人卵泡抑素基因全长cDNA的克隆

目的 克隆人卵泡抑素(FS)全长cDNA基因。方法 采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)从人肝组织中扩增FS cDNA。构建PMD18-T载体，采用BamHⅠ、HindⅢ双酶切以及DNA测序进行鉴定。结果 RT-PCR扩增长度为968bp的基因片段，BamHⅠ、HindⅢ双酶切结果显示重组T载体中含有目的基因片段，测序结果显示编码区无基因突变。结论 人FS全长cDNA基因克隆成功，并构建了重组PMD18-T载体。     

碳包铁纳米晶结合表阿霉素对HepG-2细胞的作用及对小鼠急性毒性实验研究

目的 观察单纯碳包铁纳米晶(CCIN)粒子及结合表阿霉素(EADM)的CCIN粒子对肝癌细胞的体外作用,并比较单纯EADM与结合了EADM的CCIN对小鼠的急性毒性反应.方法 MTT法检测单纯CCIN以及载EADM的CCIN对HepG-2细胞的毒性,并在光镜、电镜下观察肿瘤细胞对CCIN的吞噬作用.经尾静脉注入不同浓度药物,比较单纯EADM与EADM-CCIN混悬液对小鼠的急性毒性反应.结果 光镜、电镜下可见HepG-2细胞吞噬大量CCIN粒子人胞浆,细胞结构完整,未见明显结构破坏.各浓度的CCIN悬液(包括空白对照组)作用于HepG-2细胞系,所得的吸光度值各组间无差异.单纯EADM对HepG-2细胞株的抑制率比相应浓度的CCIN-EADM混合物高,且含CCIN量比例较低的药物组对HepG-2细胞株的抑制率要高于含CCIN量比例相对较高的组.小鼠急性毒性实验中.单纯EADM经静脉给药的LD50值为16.9 mg/kg,低于相应的EADM-CCIN混悬液的LD50值(20.7 mg/kg).结论 HepG-2细胞可吞噬CCIN粒子;在一定浓度下单纯CCIN对HepG-2细胞无毒性;载药CCIN对肿瘤细胞的抑制在短时间内较单纯相同浓度EADM的抑制作用弱,且随CCIN比例升高抑制作用相应下降;小鼠急性毒性实验中,EADM-CCIN混悬液的急性毒性相对于同剂量的单纯EADM有所降低.     

靶向miR-221 siRNA表达载体的构建及有效靶序列的筛选和表达

目的 构建靶向miR-221的siRNA表达载体,同时筛选出一条抑制效率最好的靶序列,为研究RNAi在哺乳动物细胞内抑制靶基因表达奠定基础.方法 根据siRNA靶点设计的原则运用相关软件设计靶序列并合成其表达框,连接入siRNA表达质粒pGCSIL-GFP,同时构建miR-221表达载体pEGFP-miR-221,共同转染293T细胞,Western blot检测转染后293T细胞中Flag蛋白表达,间接反映各靶序列抑制效率,最后将筛选出的抑制效率最好的质粒转染U87胶质瘤细胞,应用细胞增殖曲线及流式细胞仪检测其对U87细胞生长的影响.结果 重组质粒经测序鉴定证明各转录模板完整、正确插入到相应质粒中,并筛选出1号靶序列对miR-221抑制率最高,该组Flag蛋白的表达量仅为对照组的34.3%,同时该序列能有效抑制U87胶质瘤细胞的生长并诱导细胞凋亡,凋亡率达21.89%.结论 成功构建了靶向miR-221的siRNA 表达载体,并筛选出一个抑制效率最好的序列,在体外实验中该序列能有效抑制U87细胞的生长.     

中药炮制学课程思政载体与路径分析

中药炮制学课程思政围绕“传承(工艺)精华,守正(产品)创新”,在每章提炼一个思政点,分析每个思政点的知识载体和融入方法。上篇总论以核心知识点为载体,下篇各论以典型品种为载体,内容涉及行业产业、职业素养及个人发展等方面,主要采用案例法、探究法和讨论法将思政点融入知识点。该课程思政教学激发了学生学习的积极性和主动性,增强了学生对饮片行业发展的责任感和使命感。     

基因治疗进展与展望—磁性转染

基因输送是基因治疗中非常关键的技术,作为运载工具,非病毒载体可避免病毒载体的安全性等问题.近年来非病毒基因载体的开发颇受关注,许多新的物理化学技术应运而生,磁性纳米颗粒介导的基因转染即磁性转染(magnetofection)是其中极具运用前景的技术之一.     

肌动蛋白和Tau蛋白荧光蛋白融合载体的构建、表达及其细胞内定位

背景：肌动蛋白和Tau蛋白分别是微丝和微管的重要组成成分,肌动蛋白和Tau蛋白的分布能否作为微丝和微管的观察指标。 目的：构建肌动蛋白和Tau蛋白的红色和绿色荧光蛋白融合表达载体并转染真核细胞,观察其在细胞内的表达和定位情况。 设计、时间及地点：单一样本观察实验,于2008-03/08在南方医科大学病理生理学教研室和广东省蛋白质组学重点实验室共同完成。 材料：克隆在pcDNA3载体上的肌动蛋白和Tau蛋白真核表达载体pcDNA3-actin和pcDNA3-Tau,以及红色荧光蛋白表达载体pmCherry-C2和绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C2、大肠杆菌株DH5α和小鼠NIH3T3细胞系由南方医科大学病理生理学教研室保存。 方法：将克隆在pcDNA3上的肌动蛋白和Tau蛋白亚克隆到红色荧光蛋白载体pmCherry-C2和绿色荧光蛋白载体pEGFP-C2上,然后转染NIH3T3细胞,利用荧光显微镜观察重组载体的表达和细胞内定位。 主要观察指标：NIH3T3细胞转染24 h后,利用Leica荧光显微镜观察上述重组载体在细胞中的表达和定位情况。 结果：重组质粒经酶切、PCR和测序鉴定正确无误,并在NIH3T3细胞中可获得高量表达。融合蛋白发出的红色和绿色荧光均表明,肌动蛋白在细胞质中呈短丝状弥散分布,Tau蛋白以细胞核为中心呈放射状排列。 结论：成功构建了肌动蛋白和Tau蛋白的不同荧光蛋白融合表达载体,并在真核细胞中得到有效表达,这为研究细胞骨架在信号分子移位中的作用提供了一个重要的工具。     

Der p 2基因真核表达载体构建及其在小鼠树突状细胞中的表达

背景：树突状细胞是目前已知的最强大的抗原提呈细胞，已经被应用于免疫治疗的研究中。 目的：构建Der p 2真核表达载体，并证明能在小鼠骨髓来源的树突状细胞中表达。 设计、时间及地点：单一样本观察，实验于2005-05/12在解放军第三军医大学新桥医院全军呼吸疾病研究所完成。 材料：C57BL/6小鼠；plambd-Der p 2购自美国HESKA公司；pCI-neo质粒为解放军第三军医大学新桥医院全军呼吸疾病研究所保存。 方法：体外分离，培养小鼠骨髓来源树突状细胞。将原核表达质粒plambdDer p 2携带的Der p 2全长cDNA切下，重组到真核表达质粒pCI-neo中，然后在脂质体介导下，将重组质粒转染到小鼠骨髓来源的树突状细胞，以未转染质粒和转染空白载体pCI-neo的树突状细胞为对照。 主要观察指标：①pCI-neoDer p 2重组质粒结构鉴定。②并用反转录-聚合酶链反应、Western Blot检测Der p 2mRNA和蛋白表达。 结果：测序证实构建的重组质粒中携带了Der p 2的全长cDNA序列，且与Gene Bank序列完全一致。反转录-聚合酶链反应和Western Blot检测结果提示，重组质粒转染的树突状细胞能表达Der p 2 mRNA和Der p 2蛋白。 结论：成功构建重组Der p 2基因真核表达载体，其转染树突状细胞后，能有效地表达于树突状细胞中。     

硫氧还蛋白1对胃癌细胞系BCG823生长的影响

目的探讨硫氧还蛋白1（thioredoxin-1,Trx1）对胃癌细胞系细胞周期及增殖速度的影响。方法对BCG823、AGS、MNK45、NUGC3、PHM82五种胃癌细胞系的质粒转染效率进行测定,选择出转染效率高的细胞系;并用实时PCR（RT-PCR）测定胃癌细胞系中Trx1的表达水平,选择出表达较低的细胞系。将所构建的Trx1真核重组表达载体pcDNA3.1myc-His-Trx1转染入上述实验筛选出的胃癌细胞系,使细胞中Trx1过表达,用流式细胞仪检测过表达Trx1的胃癌细胞进入S期的比例。结果 BCG823、AGS两种细胞系的转染效率高,满足实验需要。BCG823的Trx1表达较AGS低[BCG823细胞系的ΔCT（Trx-GAPDH）=1.43,AGS细胞系的ΔCT（Trx-GAPDH）=1.10,ΔCT值与表达量成反比],选择BCG823作为实验对象。转染pcDNA3.1myc-His-Trx1的细胞Trx1表达升高（与内参蛋白的比值为0.45±0.02和0.26±0.03,n=3,t=9.127,P=0.000）,进入S期的细胞比例升高（转染带有Trx1质粒的细胞进入S期的比例为28.54%,而转染了空载体者进入S期的比例为22.24%,χ2=104.759,P=0.000）。结论 Trx1表达水平上调可以促进胃癌细胞进入S期。     

铁炭复合磁性载体的制备及性能测定

采用中和沉淀法对球磨法制备的Fe3O4/C初级复合磁性载体进行了表面改性,并经过固相高温还原得到了铁炭复合磁性载体。制备的载体分别用TEM、XRD、TG及TPM-7 BH仪进行了表征。考察了磁靶向药物载体的热稳定性,并对其在空气中磁性能的变化规律及其在类似人体的环境中磁性能的变化趋势进行了考察。结果表明:所制备的复合磁性载体能满足实际应用的要求。     

融合基因GM-CSF-BZLF1重组腺病毒表达载体的构建

目的构建粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和EB病毒即刻早期基因(BZLF1)融合基因的重组腺病毒表达载体。方法采用逆转录-聚合酶链反应分别获得GM-CSF和BZLF1编码序列的cDNA,应用剪接式重叠延伸(SOE)技术将两段基因通过多肽接头(Gly4Ser)3的DNA序列进行连接,构建融合基因GM-CSF-BZLF1。将融合基因GM-CSF-BZLF1定向亚克隆至pAdTrack-CMV质粒,在原核细胞E.coliBJ5183中完成穿梭质粒与骨架质粒pAdEasy-1的同源重组,构建融合基因GM-CSF-BZLF1真核表达载体pAd-GM-CSF-BZLF1。将真核表达载体pAd-GM-CSF-BZLF1转染293细胞,获得复制缺陷型重组腺病毒vAd-GM-CSF-BZLF1。RT-PCR鉴定感染重组腺病毒的293细胞中GM-CSF-BZLF1基因的表达。结果 GM-CSF-BZLF1基因插入重组腺病毒表达载体的预期位置,且插入序列完全正确;感染重组腺病毒vAd-GM-CSF-BZLF1的293细胞中检测到融合基因GM-CSF-BZLF1的转录表达。结论成功地构建了融合基因GM-CSF-BZLF1重组腺病毒表达载体,为进一步探讨GM-CSF-BZLF1的功能提供了理论基础和实验依据。