生物信息学(2):基因工程技术简介

基因工程的特点与基本步骤 基因工程通常称为重组DNA技术（recombinant DNA technique），又称为基因克隆fgene cloning）或分子克隆fmolecular cloning），是用人工方法将外源基因与DNA载体结合形成重组DNA．然后引入某一受体细胞中，使外源基因复制并产生相应的基因产物，从而获得生物新品种的一种崭新育种技术。     

羟基磷灰石义眼台作为药物缓释载体减轻术后反应的临床观察

目的评价羟基磷灰石（HA）义眼台作为药物缓释载体减轻眼球摘除义眼台植入术后反应的效果。方法植入HA义眼台前，用地塞米松5mg，庆大霉素8万u，透明质酸酶1500U混合液浸泡HA义眼台15—20min后植入，手术步骤按常规。结果观察术后1周反应情况，52例中51例（98．07％）无疼痛或仅有轻度疼痛；44例（84．62％）结膜无水肿；36例（69．23％）无恶心；16例（30．77％）轻中度恶心；48例（92．31％）无呕吐。与对照组（43例）比较，术后疼痛、结膜水肿、恶心呕吐均较轻，其差别均有统计学意义（P〈0．001）。结论HA义眼台作为药物缓释载体植入眼球肌膜囊内能有效地控制术后反应，减轻患者痛苦。     

修复骨缺损的局部基因释放载体技术

骨骼缺损是临床上常见的问题，骨结构异常严重地影响患者的外貌、功能和心理社会行为。局部基因释放载体技术是新近开展的一种修复组织缺损的新技术。本文对该技术的发展现状及其应用于修复骨骼缺损的前景简要作一综述。     

人野生型parkin基因真核表达载体的构建及其在PC12细胞中的表达

目的 克隆人野生型parkin基因并构建真核表达载体pCDNA3．1—parkin，将重组质粒转染PC12细胞获得高表达人野生型parkin基因的PC12细胞克隆。方法 从胎脑组织中提取总RNA，用RT—PCR方法获得人野生型parkin基因的全长cDNA，插入pCR2．1—TA克隆载体中进行序列测定，测序正确后将其亚克隆至表达载体pCD—NA3．1，利用脂质体将重组质粒转染PC12细胞，经G418筛选获得抗性细胞克隆，采用RT—PCR和Western Blot方法鉴定人野生型parkin基因在PC12细胞中的过表达。结果 经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒，RT—PCR和Western Blot证明经G418筛选得到的转基因PC12细胞克隆中存在人野生型parkin基因的表达。结论 成功构建了人野生型parkin基因的真核表达载体，获得了稳定表达人野生型parkin基因的PC12细胞克隆，为进一步研究parkin的生物学功能以及parkin在帕金森病发病机制中的作用奠定了良好的基础。     

免疫转印法检测扩张型心肌病抗心肌线粒体ADP/ATP载体自身抗体的应用探讨

以猪心肌线粒体为材料,应用免疫转印技术检测抗心肌线粒体ADP/ATP载体自身抗体。结果表明,扩张型心肌病患者血清中存在抗心肌线粒体30kd多肽抗体。检测的特异性为100%,敏感性为52.38%。     

生物降解左旋—18甲基长效避孕埋植剂载体材料的生物相容…

采用生物降解的嵌段型聚己内酯丙交酯高分子材料为载体制成的左旋－１８甲长效避孕埋植剂是一种新型的皮下埋植剂，为尽快在临床推广使用，按照中国药品生物制品鉴定所等单位制定的标准对这一材料进行了详细的生物相容性研究，包括皮肤刺激试验、皮肤致敏试验、体外溶血试验、急性毒性试验、细胞毒性试验、鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验－Ａｍｅｓ试验、哺乳动物增减功能染色体畸变 试验小、小鼠骨髓多染红细胞微核试验、致畸胎试验和     

一种直接高效克隆PCR产物的载体制备

Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ经ＥｃｏＲ Ｖ酶切后，在Ｔａｑ酶作用下加入ｄＴＴＰ使其３’端加上碱基“Ｔ”而成为３’端突出的粘性末端载体。用此载体直接与ＰＣＲ产物连接进行克隆。克隆效率比采用平端载体克隆的效率提高约５０倍。