抗人c-erbB2单克隆抗体的制备及其特异性鉴定

目的:制备小鼠抗人c-erbB2mAb,并进行特异性鉴定。方法:应用计算机软件分析人源c-erbB2抗原表位,人工合成羧基端含优势表位的13肽,与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)偶联后,免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞常规融合,依次经HAT选择培养、间接ELISA法、克隆化和免疫组化染色法筛选出稳定分泌抗天然人源c-erbB2mAb的杂交瘤细胞株。用交叉反应试验和阻断试验检测mAb的特异性。结果:获得1株可稳定分泌抗天然人源c-erbB2抗体的杂交瘤细胞株。该mAb与已知的c erbB2抗原阳性的乳腺癌标本起反应;与其他不表达c-erbB2分子的细胞不起反应。用合成的13肽阻断后,失去与c-erbB2抗原的反应性。结论:用合成的13肽作为免疫原成功地制备出1株抗c-erbB2的mAb。     

B族链球菌C5a肽酶蛋白表位的克隆、表达和免疫学分析

目的应用生物信息学方法预测B族链球菌C5a肽酶蛋白表位，结合基因工程手段进行表位重组、表达和免疫原性分析。方法用预测程序ProPred和ANTIGENIC预测B族链球菌C5a肽酶蛋白的表位，应用PCR技术扩增出编码该表位基因片段，克隆PCR产物构建重组质粒，测序验证。在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达融合蛋白。表达的蛋白经质谱分析和Western blot鉴定。纯化该融合蛋白并免疫C57／BL小鼠，萃取GBS表面蛋白，双向琼脂扩散试验检测抗体水平。结果在SCPB中预测到1个既具有MHC结合肽特性又具有B细胞表位特征的肽段。重组和表达了这一肽段，质谱得出与SCPB蛋白的相似性分数为79，Western-blot证实能与抗SCPB的抗体反应，纯化后融合蛋白纯度〉90％。动物实验证实融合蛋白能产生特异性的抗GBS抗体。结论重组表位具有一定免疫原性。为相关蛋白的毒力机制研究和亚单位疫苗等方面的研究打下了良好的基础。     

免疫学进展学术讨论——蛋白质抗原表位分析和基因免疫

1998年5月26日上海市免疫学会基础组召开了一次有关蛋白质抗原表位分析和基因免疫的学术讨论会,邀请复旦大学遗传学研究所副所长王洪海教授,上海医科大学免疫学教研室主任熊思东教授联系他们自己的工作,作了中心发言,参加会议人数众多,讨论十分热烈,颇有收获.现将主要讨论内容由主持人吴厚生教授整理如下.     

我国HIV-1 B''亚型毒株gag基因变异特征研究

目的研究我国人免疫缺陷病毒1型（HIV-1）B’亚型主要流行株在宿主免疫压力下的基因变异及抗原表位的变化特征，探讨选择压力、基因离散率和抗原表位变化之间的关系。方法从确诊的HIV-1感染者的全血样本中提取基因组DNA，经套式聚合酶链反应（PCR）扩增后，将扩增产物进行纯化和测序。然后将所得序列进行系统进化树和氨基酸变异分析，使用GCG软件包的Distance程序对P17和P24两个区段计算基因距离，用Diverge程序计算同义替换（1（s）和非同义替换（1（a）及二者之间的比值，并对我国人群中较常见的HLA型别限制的CTL表位的突变情况进行分析。结果HIV-1B’亚型毒株的P17区段的Ks／Ka值〈1，而P24区段的Ks／Ka值〉1；P24部分的基因离散率低于P17部分；P17区段抗原表位的保守率为34．94％，而P24区段抗原表位的保守率为67．38％；从基因离散率、所受的选择压力及抗原表位的突变率3个方面来看，HIV-1的P17区段均明显大于P24区段。结论HIV-1B’亚型毒株的P17区段的抗原表位变化较大，而P24区段的抗原表位相对较为保守。提示P24区段的CTL表位更适合于表位疫苗的研制。     

海口市"三级甲等医院"医务人员人格特质调查研究

目的研究试图通过对海口市三甲医院医务人员人格特质的测量与分析,在与全国常模进行对比的情况下,得出海口市三甲医院医务人员人格特质的基本描述,建立医务人员人格特质的常模,为最终科学地建立海南省医学人才人格特质考评体系奠定必要的工作基础,也为海南省医学人才的培养和利用提供一项可行性的管理模式.方法采取分层整群随机抽样方法对海口市五家三甲医院医务人员人格特质进行调查,使用国际著名的人格问卷-加利福尼亚心理调查表CPI作为工具,对海口市三甲医院医务人员人格特质进行调查.结果被调查的海口市三甲医院588名医务人员人格类型分布以Beta型为主,各型分布情况为：Alpha型171人,占29.1%,Beta型302人,占51.4%,Gamma型59人,占10.0%,Delta型56人,占9.5%;在V3自我实现水平上海口市三甲医院医务人员有较高得分,除1例处于第二水平和4例处于第三水平外,其余583例都分别处于第四至第七水平;海口市三甲医院医务人员在20个分量表的测试中,在CS、IN、EM、SC、GI、WB、CM、TO、AI、AC、IE、PY、FX等13个分量表的平均得分上明显高于全国常模组（P〈0.01）,而在DO、SY、SP、SA、SO 5个分量表平均得分上明显低于全国常模组（P〈0.01）.结论海口市三甲医院医务人员各分量表平均得分大部分高于全国常模水平,尤其是在测量成就潜能方面的3个分量表AC、AI、IE平均得分全部明显高于全国常模水平（P〈0.01）,表明海口市三甲医院医务人员较常模有更强烈的成就动机,对智力活动与知识成就有较强的追求,在工作中能更有效地发挥智能,注重办事效率,见识广博,比较适合在激励自由和个人首创精神的场所独立地开展工作,并且能够专心于别人看来较为枯燥的工作.在测量社会价值内化程度的7个分量表中有5个（SC、GI、CM、WB、TO）高于全国常模水平.     

中国92例HIV/AIDS患者HIV-1 gp41 2F5和4E10中和抗体表位变异研究

目的 探讨92例HIV/AIDS患者HIV-1病毒近膜端(membrane proximal external re-gion,MPER)中和抗体2F5和4E10保守表位ELDKWA、NWFDIT氨基酸变异特点,为中国HIV/AIDS患者免疫治疗以及疫苗设计提供数据.方法 Nest-PCR扩增HIV-1 env区gp41段基因,核酸序列测定,翻译为氨基酸与HIV-1 Sequence Database HXB Ⅱ参考株中和抗体表位数据比对,分析2F5、4E10中和表位氨基酸变异情况.结果 92例HIV/AIDS患者HIV-1外膜蛋白env gp41段中和抗体2F5、4E10保守表位氨基酸均存在突变;2F5中和抗体表位主要有E662A(14.1%)、K665S(17.4%)、A667K(16.3%)突变;4E10中和抗体表位主要有N671S(13.0%)、D674S(3.3%)、T676S(16.3%)突变;CRF_B'C亚型与B'亚型的2F5和4E10表位氨基酸突变差异具有统计学意义(P<0-05);CRF_B'C与CRF01_AE亚型2F5表位突变差异具有统计学意义(P<0.05);B'亚型缓慢进展者、HIV感染者和AIDS患者的4E10表位氨基酸突变差异具有统计学意义(P<0.05).结论 92例HIV/AIDS患者HIV.1包膜蛋白env gp41段中和抗体2F5、4E10中和表位氨基酸存在突变,且变异多样化;不同亚型中和抗体保守表位氨基酸位点变异有差异;B'亚型4E10中和抗体表位变异可能与疾病进展有一定联系.     

BPI N端优势抗原表位的模拟合成及其人源抗体的筛选

杀菌／渗透增强蛋白（bactericidal／permeability increasing protein，BPI）是存在于人及哺乳动物多形核白细胞中的一种阳离子抗菌蛋白。研究证实BPI功能性氨基端片段（rBPl2。／rBPl23）具有与天然BPI55，相同的生物学活性，它们不仅能广谱杀伤G^-菌还能有效中和内毒素。     

人C5aR(CD88)序列结构分析及其B细胞表位预测

采用ＫｙｔｅＤｏｏｌｉｔｔｌｅ氨基酸亲水性标准及Ｂａｉｒｏｃｈ的ＧＧＢＳＭ方案对人Ｃ５ａＲ分子的亲水性基序、Ｂ细胞表位及二级结构进行了预测，并用吴氏建立的Ｂ细胞表位预测方法进行评述。结果显示，不同的预测方案所得结果一致，人Ｃ５ａＲ分子中，构成螺旋结构，伸展构象及无规卷曲的氨基酸残基数比例分别为３３．７％，３４．６％，３１．７％。三个高亲水性区域为第１５～１８位的ＤＤＫＤ，第１９５～２００位的ＤＫＲＲＥＲ和第３３０～３３３位的ＲＥＳＫ，其Ａｈ值分别为３．０、３．０、２．３２。其平均抗原性指数ＡＩ值分别为０．０６４、０．０９１、０．０７０。Ｎ－端第９～３０氨基酸序列的ＡＩ＝０．０４２，是Ｂ细胞优势表位区，以此制作短肽单克隆抗体是可行的。     

应用噬菌体随机肽库技术筛选幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白的抗原表位

目的 筛选和鉴定幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)中性粒细胞激活蛋白(neutrophil-activating protein,NAP)的有效抗原表位,为Hp疫苗的研制提供基础.方法 以抗NAP的单克隆抗体作为固相筛选分子,经3轮吸附-洗脱-扩增免疫,筛选噬菌体随机7肽库,随机挑选噬菌体克隆,经噬菌体酶联免疫吸附试验(ELISA)、交叉反应试验及竞争抑制试验鉴定阳性克隆,测定阳性克隆所携带DNA序列并进行计算机辅助分析.以制备的阳性噬菌体克隆短肽液免疫小鼠,免疫血清与NAP经Western blot分析,以验证NAP的模拟表位.结果 经3轮免疫筛选后挑选到45个阳性克隆,经ELISA鉴定有12个阳性克隆,测序结果显示5种表位,其中P17噬菌体展示肽FAHLATQ与NAP氨基酸序列(137～143)高度同源,位于NAP高抗原区域(118～140),免疫血清可识别NAP.结论 用噬菌体随机7肽库成功筛选到了NAP的模拟表位,为基于NAP的诊断和疫苗的研制提供了基础.     

建立一种用重组蛋白检测抗口蹄疫病毒抗体的间接ELISA方法

目的研究以重组蛋白作为包被抗原检测口蹄疫病毒（FMDV）感染后的动物血清中特异性抗体的可能性,为建立一种非病毒颗粒的ELISA检测试剂盒提供实验依据。方法利用自行构建表达的O型口蹄疫病毒VP1表位肽重组蛋白（VP1epi）作为包被抗原,采用间接ELISA方法确定抗原的最佳工作浓度和包被方法,优化各项实验条件,并以FMDV感染后的豚鼠血清作为标准阳性血清确定ELISA方法的特异性和灵敏度。结果FMDV感染后的阳性豚鼠血清可以很好地识别VP1epi重组蛋白,用此蛋白包被检测抗FMDV抗体的灵敏度可达1∶3200,并证明所检测的抗体是FMDV特异性的。结论VP1epi重组蛋白可以替代FMDV颗粒用于建立检测抗FMDV抗体的ELISA试剂盒。