人外周血单个核细胞向心肌样细胞分化的研究

目的通过体外直接培养人外周血单个核细胞(MNCs),并应用5-氮杂胞苷诱导其分化,探讨MNCs经过培养和诱导能否向心肌样细胞分化。方法以Ficoll密度梯度离心法从人外周血中分离出MNCs,于含20%FBS的DMEM培养液中培养,第3天以10μmol/L的5-氮杂胞苷诱导24 h。第14天,对于所培养的贴壁细胞行肌球蛋白、α-肌节肌动蛋白、结蛋白和肌钙蛋白T的免疫细胞化学染色;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞是否表达-αMHC和-βMHC等基因;同时作CD34、AC133和α-肌节肌动蛋白的流式细胞计数分析(FACS)。结果培养第14天开始纺锤形贴壁细胞数量明显增多,并聚集成簇。免疫细胞化学染色法显示肌球蛋白、α-肌节肌动蛋白、结蛋白和肌钙蛋白T均呈阳性。RT-PCR结果显示经5-氮杂胞苷诱导分化后的MNCs存在α和-βMHC基因的表达。FACS显示,CD34阳性或AC133阳性率为(53.04±5.60)%、α-肌节肌动蛋白阳性率为(42.70±11.73)%。结论体外培养并经5-氮杂胞苷诱导后的MNCs既具有心肌样细胞的部分特点,又具有干细胞的部分特征。在适当的条件下,MNCs有向心肌样细胞分化的潜能。     

家兔腹腔巨噬细胞能产生单核细胞趋化蛋白-1

用培养的兔腹有空巨噬细胞条件培养基作为趋化因子的来源，用改良的Ｂｏｙｄｅｎ小室微孔滤膜法进行单核细胞趋化试验，观察了兔腹腔巨噬细胞条件培养基对单核细胞的趋化作用和抗单核细胞趋化蛋白－１抗体对单核细胞迁移的影响，同时用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析方法检测了ＭＣＰ－１ ｍＲＮＡ在该巨噬细胞的表达。结果显示，该条件培养基对单核细胞有明显的趋化作用，并被抗ＭＣＰ－１抗体所抑制，同时该巨噬细胞也能表达ＭＣ     

Detection of T lymphocyte subsets and mIL-2R on surface of PBMC in patients with hepatitis B

AIM: To study the levels of T lymphocyte subsets andmembrane interleukin-2 receptor (mIL-2R) on surface ofperipheral blood mononuclear cells (PBMCs) of patients withhepatitis B and its role in the pathogenesis of hepatitis B.METHODS: The levels of T lymphocyte subsets and mIL-2R in PBMC before and after being stimulated with PHAwere detected by biotin-streptavidin (BSA) technique in 196cases of hepatitis B.RESULTS: In patients with hepatitis B, the levels of CD3+,CD4+ cells, and the ratio of CD4+ cells/CD8+ cells were lower,but the level of CD8+ cells was higher than those in normalcontrols (42.20±6.01 vs65.96±6.54, 38.17±5.93 vs41.73±6.40,0.91±0.28 vs 1.44±0.31, 39.86±6.36 vs30.02±-4.54, P＜0.01).The total expression level of mIL-2R in PBMC before andafter being stimulated with PHA was also lower than thosein normal controls (3.47±1.55 vs4.52±1.49, 34.03±2.94 vs37.95±3.00, P＜0.01). In all the patients with hepatitis B, thelevels of T lymphocyte subsets and mIL-2R in PBMC withHBV-DNA (+) were lower than those with HBV-DNA (-),which were significantly different (39.57±7.11 vs44.36±5.43,34.36±7.16 vs 40.75±5.87, 37.82±6.54 vs 41.72±6.21,0.88±0.33 vs0.99±0.27, 2.82±1.62 vs3.85±1.47, 31.56±3.00vs35.84±2.83, P＜0.01). In addition, the levels of CD3+, CD4+,CD8+ cells, the ratio of CD4+ cells/CD8+ cells and mIL-2R amongdifferent courses of hepatitis B were all significantly different(F=3 723.18, P＜0.01. F=130.43, P＜0.01. F=54.01, P＜0.01.F=2.99, P＜0.05. F=7.16, P＜0.01).CONCLUSION: Both cellular and humoral immune functionsare obviously in disorder in patients with hepatitis B, whichmight be closely associated with the chronicity in patients.     

动脉粥样硬化进程中单核/巨噬细胞的行为变化

动脉粥样硬化是由脂质引发的炎症性疾病,单核/巨噬细胞在动脉粥样硬化发生发展过程中发挥极其重要的作用。巨噬细胞吞噬脂质后成为泡沫细胞,构成动脉粥样硬化的脂质条纹和粥样斑块。过去几年中,对于单核细胞如何聚集、分化、摄取脂质及其在动脉粥样硬化中的作用有了进一步了解。单核/巨噬细胞表型和功能的复杂性提示其很可能会成为动脉粥样硬化治疗的靶点。本文就单核/巨噬细胞在动脉粥样硬化进程中的行为变化进行综述。     

高水平蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22．6 mRNA 的表达在克罗恩病中的临床意义

目的：检测蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22（PTPN22）基因选择性剪切亚型PTPN22．6 mRNA 在克罗恩病（CD）患者外周血单核细胞（PBMCs）中的表达水平,研究 PTPN22．6 mRNA 表达状况与 C 反应蛋白（CRP）和红细胞沉降率（ESR）的关系及其临床意义。方法采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）方法分析50例 CD 患者和35例对照组 PBMCs 中PTPN22．6 mRNA 表达。分别采用速率散射比浊法和全自动红细胞沉降系统分析仪测定 CRP 和ESR 水平。结果与对照组比较,CD 患者 PBMCs 中 PTPN22．6 mRNA 的表达量升高（P ＜0．05）。活动期 CD 患者 PBMCs 中 PTPN22．6 mRNA的表达量显著高于缓解期 CD 患者（P ＜0．05）。CD 患者 PBMCs 中 PTPN22．6 mRNA 表达量与 CRP 和 ESR 浓度呈正相关（r ＝0．356,P ＜0．01;r ＝0．512, P ＜0．01）。疾病行为与 CD 患者PBMCs中 PTPN22．6 mRNA 表达水平相关,梗阻型 CD 患者 PBMCs中 PTPN22．6 mRNA 表达量显著高于非狭窄非穿透型和穿透型 CD 患者（P ＜0．05）。结论CD 患者 PBMCs 中 PTPN22．6 mRNA 表达水平升高,高水平 PTPN22．6 mRNA 的表达不仅与梗阻型疾病行为和疾病活动状态相关,而且与 CRP 和 ESR 呈正相关,提示 PTPN22．6可能在 CD 免疫学发病中起重要作用。     

辛伐他汀对小鼠巨细胞病毒肺炎Toll样受体2表达的影响

目的:观察辛伐他汀对小鼠巨细胞病毒(MCMV)肺炎小鼠肺组织Toll样受体2(Toll-like receptor2,TLR-2)、干扰素γ(IFN-γ)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响,并探讨辛伐他汀干预MCMV肺炎的可能机制。方法:将40只6~8周龄BALB/c小鼠随机分成5组:正常对照(NC)组、MCMV感染组和辛伐他汀干预(SMV1、SMV2和SMV3)组。SMV1、SMV2和SMV3组分别在腹腔注射MCMV前7 d、与MCMV同时和MCMV感染后3 d给予辛伐他汀(50 mg·kg~(-1)·d~(-1),均连续给药7 d)灌胃,NC组及MCMV组分别予以同体积的生理盐水灌胃。HE染色观察小鼠肺组织的病理改变,real-time PCR检测MCMV DNA的变化,免疫组化和Western blot检测肺组织中TLR-2的表达,ELISA检测肺组织中IFN-γ和MCP-1的变化。结果:与NC组相比,MCMV组肺组织病理染色显示肺泡间质水肿,肺泡壁增宽,内可见大量炎性细胞浸润;肺组织中TLR-2的表达增加,MCMV DNA含量升高,肺组织中炎症因子IFN-γ和MCP-1明显增多(P0.05)。辛伐他汀干预后,与MCMV组相比,肺组织病理改变较前减轻,TLR-2的表达下降(P0.05),MCMV DNA含量降低(P0.05),炎性因子IFN-γ和MCP-1明显下降(P0.05),且SMV1组TLR-2的表达量及MCMV DNA含量下降较SMV2和SMV3组更明显(P0.05),而SMV2和SMV3两组相比差异无统计学显著性。结论:辛伐他汀干预通过下调TLR-2信号通路而降低TLR-2的表达,减少IFN-γ和MCP-1的分泌,并抑制MCMV DNA的复制,从而使肺组织的病理损害得以减轻;且提前给予辛伐他汀干预对预防MCMV的感染及减轻炎症反应具有重要作用。     

PD模型小鼠中脑特异性表达突变型A53T α-Synuclein基因对外周单核细胞浸润的影响

目的小鼠中脑特异性表达突变型A53T α-Synuclein(α-Syn)后,研究其对中脑发生外周单核细胞浸润的影响。方法本研究使用转突变型A53Tα-Syn基因的帕金森病小鼠模型(以下简称Pitx3/A53T小鼠),应用免疫荧光共定位技术检测2、12月龄的Pitx3/A53T及non-Transgenic(nTg)小鼠中脑黑质致密部(SNC)、腹侧背盖区(VTA)及黑质网状部(SNR)的P2Y12、CD11b、CD169和Iba-1的表达情况。结果免疫荧光结果显示,在2月龄的Pitx3/A53T和nTg小鼠,以及12月龄的nTg小鼠中脑部位(SNC、VTA、SNR),仅检测到中枢神经系统(CNS)小胶质细胞(P2Y12+CD11b+和CD169-Iba-1+)。在12月龄的Pitx3/A53T小鼠中脑部位,除了有CNS小胶质细胞外,其SNR部位还特异性存在外周单核细胞(P2Y12-CD11b+和CD169+Iba-1+)。此外,在2月龄时,Pitx3/A53T小鼠中脑部位的P2Y12表达水平较nTg小鼠高(P0.05,SNC、VTA、SNR);12月龄时,Pitx3/A53T小鼠中脑部位的P2Y12表达水平明显低于nTg小鼠(P0.01,SNC、VTA;P0.001,SNR);与2月龄的小鼠相比,12月龄小鼠中脑部位的P2Y12表达水平明显降低(P0.001,Pitx3/A53T;P0.05,nTg)。结论小鼠中脑特异性表达突变型A53Tα-Syn后,其在老龄时中脑发生外周单核细胞浸润。而且小鼠中脑部位P2Y12的表达水平变化与年龄和突变型A53Tα-Syn关系密切。     

2型糖尿病合并肾病患者尿MCP-1变化的临床意义

对2型糖尿病（T2DM）及合并微量蛋白尿、大量蛋白尿患者用酶法检测血糖、糖化血红蛋白，用酶联免疫吸附法检测血、尿单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）。结果显示，各组间血MCP-1水平无显著性差异，但合并糖尿病肾病（DN）患者的尿MCP-1水平显著高于T2DM患者；且尿MCP-1与尿白蛋白、糖化血红蛋白、舒张压呈正相关。提示T2DM患者的高血糖可能促进肾脏局部组织过多表达MCP-1，MCP-1可能参与DN的发生和早期发展。     

氯沙坦对家兔早期动脉粥样硬化血管MCP-1表达及胆固醇含量的影响

目的 :氯沙坦对加速性家兔早期动脉粥样硬化 （AS）血管增生及 MCP- 1蛋白表达的影响。方法 :采用组织学、免疫组织化学和生物化学方法评价加速性家兔 AS早期血管组织学、增殖细胞核抗原 （PCNA）及单核白细胞趋化蛋白 - 1（MCP- 1）蛋白表达和组织胆固醇含量的改变。结果 :AS组血管内膜与中膜厚度比值、主动脉组织胆固醇含量、内膜 PCNA阳性细胞数及 MCP- 1蛋白表达平均光密度积分值均显著增加 ,氯沙坦干预组内膜与中膜厚度比值较 AS组显著下降 ,PCNA阳性细胞数明显减少 ,血管壁 MCP- 1蛋白表达水平明显下降 （均 P<0 .0 1）。氯沙坦干预组主动脉组织胆固醇含量明显低于 AS组 [1.47± 0 .0 3mg/ g（wet）与 1.35± 0 .0 2 mg/ g（wet） ,P<0 .0 5 ]。结论 :氯沙坦干预可抑制 MCP- 1蛋白表达 ,减轻加速性 AS病变血管内膜增生 ,减少胆固醇在血管壁沉积 ,从而可能在防治AS过程中起重要作用。     

寡核苷酸芯片技术检测5种临床肠道病原菌的研究

背景：寡核苷酸芯片是一种检测病原菌的新技术，具有高通量、特异性等特点。目的：采用寡核苷酸芯片技术建立对5种临床常见肠道病原菌（霍乱弧菌、空肠弯曲杆菌、志贺菌、耶尔森菌、单核细胞增生利斯特菌）进行快速、准确鉴定和检测的方法。方法：选取16SrDNA作为检测靶基因，设计通用引物和寡核苷酸探针。病原菌基因组DNA通过16SrDNA通用引物行聚合酶链反应（PCR），扩增后与芯片上的探针杂交。结果：霍乱弧菌、空肠弯曲杆菌、志贺菌、耶尔森菌、单核细胞增生利斯特菌的杂交信号均很强，其他细菌无杂交信号。寡核苷酸芯片的检测时间约5h，其敏感性可达10^3CFU／ml。寡核苷酸芯片对23例临床腹泻样本的检测结果与传统细菌学培养结果完全一致。结论：寡核苷酸芯片的特异性、稳定性、重复性均较好，是检测临床肠道病原菌准确、可靠、实用性强的方法。