高雄激素调控颗粒细胞系全基因组靶基因及通路的初步探讨

目的:全基因组范围内探索高雄激素调控卵巢颗粒细胞的直接效应基因及通路,为高雄激素参与多囊卵巢综合征(PCOS)的发病机理提供数据支持。方法:以人卵巢颗粒细胞系KGN为研究对象,用高浓度睾酮(10^-5mol/L)处理,应用雄激素受体的抗体进行染色质免疫共沉淀,构建DNA文库,进行高通量测序及生物信息学分析。结果:高浓度睾酮处理后,KGN细胞中雄激素受体结合的Peak区域与对照组明显不同。高雄激素诱导其受体结合的Peak为1823个,大部分集中于基因间区与内含子。Peak关联靶基因富集到细胞凋亡、铁死亡、细胞黏附分子、磷脂酶D信号途径、cAMP信号通路、磷脂酰肌醇信号系统、磷酸肌醇代谢、神经活性配体-受体相互作用8个信号通路,涉及基因43个。结论:研究揭示了高雄激素诱导的卵巢颗粒细胞发生改变的重要信号通路,有助于从源头上阐明雄激素参与PCOS发病机理的机制,并为PCOS的治疗提供潜在的靶点。     

宁心红杞胶囊对老龄雌性大鼠卵巢颗粒细胞超微结构的影响

目的：观察天然药物干预下老龄雌性大鼠卵巢颗粒细胞超微结构的变化。方法：以自然衰老雌性大鼠为实验模型,按临床等效剂量胃饲由天然植物药加工制成的宁心红杞胶囊8周后,取其卵泡中颗粒细胞,用透射电镜进行观察。结果：模型组颗粒细胞胞体变小,胞质中的各种细胞器和分泌颗粒数量明显减少,可见较多的凋亡细胞和凋亡小体。用药组细胞体积增大,胞质内细胞器数量增多,线粒体、滑面内质网、粗面内质网、高尔基复合体等结构大体正常,细胞间缝隙连接增多。偶见凋亡的颗粒细胞,未见凋亡小体。结论：宁心红杞胶囊具有调控颗粒细胞凋亡的作用,能抑制凋亡进程,这可能是其临床治疗围绝经期综合征的作用机制之一。     

解偶联蛋白2表达对颗粒细胞抗氧化应激的影响

目的：通过观察体外培养颗粒细胞解偶联蛋白2（UCP2）表达变化对细胞抗氧化能力的影响，探讨颗粒细胞参与卵泡抗氧化应激的机制.方法：体外培养人颗粒细胞，分别加入过氧化氢（0.25 mmol/L），ATP（1 mmol/L），ATP＋过氧化氢，继续培养24 h，检测颗粒细胞凋亡发生率.结果：过氧化氢可以诱导颗粒细胞UCP2表达，应用ATP抑制UCP2表达后，细胞凋亡发生率增加，细胞抗氧化能力下降.结论：UCP2通过负反馈机制控制细胞内活性氧水平，参与颗粒细胞抗凋亡和对卵母细胞氧化应激保护作用.     

体外受精-胚胎移植患者卵巢颗粒细胞卵泡刺激素受体启动子突变与卵巢反应不良的关系

Objective To sequence follicle stimulating hormone receptro (FSHR) promoter of the ovarian granulocyte and initially research the molecular mechanism of the poor ovarian response. Methods To study the relationship between FSHR promoter mutation of ovarian granulocyte and ovarian respone. The 263 bp DNA fragments before FSHR 5'initiation site in 70 cases of patients with poor ovarian respone and 88 cases of patients with ovarian normal respone who were in the cycle of IVF-ET were sequenced, Results There were 63 cases which occurred 29th site G → A point mutation in 158 women and the mutation rate was 40. 0%. Mutation rate [ 60. 0% ( 42/70 ) ] of 29th site G → A in group of poor ovarian respone was significantly higher(χ2 = 21. 450,P < 0. 01 ) than normal response group [ 23.9% ( 21/88 ) ]. There was no obviously variability ( t = 0. 457, P 0. 05 ) of basic FSH values between two groups [ G/G group was (7.2 ± 2. 3) U/L, G/A & A/A group was (7. 1±2. 0) U/L];there was obviously variability (t = 35. 81 ,P < 0. 05 ) in the number of follicles sinus between two groups ( G/G group was 14. 2±1.3, G/A & A/A group was 4. 5±0. 8 ) ;there was obviously variability ( t = 40. 35, P < 0. 05 ) in the number of ovum pick-up between two groups ( G/G group was 14. 0±1.2, G/A & A/A group was 4. 5±1.1 ) ;there was obviously variability (t =25. 80,P <0.05) of FE2-peak value between two groups [G/G group was (2 865±557) pmol/L, G/A & A/A group was (880±211 ) pmol/L] ;there was obviously variability (t =40. 22 ,P <0. 05) in the number of mature eggs ( G/G group was 13.6±1.2, G/A&A/Agroupwas4.3±0. 9).Conclusion The 29th site of FSHR promoter significantly affect the activity of FSHR promoter. Mutation of G→A can weaken promoter activity, so that ovarian granulocyte poor respone to FSH.     

调经活血汤对多囊卵巢大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及机制研究

目的 研究调经活血汤对多囊卵巢(PCO)大鼠的血清激素水平、卵巢质量、形态及卵巢颗粒细胞凋亡等的影响,探讨其治疗效果及作用机制.方法 大鼠造模成功后随机分成中药治疗组和对照组,观察动物体重增加幅度、血清激素水平变化情况,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)观察卵巢颗粒细胞凋亡,免疫组化法观察颗粒细胞凋亡调控蛋白Bcl-2、Bax表达水平的变化.结果 治疗组动物体重增加幅度明显降低,中药治疗组血清T浓度较对照组、正常组显著性降低;血清E2较对照组明显降低;血清P水平较对照组明显升高,血清FSH、LH浓度与对照组无明显差异.中药治疗组卵巢镜下可见多个囊状扩张的卵泡,但体腔较对照组明显缩小,颗粒细胞层数增加至4～7层,并可见少量黄体形成;中药治疗组卵巢颗粒细胞凋亡率较对照组显著降低,卵巢颗粒细胞Bcl-2表达的OD值较对照组显著增高,Bax表达的OD值显著降低.结论 调经活血汤能使多囊卵巢大鼠卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白bcl-2表达明显升高,Bax表达明显降低,巢颗粒细胞凋亡率显著性降低;卵巢颗粒细胞层数增加,黄体形成增加:体重、血清T、E2激素水平明显下降,血清P激素水平明显升高,其作用可能与调节卵巢颗粒细胞上Bcl-2和Bax蛋白表达,影响两蛋白的比例关系,增加Bcl-2/Bax的比值,使Bax与Bcl-2蛋白形成异源二聚体,发挥其抗细胞凋亡的作用有关.     

生长分化因子-9在卵巢反应不良患者颗粒细胞中的表达

目的探讨生长分化因子-9(GDF-9)在卵巢反应不良患者颗粒细胞的表达及其在超促排卵中卵泡发育的作用。方法对49例接受体外受精-胚胎移植/卵胞浆内单精子注射(IVF-ET/ICSI)治疗的患者,给予相同的改良短方案超促排卵,采用免疫组织化学方法测定颗粒细胞中GDF-9水平,比较卵巢反应不良组(实验组,n=30)与正常对照组(对照组,n=19)GDF-9表达的差异。结果两组颗粒细胞中均测及GDF-9的表达,实验组颗粒细胞中GDF-9的表达显著低于对照组(P0.05)。结论颗粒细胞中GDF-9对控制性超排卵中卵泡的生长发育可能具有调节作用,且卵巢反应不良患者颗粒细胞中GDF-9表达降低,可能参与卵巢反应不良的发病机制。     

青少年肾细胞癌14例报告

目的提高青少年肾细胞癌的诊断和治疗水平。方法1992-2004年收治20岁以下青少年肾细胞癌患者14例。男8例，女6例。年龄10～20岁，平均17岁。血尿8例，腰部疼痛6例，腹部肿块5例，发热3例，消瘦2例，尿路刺激症状1例，贫血、乏力1例。14例均行B超、KUB加IVU和CT检查。肿块直径2．5～13．0cm，≤3．0cm者2例，4．0～10．0cm者10例，＞10．0cm者2例。术前Robson分期：Ⅰ期2例，Ⅱ期7例，Ⅲ期4例，Ⅳ期1例。14例均行肾癌根治术，8例术后行免疫治疗。结果病理诊断透明细胞癌11例，颗粒细胞癌2例，混合型癌1例。11例随访1～9年，术后2年内死亡2例，其中1例Robson分期Ⅲ期，肿块直径10．0cm，病理为颗粒细胞癌，另1例Robson分期Ⅳ期，肿块直径13．0cm，病理为混合型癌。余9例均无瘤存活，包括8例术后行免疫治疗者。结论对有肾癌相关症状的青少年宜尽早行影像学检查。根治术是青少年肾细胞癌的标准治疗手段，术后联合免疫治疗可提高生存率。预后与病理类型、肿瘤分期密切相关。     

三种颗粒细胞剥除方式对卵母细胞受精率及胚胎发育的影响

目的对三种颗粒细胞剥除方式在常规体外受精(IVF)中对卵母细胞受精率及胚胎发育影响进行前瞻性研究。方法2004年1～12月,因输卵管因素不育在我院生殖中心行常规体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的患者54例,患者年龄均小于35岁。采用随机表法随机分为三组,每组18例,共818个卵母细胞。对三组卵母细胞在IVF后采取不同的颗粒细胞剥除方式:第一组在受精后4h完全剥除颗粒细胞;第二组在受精后4h部分剥除颗粒细胞,受精后16～18h再将颗粒细胞完全剥除;第三组在受精后16～18h完全剥除颗粒细胞(即传统的过夜培养方式)。对三组的受精率、优质胚胎率、囊胚形成率进行比较。结果第一组及第二组的优质胚胎率高于第三组,差异有统计学意义(P<0.05)。三组在受精率及囊胚形成率方面没有显著差别。结论第一组的颗粒细胞剥除方式最好,即缩短精-卵共培养时间可以提高胚胎质量,长时间的精-卵共培养对优质胚胎的形成有不利影响。较短时间(12～14h)的颗粒细胞与卵细胞的共培养可能对胚胎发育的质量无显著影响。     

JAK2/STAT3通路参与过氧化氢抑制小鼠原代颗粒细胞增殖的研究

目的通过过氧化氢(H2O2)处理体外培养的小鼠原代颗粒细胞(mGC),探讨JAK2/STAT3信号通路在H2O2抑制mGC增殖中的作用。方法应用H2O2、JAK2抑制剂AG490(不同浓度、不同作用时间)处理mGC;用CCK-8、增殖细胞核抗原蛋白(PCNA)水平检测细胞增殖情况,RT-PCR检测JAK2mRNA水平,Western blot检测JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、Cyclin D1的蛋白表达水平。结果 H2O2与AG490均以剂量和时间依赖方式降低mGC活率。750μmol/L的H2O2处理mGC 24h明显降低细胞活率(P0.01),降低PCNA蛋白水平(P0.01),并下调JAK2mRNA和蛋白表达水平(P0.01);80μmol/L的JAK2抑制剂AG490可降低细胞活率(P0.01),且使细胞中的p-JAK2、JAK2、STAT3、p-STAT3、PCNA、Cyclin D1表达均下降(P0.05)。结论 H2O2抑制mGC增殖可能与JAK2/STAT3信号通路有关。