选取3例应用透射电镜观察其超微结构的变化。结果:2组均见bFGF表达于绒毛合体滋养层细胞、绒毛微血管内皮细胞和绒毛间质细胞的胞浆。FGR组胎盘滋养层bFGF的表达显著高于正常妊娠组(P<0.01)。FGR组胎盘合体结节增多,胎盘绒毛变性,基底膜增厚,微血管内皮可见突起及钙化砂粒体,自体胞质脱落。结论:FGR胎盘组织有超微结构病理改变,bFGF的表达可能是继发性增高。     

隔膜条件下骨再生成骨细胞来源的实验观察

目的:研究在隔膜条件下引导性骨再生过程中成骨细胞的来源,进一步认识引导性骨再生的机制.方法:以成年新西兰兔为研究对象,在双侧挠骨中段制作标准骨缺损不愈合模型,用硅胶膜成管状包裹一侧骨缺损,另一侧无特殊处理为对照.术后分别进行X线检查、常规HE染色以及SP方法BMP、BGP抗体的免疫组化染色.结果:硅胶膜在骨缺损处形成隔离密闭的腔室,将周围组织阻挡于骨缺损之外.早期骨端骨内膜、骨髓基质细胞大量增殖,形成肉芽组织占据骨缺损.骨再生过程中表现出明显的组织学特征:骨痂表面为2～3层成骨细胞,骨缺损中央为肉芽组织,两者之间为数层细胞形成的移行区,细胞排列疏松.早期骨端骨内膜、骨髓基质细胞BMP、BGP呈强阳性染色,骨痂生长过程中,移行区部分细胞呈阳性染色.结论:结果表明在隔膜条件下骨再生的成骨细胞在早期来源于髓内的骨内膜和骨髓基质细胞,骨痂形成后,成骨细胞则来源于骨内膜、骨髓、骨膜增殖细胞共同形成的肉芽组织中的间质细胞或成纤维细胞.     

极低出生体重儿肠道外营养相关性胆汁淤积的临床研究

目的 研究极低出生体重儿(VLBWI)肠道外营养相关性胆汁淤积(PNAC)的发生率、危险因素及预后。方法 回顾分析43名接受肠道外营养(PN)超过14d的VLBWI PN相关的临床及实验室指标，并行多因素Logistic回归分析及单因素分析。结果 PNAC发生率20.9％。PNAC组和无PNAC组相比，PN持续时间及全肠道外营养时间久、氨基酸及脂肪乳累计用量大、生后14d时静脉非蛋白热卡所占比例高。多因素分析显示，氨基酸累计用量及感染为PNAC发生的危险因素。随PN持续时间的延长，所有患儿结合胆红素(DBIL)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆汁酸(TBA)均有明显的升高，出生2周以后的血清DBIL、DBIL／TBIL、ALP及TBA水平在PNAC组与无PNAC组间差异有显著性。9例PNAC患儿中2例死亡，7例好转出院。结论 感染及氨基酸累计用量为PNAC发生的危险因素。PN持续时间越久，肠道外营养成分用量越大，PNAC发生的危险性越高。动态监测DBIL、ALP、TBA对早期发现PNAC有帮助。     

两种方案治疗眼表面创伤性疾病的成本-效果分析

目的探讨两种方案治疗眼表面创伤性疾病的成本-效果。方法将108例（108眼）眼表面创伤性疾病患者随机分为两组，甲组予贝复舒（碱性成纤维细胞生长因子）滴眼液，乙组予硫酸软骨素滴眼液，均同时配伍盐酸左氧氟沙星滴眼液4～6次／d滴眼，疗程均为14d，采用成本-效果分析方法进行评价。结果甲组和乙组总成本分别为81．67元和30．59元，总有效率分别为92．59％和77．78％。结论甲组治疗方案优于乙组。