黄芪注射液改善肾间质纤维化的作用机制研究

目的:观察黄芪注射液对肾间质纤维化的改善作用并探讨其机制.方法:以单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠模型为研究对象.将36只SD大鼠随机分为对照组、UUO模型组和黄芪注射液治疗组.治疗组每日给予黄芪注射液(5 ml·kg-1·d-1)腹腔注射,术前1天始至术后第9天止.术后第10天取术侧肾脏组织.HE、PAS和苦味酸-天狼星红染色,观察肾小管间质病理改变、肾皮质相对间质容积和相对胶原含量的变化.免疫组织化学方法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原在肾间质中的表达.免疫印迹方法检测热休克蛋白47(heat shock protein 47,HSP47)在肾脏中的表达.结果:UUO大鼠模型组和治疗组均出现明显的肾间质纤维化病理改变,但治疗组病变程度相对较轻.肾皮质相对间质容积和相对胶原含量于模型组及治疗组明显高于对照组(P＜0.01),但治疗组明显低于模型组(P＜0.01).免疫组化染色显示:TGF-β1、α-SMA和Ⅰ型胶原表达于模型组和治疗组均明显高于对照组(P＜0.05),但治疗组较模型组有明显减少(P＜0.05).免疫印迹方法显示:HSP47蛋白表达于模型组和治疗组明显高于对照组(P＜0.05),但治疗组较模型组有明显减少(P＜0.05).结论:黄芪注射液对大鼠肾间质纤维化具有明显的改善作用,这种作用部分是通过抑制TGF-β1表达,阻止肾小管上皮细胞转分化,减少胶原合成实现的.     

血管外膜和胶原分布对内膜增生及血管重塑的影响

目的 动态观察移植静脉再狭窄动物模型中血管外膜和胶原的变化,以评价血管外膜和胶原对内膜增生和血管重塑的影响. 方法 长白猪18只,建立猪移植静脉再狭窄模型,术后随机分为3组,术后7d组,术后30d组和术后45d组,每组6只;未移植前的大隐静脉作为对照组.采用HE和Masson染色,观察各组血管成分结构、外膜细胞密度、增生指数和胶原的动态变化. 结果 术后7d组新生内膜形成并增厚,外膜厚度和细胞密度增大,外膜和新生内膜中胶原增多,血管腔面积减少,但与对照组比较差异无统计学意义(F=2.03,P=0.091),而剩余狭窄率逐渐增大(F=5.16,P=0.033),重塑指数和外弹力板围绕面积(EELA)稍有增大.术后30d组新生内膜明显增厚,外膜厚度和细胞密度达最大,新生内膜中含大量胶原,呈进行性增多趋势,外膜中胶原含量达最大,管腔面积和内膜弹力板围绕面积(IELA)明显减小,剩余狭窄率较对照组明显增大(F=6.63,P=0.018),重塑指数和EELA较术后7d组明显减小.术后45d组新生内膜增厚达最大,外膜细胞密度较术后30d组减小(F=6.91,P=0.015),新生内膜中胶原含量达最大,外膜中胶原含量较术后30d组减少,并见局部纤维化;管腔面积、重塑指数、IELA和EELA达最小,剩余狭窄率达最大. 结论 移植血管再狭窄是内膜增生和血管重塑共同作用的结果 .血管外膜的增厚、纤维化及胶原的重排对内膜增生和血管重塑起着重要作用,参与并促进了移植血管再狭窄的发生过程.     

各种牙本质非胶原蛋白矿化作用的研究进展

牙本质胞外基质由90％胶原(主要为Ⅰ型)和10％非胶原蛋白(non-collagenous proteins,NCPs)构成。其中胶原为羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)板状晶体(plate like crystalline)的沉积提供支架,NCPs则被认为控制晶体沉积的启动和生长。研究NCPs中各组分在牙本质矿化中的作用,对阐明牙齿发育及修复的分子学机制有着重要意义。     

三种组织工程鼓膜的构建

目的 构建3种不同材料的组织工程鼓膜,并对其进行生物学特性检测. 方法 体重 30 kg 健康雄性小白猪1只,制备脱细胞硬脑膜及脱细胞真皮,并从牛皮中提取液态胶原,将第3代豚鼠鼓膜成纤维细胞 1×106个/mL,各 0.2 mL 种于3种材料表面进行培养,倒置相差显微镜下观察成纤维细胞的生长状态.培养1周后,将3种材料分别进行扫描电镜及HE染色观察,测定材料厚度及其张力. 结果 成纤维细胞在3种材料表面生长良好,呈束状平行排列,其中以胶原与脱细胞真皮表面成纤维细胞生长情况较佳.HE 染色及扫描电镜下可见成纤维细胞呈单层于3种材料表面连续生长.胶原膜、脱细胞真皮及脱细胞硬脑膜的平均厚度分别为 9.4、10.0 及 10.4 μm.张力强度测定,复合成纤维细胞的胶原组织工程鼓膜张力 (1.417±0.030) N/mm2,复合成纤维细胞的脱细胞真皮张力为 (24.500±2.040)N/mm2,复合成纤维细胞的脱细胞硬脑膜张力为(53.300±2.600)N/mm2;复合成纤维细胞的脱细胞真皮张力与正常豚鼠鼓膜张力26.700 N/mm2最接近. 结论 脱细胞猪真皮为支架复合成纤维细胞构建的组织工程鼓膜,其张力与厚度均与正常豚鼠鼓膜相接近,是构建组织工程鼓膜的理想材料.     

TGF-β1和IGF-1共同转染大鼠BMSCs向软骨细胞分化的实验研究

目的 探讨应用TGF-β1和IGF-1基因转染大鼠BMSCs后,目的基因分泌情况及向软骨细胞的分化效果,为构建新型的组织工程软骨种子细胞提供思路. 方法 6周龄健康雄性Wistar大鼠2只,体重约150 g.扩增、提取质粒pcDNA3.1-IGF-1、pcDNA3.1-TGF-β1,酶切、电泳鉴定并测序.采用密度梯度离心法和贴壁分离法,分离、纯化Wistar大鼠BMSCs,倒置相差显微镜观察原代和传代BMSCs形态学改变,免疫荧光法检测细胞表面标志.将TGF-β1和IGF-1基因单独或共转染第3代BMSCs,按转染情况分为5组未转染组(A组)、转染空载体组(B组)、转染TGF-β1组(C组)、转染IGF-1组(D组)、TGF-β1与IGF-1共转染组(E组).对转染后细胞进行筛选,MTT法测定筛选后细胞的增殖活性,RT-PCR和Western blot法检测筛选后细胞的表达. 结果 电泳显示IGF-1和TGF-β1两目的基因条带,基因测序与Gene-Bank cDNA序列相符.大鼠BMSCs原代细胞接种24 h后可见少量贴壁突起细胞,4、5 d开始形成典型的BMSCs簇状增生,9、10 d细胞生长即可达80%～90%融合;传代后细胞形态较均一.免疫荧光法检测BMSCs的CD29、CD44呈阳性反应,CD34、CD45呈阴性反应.转染24 h后有少量细胞死亡,筛选3周后细胞克隆形成,至第4周细胞可传代,多数细胞变成多边形,部分细胞边界不清,呈圆形,核偏位,核周颗粒明显.MTT法测定A、B、C、D、E组细胞在490 nm波长处的吸光度(A)值,分别为0.432±0.038、0.428±0.041、0.664±0.086、0.655 ±0.045和0.833 ±0.103.A、B组与C、D、E组间差异均有统计学意义(P＜0.01),但A、B组以及C、D、E组间差异无统计学意义(P＞0.05).RT-PCR和Westernblot检测目的基因和蛋白的表达量,TGF-β1表达以C组最多,分别为0.925 ±0.0220、124.341 7 ±2.982 0,E组次之,分别为0.771 7±0.012 0、101.766 7±1.241 0(P＜0.01);IGF-1表达以E组最多,分别为1.0200±0.026 0、128.171 7±9.152 0,D组次之,分别为0.465 0 ±0.042 0、111.045 0 ±6.248 0(P＜0.01);Ⅱ型胶原表达以E组最多,分别为0.980 0 ±0.034 0、120.355 0 ±12.550 0,C组次之,分别为0.720 0 ±0.026 0、72.246 7 ±7.364 0(P＜0.01). 结论 通过TGF-β1和IGF-1基因共同转染BMSCs修复软骨缺损是一个较有前景的发展方向,对组织工程软骨应用于临床具有重要意义.     

血小板胶原受体糖蛋白Ⅵ体外表达

目的利用基因重组技术体外表达血小板糖蛋白Ⅵ(GPⅥ)胞外区片段。方法采用PCR方法扩增GPⅥ胞外区片段cDNA，构建表达载体pET-20b( )-GPⅥ，转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS，经IPTG诱导表达。表达产物经Ni—NTA Resir。纯化后复性；使用Western blot方法鉴定重组蛋白性质。结果 PCR扩增产物经测序证明与GPVI胞外区cDNA序列完全一致；酶切分析证明成功构建了表达载体pET-20b( )-GPⅥ；原核细胞经诱导表达后出现新的相对分子量为32kd的蛋白条带，诱导产物以包涵体形式存在；Western印迹分析表明重组蛋白可与抗Penta-His抗体和抗GPⅥ多抗特异性结合。结论正确构建了GPⅥ表达载体并成功表达重组蛋白，纯化、复性后的重组蛋白具有良好的抗原性。     

盐酸沙格雷酯对糖尿病大鼠肾脏的作用机制

目的探讨5-羟色胺2A型受体及其阻滞剂盐酸沙格雷酯对糖尿病大鼠肾脏病变的影响及其作用机制。方法设立正常对照组(NC组)、盐酸沙格雷酯治疗组(SH组)、糖尿病组(DM组)。检测各组第12周的肾功能、尿微量白蛋白排泄率(UAER)、血清一氧化氮(NO)浓度;应用免疫组织化学法检测肾内Ⅳ型胶原、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达水平;在光学显微镜、透射电子显微镜下观察各组大鼠肾小球病理改变。结果与DM组相比,SH组大鼠UAER、相对肾重显著降低(P值均<0.01);SH组病理改变明显改善,足突融合现象不明显,滤过膜结构基本完整,系膜区无明显增宽,内皮细胞肿胀不明显,图像分析结果表明,肾小球截面积及体积较DM组显著减小(P值均<0.01);与DM组比较,SH组血清NO浓度显著升高(P<0.05),Ⅳ型胶原表达水平显著下调(P<0.01),eNOS表达水平显著上调(P<0.05)。结论盐酸沙格雷酯对糖尿病肾脏有保护作用,其机制可能包括减少Ⅳ型胶原沉积,提高eNOS表达水平及NO的血清浓度,从而有效改善糖尿病肾病的病理损害,延缓其发展。     

90^Sr敷贴治疗瘢痕疙瘩病人的护理

瘢痕疙瘩系皮肤受到创伤后胶原合成与降解平衡失调，致使局部过量胶原合成与沉积，使患处发生增生、挛缩，导致生理功能障碍。瘢痕增生常影响人体外观形象，给病人带来沉重的心理负担。目前治疗方法有手术切除、封闭疗法、激光等。但疗效不佳，甚至引起瘢痕扩大。我科自2002年9月-2006年9月采用90^Sr敷贴器治疗瘢痕疙瘩156例，效果满意。现将护理体会介绍如下。     

鱼胶原肽保湿功能的比较研究

目的：通过体表和体外实验验证鱼胶原肽的保湿功能。方法：以0．3％透明质酸钠为阳性对照，通过体表试验比较鱼胶原肽和市场上销售的同类产品在相同条件下对皮肤水分含量的改善效果，以及比较鱼胶原肽体表改善皮肤含水率功效与其浓度的关系，同时通过体外试验比较鱼胶原肽和市场上销售的同类产品在相对湿度为85％、温度为20℃时放置若干时间内的失水率，以及鱼胶原肽体外失水率与其浓度的关系。结果：鱼胶原肽总体保湿效果优于市场上同类产品。结论：鱼胶原肽作为廉价的高品质保湿剂，拥有广阔的发展前景。     

肝病患者血清中型胶原肽的检测和临床意义

为了解病毒性肝炎患者肝纤维组织增生的程度 ,我们检测 1 52例患者血清 型胶原肽的含量 ,并与健康人作比较 ,现报告如下。一、材料与方法1 .检测对象与分组 :对照组 50例健康体检者。肝病组包括临床确诊急性肝炎 (AH) 63例 ,慢性肝炎 (CH) 55例 ,肝炎肝硬化 (LC) 2 6例 ,肝癌 8例。2 .方法 :使用上海华泰生物工程有限公司提供的 型胶原肽试剂盒 ,操作按说明书 ;用美国ELX80 0 G-酶标仪比色。二、结果和讨论各型肝病患者血清 型胶原肽含量及比较见表1。　　结果显示 ,除 AH外 ,各型肝炎与对照组比较 ,差异均有显著性 (P<0 .0 5)。说…