骨桥蛋白与自身免疫性疾病的研究进展

骨桥蛋白(osteopontin, OPN)是一种由多种免疫细胞产生,作用于不同细胞靶点的先天性和适应性免疫反应调节剂。OPN在多种自身免疫性疾病中过度表达,且已被证明与疾病严重程度相关,它通过多种受体发挥其生物学功能,正在成为正常和病理条件下的重要调节机制,并开始被用作治疗靶点。本文将集中阐述OPN在自身免疫性疾病中的表达与作用及其作为自身免疫性疾病的生物学标志物的相关信息,总结OPN相关的靶向性治疗,以期为自身免疫性疾病提供新的诊疗思路及方向。     

甲氨喋呤对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜骨桥蛋白和整合素αVβ3表达的影响

目的 探讨甲氨喋呤对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜骨桥蛋白(osteopontin,OPN)及其受体整合素αvβ3表达的影响及其作用机制.方法 建立CIA大鼠模型,分为模型组和甲氨喋呤(MTX)组,后者用MTX进行干预治疗;采用免疫组织化学染色技术检测滑膜组织OPN和整合素αvβ3的表达,ELISA方法检测血清TNF-α水平.结果 ① CIA模型组和MTX组大鼠的滑膜OPN、整合素αvβ3表达均明显高于正常大鼠对照组(均为P<0.01);与模型组比较,MTX组OPN和整合素αVβ3的表达减少(均为P<0.01). ②正常对照组和MTX组大鼠血清TNF-α水平显著性低于模型组大鼠(均为P<0.01).结论 滑膜OPN和整合素αvβ3异常表达在CIA发病中具有重要意义.MTX通过下调滑膜OPN和整合素αvβ3的表达,降低血清TNF-α水平从而达到治疗CIA的作用.     

胎牛血清外泌体对成骨细胞增殖的作用

背景:研究表明外泌体具有促进骨再生的能力,但从胎牛血清中提取的外泌体是否可以促进骨形成仍存在争议。目的:观察胎牛血清外泌体对成骨细胞增殖能力的影响,从而为临床治疗骨破坏提供新思路。方法:通过超速离心法从胎牛血清中提取外泌体,采用透射电子显微镜和Western blot法验证外泌体是否提取成功;然后用10 mg/L胎牛血清外泌体干预成骨前体细胞MC3T3-E1,通过CCK-8实验检测外泌体对成骨细胞增殖能力的影响,Western blot检测外泌体对成骨细胞骨形态发生蛋白2和骨桥蛋白表达的影响。以不含外泌体的胎牛血清培养的MC3T3-E1细胞为对照组。结果与结论:①胎牛血清外泌体具有典型的脂质双层膜结构,大小在30-150 nm之间,外泌体表面标记因子CD81表达呈阳性,而微囊表面标记物CD40表达呈阴性;②外泌体组的增殖能力明显高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);外泌体组成骨标志性因子骨形态发生蛋白2和骨桥蛋白的表达水平明显高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);③结果表明,胎牛血清外泌体对成骨细胞的增殖起促进作用,可为临床治疗骨破坏提供新思路。     

低氧和高二氧化碳作用下肺动脉高压形成过程中骨桥蛋白表达与分布的实验研究

目的： 观察慢性低O2高CO2大鼠肺动脉骨桥蛋白（OPN）及其基因的表达与分布情况，探讨OPN在肺动脉高压发病机制中的作用。方法： 48只雄性SD大鼠随机分为4组：即正常对照组（NC组），低O2高CO2 1周、2周和4周组（1HH、2HH和4HH）。采用RT-PCR法测定不同低O2高CO2 组大鼠离体肺动脉和肺组织骨桥蛋白（OPN）mRNA，免疫组织化学染色法测定肺细小动脉骨桥蛋白分布表达情况，ELISA 法定量测定肺组织匀浆OPN水平，Western blotting 法测定离体肺动脉OPN表达水平。结果： ①低O2高CO2各组大鼠mPAP和RV/LV+S均明显高于NC组（P<0.01），4组大鼠间mCAP比较无显著差异（P>0.05）；②低O2高CO2 各组大鼠肺组织和离体肺主动脉OPN mRNA表达水平显著高于对照组（均P<0.01）；③免疫组化法显示NC组大鼠肺组织OPN表达主要见于支气管、肺泡上皮细胞内，1HH组大鼠肺细小动脉内皮细胞、平滑肌细胞以及周围巨噬细胞均见有OPN的表达，其中以中膜平滑肌细胞最为明显，而2HH和4HH组大鼠OPN表达更加明显, 低O2高CO2 各组肺细小动脉OPN相对含量与对照组比较有显著差异（均P<0.01），且随缺氧时间的延长，骨桥蛋白表达也呈增高趋势；④ 低O2高CO2 各组大鼠肺组织匀浆OPN含量分别为正常对照组的1.69倍、2.28倍和2.87倍（均P<0.01）；⑤ Western blotting 分析1HH、2HH和4HH各组大鼠离体肺动脉OPN表达明显增强，与NC组比较有显著差异（均P<0.01）。结论： 慢性低O2高CO2能够刺激大鼠肺组织和肺动脉OPN及其基因表达增强，OPN可能在慢性低O2高CO2性肺动脉高压发病的病理和病理生理过程中起着重要的作用。     

血清脂联素、骨桥蛋白和HE4在子宫内膜癌患者中的表达及意义

目的：探讨血清脂联素（APN）、骨桥蛋白（OPN）和人附睾分泌蛋白4(HE4)在子宫内膜癌患者中的表达及意义。方法：选取2019年11月至2022年9月郴州市第一人民医院收治的子宫内膜癌患者62例（子宫内膜癌组）,另选取同期50例子宫内膜不典型增生患者（内膜增生组）和50例健康志愿者（正常内膜组）。检测并比较三组血清APN、OPN、HE4水平,采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清APN、OPN、HE4对子宫内膜癌的诊断效能,并采用Spearman相关性分析探讨血清APN、OPN、HE4与临床病理特征的相关性。结果：子宫内膜癌组患者血清APN水平低于内膜增生组和正常内膜组,OPN、HE4水平高于内膜增生组和正常内膜组。国际妇产科联盟（FIGO）分期为Ⅲ期患者血清APN水平低于Ⅱ期和Ⅰ期患者,OPN、HE4水平高于Ⅱ期和Ⅰ期患者;肌层浸润深度≥1/2肌层患者血清APN水平低于<1/2肌层患者,OPN、HE4水平高于<1/2肌层患者;淋巴结转移患者血清APN水平低于无淋巴结转移患者,OPN、HE4水平高于无淋巴结转移患者,差异均具有统计学意义（P <0.05）。ROC曲...     

大鼠皮肤及毛囊骨桥蛋白研究

目的 对出生和出生后大鼠皮肤及毛囊的骨桥蛋白（ｏｓｔｅｏｐｏｎｔｉｎ）的ｍＲＮＡ进行研究。方法 确定妊齿１４～１８ｄ和出生后１～６１ｄ Ｗｉｓｔａｒ大鼠毛周期,用放性同位素标记的原位杂交法牟大鼠皮肤和毛囊骨桥蛋白ｍＲＮＡ的分布和含量进行研究。结果 骨桥蛋白ｍＲＮＡ在大鼠出生后第１８天首次在真皮乳头（ｄｅｒｍａｌｐａｐｉｌｌａ,ＤＰ）细胞中出现,在各毛发周期中骨桥蛋白ｍＲＮＡ信号均出现一毛囊退化期Ｄ     

泽泻有效部位对肾草酸钙结石模型大鼠肾组织骨桥蛋白表达的影响

目的研究泽泻有效部位对大鼠肾草酸钙结石形成和肾组织骨桥蛋白(OPN)表达的影响,探讨泽泻抑制尿结石形成的机制。方法采用现代植化和生物活性导向分离的方法分离、提取泽泻的有效部位。将30只大鼠随机分成3组对照组、模型组、泽泻组。以乙二醇和1α-羟基维生素D3ig制备大鼠肾草酸钙结石模型。检测各组大鼠血及尿生化、肾Ca2 水平、24h尿草酸分泌量和肾组织病理学改变,并采用免疫印迹(Western blotting)和半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别观察各组大鼠肾组织OPN蛋白及其mRNA的表达水平。结果ig泽泻有效部位(主要以四环三萜类化合物为主)大鼠的血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、肾Ca2 水平、24h尿Ca2 分泌量、肾组织草酸钙晶体的分布、OPN蛋白及其mRNA的表达水平均显著低于模型组(P<0.01)。结论泽泻有效部位能抑制大鼠肾组织OPN的表达,减少肾组织草酸钙结晶的沉积,从而能有效抑制大鼠肾草酸钙结石的形成。     

骨桥蛋白反义基因重组质粒的构建

目的 构建反义骨桥蛋白(OPN)基因重组质粒，以用于肝癌基因治疗的研究。方法 通过设计含有特定酶切位点的引物，以含有全长骨桥蛋白基因的质粒(pBlueScript—OPN)为模板，将PCR产物反向克隆至pcDNA3．1( )真核表达载体上，并经酶切鉴定及测序分析。结果重组质粒经酶切后出现913bp长的片段。测序分析结果与献报道结果完全一致。结论 反义骨桥蛋白基因表达质粒克隆成功，为恶性肿瘤的基因治疗提供了一种有效手段。     

补肾中药骨灵丸对成骨细胞矿化功能及骨桥蛋白基因表达的影响

目的探讨含补肾中药-骨灵丸大鼠血清对体外培养成骨细胞(OB)矿化功能及骨桥蛋白基因表达的影响。方法取SD乳鼠颅骨,采用改良胰酶-胶原酶消化法分离培养;根据血清药理学的方法制备含不同剂量(高、中、低剂量)骨灵丸血清,并以空白组(灌喂生理盐水)为阴性对照、雌二醇(E2,10-8 mol／L)组为阳性对照;将制备好的各组血清分别加入第二代OB的培养液中进行培养,采用Westem-blot及RT-PCR的方法观察补肾中药血清对OB骨桥蛋白及基因表达的影响,利用茜素红染色方法测定矿化结节形成的数量。结果含骨灵丸(中、高剂量组)血清均能上调OB骨桥蛋白及基因的表达,使钙结节的数目增加,与空白对照组相比较具有统计学意义(P<0．05);空白对照组及补肾中药低剂量组对骨桥蛋白表达及矿化结节的形成无影响。结论骨灵丸可上调骨桥蛋白基因的表达,这可能是骨灵丸促进钙结节形成、影响骨代谢的机理之一。     

血清OPN检测对恶性肿瘤患者诊断治疗的临床意义探讨

目的探讨恶性肿瘤患者血清OPN检测的临床意义。方法用酶联免疫吸附试验恶性肿瘤患者血清OPN水平。结果恶性肿瘤患者血清OPN水平明显高于正常对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。恶性肿瘤患者手术前或放、化疗前的OPN水平显著高于手术后或放、化疗后患者和对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。恶性肿瘤患者血清OPN水平还与淋巴结转移及远处转移有关。结论血清OPN检测可以作为恶性肿瘤患者的诊断、预后以及疗效评判的检测指标。