C基因截短的HBV复制与包装

目的 探讨C基因截短型HBV变异体的复制与包装。方法 采用分子克隆、人工定点突变等技术构建C基因截短型HBV变异体质粒，用脂质体法转染HepG2细胞，提取细胞内及培养上清液中DNA分别进行Southem杂交，PCR及实时定量荧光PCR分析。结果 经DNA测序及酶切鉴定证实C基因截短型HBV质粒载体构建成功；C基因截短型HBV为复制缺损型，与辅助质粒共转染HepG2细胞，可在细胞内及培养上清液中检测到HBV各种DNA构型；DNA定量分析提示C基因截短型HBV的包装效率较野生型HBV提高3～40倍。结论 C基因截短型HBV变异体为复制缺损型，单独转染后不能在肝细胞内包装与复制，但在缺失包装信号ε的相应辅助病毒辅助下可有效复制并包装成子代病毒颗粒分泌到胞外，且包装效率大大提高。     

北京新发现的人偏肺病毒N蛋白编码基因的序列分析

目的　了解新近从北京地区发现的人类偏肺病毒 (humanmetapneumovirus ,HMPV)N蛋白编码基因的特征。方法　从经RT PCR检测HMPV阳性的临床鼻咽洗液标本中进行HMPVN蛋白全基因扩增、克隆至pUCm T载体中并进行测序 ,与GenBank中的多株HMPVN蛋白基因序列进行比较和进化树分析。结果　经扩增并测序 ,标本BJ1816和BJ1887N蛋白基因全长为 1185bp ,编码 394个氨基酸。BJ1816N蛋白基因与国际上第一株HMPV分离株NDL0 0 1和GenBank中其它的多株HMPV的核苷酸和氨基酸同源性分别为 86 .2 %～ 99.0 %和 96 .2 %～ 99.7%。BJ1887N蛋白基因与以上进行比较的各株HMPV的核苷酸和氨基酸同源性分别为 86 .6 %～ 97.0 %和 96 .4 %～ 99.5 %。BJ1816和BJ1887之间N基因的核苷酸和氨基酸同源性分别为 86 .6 %和 96 .4 %。提示BJ1816和BJ1887分属于HMPV的两个不同的基因进化簇。结论　从基因水平进一步证明新近发现的婴幼儿肺炎的新病原确为HMPV ,提示北京地区婴幼儿中同时存在两个不同进化簇 (即基因型 )的HMPV感染。     

5株SARS-CoV部分基因序列比较分析

目的　分析SARS CoV部分结构区的基因序列 ,了解其变异程度。方法　采用套式PCR法扩增各结构区基因 ,对阳性PCR产物进行克隆和测序 ,并对序列进行分析。结果　完成了LC1株病毒的M、N、E和S基因的扩增和克隆 ,对LC2、LC3、LC4和LC5株病毒的M区基因进行了扩增和克隆。序列分析显示各结构基因的核苷酸序列与已报道的 18株序列的同源性在 99%以上。结论SARS CoV的基因序列较保守 ,有利于PCR诊断试剂和预防用疫苗的研制。     

联合运用St14(DXS52)位点VNTR和 FⅧ基因内的(CA)n重复多态性诊断甲型血友病

目的　提高甲型血友病 (hemophilia A,HA)家系成员基因诊断及产前基因诊断的准确性和可诊断率。方法　采用 St14 (DXS5 2 )位点的可变串联重复序列和 F 基因第 13内含子的 (CA) n重复多态性连锁分析对 HA家系进行间接基因诊断。结果　单用上述 2个多态位点中的 1个对 9个 HA家系进行连锁分析 ,可诊断率均为 6 6 .7% ,联合 2个多态位点 ,可诊断率则提高到 88.9% ,完成了 4个家系的产前基因诊断 ,并监测到 1例单用 St14位点的可变串联重复序列多态连锁分析可能发生的产前诊断的误诊。结论联合采用上述 2个多态位点可以对近 90 %的 HA家系作出快速、准确的基因诊断和产前基因诊断。     

Blast-病毒物种鉴定的新方法

采集自愿献血员中56份HCV-Ab阳性血样，常规分离血清。应用RT-nPCR对HGV-NS3区进行核酸扩增，PCR扩增产物与PMD18-T载体连接，转染DH5d工程菌株，挑选白色菌落，经内套PCR验证克隆阳性者，以碱裂解法提取质粒DNA，应用荧光染料Bignye标记、Sanger双脱氧末端终止法进行重组DNA的核酸序列测定。将测得的核酸序列，经国际互联网络输入到NCBI的GenBank数据库的局部序列相似形查询(Blast)的查询框中，借助于GenBank数据库中的资料和计算机分析程序中的BlastN软件，与数据库中所有已知的核酸序列进行序列同源性比对搜索分析。     

肝短静脉的解剖与临床应用进展

随着肝脏外科的发展，肝短静脉(Shor thepatic．vein，SHV)越来越受到临床医生的关注。肝尾状叶肿瘤切除的最大风险在于癌灶紧贴下腔静脉，SHV直接汇入下腔静脉，术中稍有不慎即可撕破SHV；肝移植中正确处理SHV可缩短无肝期和手术时间；非规则性肝叶或肝段切除、活体肝移植的供肝切取术中注意保留SHV有助于剩余肝脏功能的顺利恢复；通     

生物信息学在病毒学研究中的应用

本文介绍生物信息学的基本概念、中心任务和研究目标，阐述了近几年来生物信息学在病毒学研究中发挥的主要作用，并对其今后的研究前景作了展望，同时提出了一些亟待解决的问题。     

Isolation of Nanjing local strains of HHV-7 and their biological and immunological characteristics

To investigate the biological and immunological characteristics of the Nanjing local strains of HHV-7,fourstrains of herpesvirus were isolated from saliva specimens of one healthy individual and three childrensuffering from a kidney disease in Nanjing.The viruses were identified by transmission electron microscopy(EM),indirect immunofluorescence assay(IFA) with a specific monoclonal antibody;nested polymerase chainreaction,restriction mapping and DNA sequencing.The virus-infected cells showed the typical cytophathiceffect(CPE) under microscopy and could be detected by IFA with the human herpesvirus-7(HHV-7) specificantibody.Under EM,herpesvirus-like and virions capsids could be found in their cytoplasm or nucleoplasm.HHV-7 DNA fragments amplified from infected cells by nested PCR were confirmed by restriction mappingand DNA sequencing.Similarly to DC strain,an known HHV-7 strain used in the present study as the positivecontrol,the virus could be inactivated by ultraviolet irradiation for 10 min,heated at 45℃ for 30 min,pH<5or>9 at 4℃ for 2 h and ether or chloroform for 10 h.The virus induced the production of TNF-α,IL-10 andIL-12p70 while inhibited IFN-γ secretion,increased the percentage of CD2~+ cells while decreased that of CD4~+or CD45RA~+ cells.The results indicate that the viruses isolated in Nanjing are HHV-7,which has similarbiological characteristic to the known HHV-7 strain,DC.Infection with HHV-7 in vitro could affect immunefunction of lymphocytes by disturbing cytokine production and CD antigen expression.Cellular & MolecularImmunology.2004;1(5):367-372.     

人白细胞介素（IL）-28和1L-29基因的克隆与序列分析

人IL-28A、IL-28B和IL-29是由外周血单个核细胞（PMBC）和树突状细胞（DC）等产生的细胞因子，组成一个新的细胞因子家庭。其基因结构与IL-10相近似，但氨基酸水平与干扰素（IFN）更接近，故Kotenko等也将它们相应地称为IFN-λ1（IL-29）、IFN-λ2（IL-28A）和IFN-λ3（IL-28B）。其基因均位于人19号染色体（19q13.13)。IL-29与IL-28氨基     

肝癌病人血清中庚型肝炎病毒非结构基因（NS）5区cDN …

通过逆转录－套式－聚合酶链反应，从２例肝癌患者血清中扩增出长９９４ｂｐ的庚型肝炎病毒（ＨＧＦ）ｃＤＮＡ序列，聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物纯化后以双脱氧末端终止法从双向直接测定其序列。结果，所分离的２株ＨＧＶ ＮＳ５区９９４ｂｐ核苷酸与国外已发表的３株ＨＧＶ序列比较，同源性为８７．２１％￣９３．６７％；２株间的同源性为９３．９２％。根据所测得的ｃＤＮＡ序列推导出其编码的３１３氨基酸序列，在氨基酸水平上