慢性复合应激对大鼠皮质酮、血清代谢产物、免疫反应的影响及五味子的干预作用

目的探讨五味子对慢性复合应激大鼠皮质酮、血糖、甘油三酯、胆固醇水平及免疫反应的影响。方法选取SD大鼠,随机分为安静对照组、应激对照组和五味子组,实验结束后测定血清皮质酮(CORT)、血糖(BG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、白介素-1(IL-1)、白介素-2(IL-2)及白介素-6(IL-6)水平,同时采用免疫组化方法检测大鼠垂体神经肽Y(NPY)细胞,电子显微镜观察垂体超微结构的变化。结果五味子可显著降低实验大鼠CORT水平及血糖水平,且能升高TG、TC水平;对应激大鼠免疫系统影响表现为IL-1、IL-2水平显著降低,IL-6水平变化不明显。结论五味子可降低应激大鼠血清皮质酮和血糖,改善应激所致的代谢紊乱。     

皮质酮损伤大鼠海马神经细胞病理模型的建立及补肾方药的作用

目的:以高浓度皮质酮(Corticosterone,CORT)损伤细胞制作原代培养的海马病理细胞模型,观察左归丸、右归丸对模型细胞的作用。方法:以新生SD乳鼠海马组织为材料,原代培养大鼠海马神经细胞;采用10-4mol/LCORT损伤细胞制作海马病理细胞模型,并用RU38486拮抗皮质酮的损伤作用。采用四甲基氮唑兰(MTT)法测定培养细胞的活性,RT-PCR法检测培养细胞皮质酮受体(GR)mRNA的表达变化,以及观察左归丸、右归丸对模型细胞上述各项指标变化的影响。结果:细胞的培养液中CORT浓度为10-4mol/L时,海马神经的细胞活性和GRmRNA表达均下降;左归丸、右归丸可以增强细胞活性和上调GRmRNA的表达。结论:浓度为10-4mol/L的CORT可以损伤细胞,制作原代培养的海马病理细胞模型;左归丸、右归丸对模型细胞的各项指标变化有明显的改善作用。     

基于细胞代谢组学的柴胡皂苷b2对皮质酮诱导PC12细胞损伤的保护作用研究

目的 研究柴胡皂苷b2(SSb2)对皮质酮(CORT)诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制。方法 (1)将细胞分为细胞对照组(RPMI-1640培养基培养24 h),CORT(100～800μmol·L^-1孵育24 h)组和SSb2(1.5625,3.125,6.25,12.5,25,50和100μmol·L^-1孵育24 h)组,MTT法检测细胞存活率。(2)将细胞分为细胞对照组(RPMI-1640培养基培养24 h),模型组(CORT 400μmol·L^-1孵育24 h)和模型+SSb2组(SSb2 1.5625,3.125,6.25,12.5和25μmol·L^-1预处理3 h,去上清,然后加入CORT 400μmol·L^-1及对应浓度SSb2共孵育24 h)。MTT法检测细胞存活率,微板法检测PC12细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率。(3)将细胞分为细胞对照组、模型组和模型+SSb2 12.5μmol·L^-1组,采用AnnexinV-FITC/PI流式...     

甘草黄酮对运动训练大鼠睾酮、 皮质酮及血脂代谢的影响

摘要:目的　研究运动前补充甘草黄酮对力竭运动大鼠血清睾酮、皮质酮、FFA含量及血脂代谢的影响。方法　通过建立灌服甘草黄酮大鼠的力竭游泳运动模型,测定大鼠血清睾酮、皮质酮、TC、TG、LDL- C、HDL- C 和FFA的含量。结果　血清睾酮水平在力竭游泳运动后低于安静对照组,补充甘草黄酮组大鼠血清睾酮水平低于安静对照组而高于运动对照组（P＜0.05）。而血清皮质酮水平在力竭游泳运动后有所上升,补充甘草黄酮组大鼠血清皮质酮水平高于安静对照组（P＞0.05）而低于运动对照组（P＜0.05或P＜0. 01）;各组间血清睾酮与皮质酮比值变化与睾酮变化程度相一致。力竭游泳运动后大鼠血清TC,TG,FFA 和 LDL-C含量都有所升高,而HDL- C含量有所下降;通过补充不同剂量的甘草黄酮后,能够降低大鼠血清TC,TG和LDL-C的含量,FFA和HDL- C的含量有所升高。结论　在大强度运动中通过灌注甘草黄酮可以降低大鼠的血睾酮和皮质酮水平,改善大鼠的血脂水平和肌内脂肪氧化,提高运动能力。     

慢性疲劳发生过程中小鼠血清皮质酮的动态变化

目的通过观察小鼠血清皮质酮（corticosterone,CorT）的动态变化,探讨在亚健康状态中慢性疲劳的发生发展机制。方法昆明小鼠120只,完全随机分为10组,分别为：正常对照0、4、9、16、23d组和模型：0、4、9、16、23d组,每组12只。正常组小鼠自由饮食,模型各组小鼠置于水深为0.5cm的塑料盒内18h/d。负7%体重力竭游泳以检测疲劳程度,放射免疫法检测血清CorT含量。结果正常组小鼠在实验过程中体重有上升的趋势但差异无统计学意义（P〉0.05）;游泳时间逐渐下降,从第9天起差异有统计学意义（P〈0.05）;皮质醇无明显变化（P〉0.05）。模型组小鼠随着造模时间的延长体重显著减轻（P〈0.01）;力竭游泳时间显著下降,第4天起差异有统计学意义（P〈0.01）;血清CorT第4天开始升高,第16天达分泌高峰（P〈0.01）,随后逐渐下降,但各时间点与正常对照组比较仍显著升高（P〈0.05）。结论随着小鼠疲劳的加重,血清CorT呈现出先升高后降低的动态变化,提示肾上腺皮质代偿性功能亢进后有功能衰退的趋势,可能是慢性疲劳发生发展及转归机制之一。     

不同证候小鼠肾上腺皮质激素与细胞因子表达的关系

目的 研究细胞因子在不同证候小鼠肾上腺中的表达及其与血清皮质激素的关系。方法 采用实验小鼠及其标准化四诊及辨证方法,对60只正常小鼠与190只H22肝癌荷瘤小鼠予以辨证分型,用ELISA方法检测血清皮质酮、醛固酮含量,以及实时荧光定量PCR技术检测肾上腺细胞因子表达。结果 获得正常无证、正常气盛证、正常气虚证小鼠,以及邪毒壅盛证、邪毒居中证、邪毒微弱证、邪毒气虚证荷瘤小鼠。荷瘤小鼠血清皮质激素显著高于正常小鼠（P<0.05),荷瘤小鼠4个证候组间,以邪毒壅盛证升高最显著（P<0.05)。相对于正常小鼠而言,白细胞介素（IL)-1β、IL-2、IL-6、IL-10、IL-12α、IL-12β和肿瘤坏死因子-α（TNF-α)等细胞因子在荷瘤小鼠不同证候中表达升高,仅IL-1α和IL-5在荷瘤小鼠中表达下降,而IL-13和转化生长因子-β1（TGF-β1)表达呈无规律性。其中IL-4与干扰素-α（INF-α)在正常与荷瘤小鼠肾上腺中均未检测到其表达。值得注意的是,邪毒程度越严重者,皮质酮与醛固酮水平及IL-6表达越高,而IL-1β、IL-2、IL-5、IL-12α、IL-12β、TNF-α表达越低。结论荷瘤小鼠血清皮质激素水平升高可能是在肿瘤慢性应激诱导下,部分细胞因子参与肾上腺皮质激素的合成与分泌,其中IL-6可能正向调控邪毒证荷瘤小鼠皮质激素分泌,而IL-1β、IL-2、IL-5、IL-12α、IL-12β、TNF-α则可能起到负性调控作用。     

早期丰富环境对大鼠远期行为发育及血清皮质酮的影响

目的：探讨早期丰富环境对大鼠行为发育及血清皮质酮的影响。方法：将45只新生大鼠随机分为丰富环境组、空白对照组和隔离环境组,于大鼠生后31 d分别采用开场实验、Lat迷宫测验评价大鼠焦虑、烦躁等行为;采用放射免疫学方法测定大鼠血清皮质酮水平。结果：丰富环境组血清皮质酮水平（8±3 ng/mL）较空白对照组（11±4 ng/mL）及隔离环境组（22±4 ng/mL）明显降低,差异有统计学意义（P<0.01）。开场实验结果显示,丰富环境组大鼠穿越格子数、直立次数、理毛次数明显少于空白对照组及隔离环境组大鼠（P<0.05）。Lat迷宫试验结果显示,丰富环境组大鼠穿越角落数、直立次数、斜搭在墙上的频率明显少于空白对照组与隔离环境组大鼠（P<0.05）。结论：早期丰富环境使大鼠能保持较低的皮质酮水平,减缓焦虑、烦躁等行为,对促进脑发育有重要意义。     

表食子儿茶素没食子酸酯对皮质酮损伤神经细胞的保护效应及其作用机制

目的：研究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对皮质酮损伤神经细胞的作用及对细胞内PI3K/Akt信号的影响。方法：用MTT法检测细胞损伤程度,构建皮质酮（CORT）应激损伤细胞模型;倒置显微镜下观察细胞形态变化;Hochest染色观察细胞凋亡情况;免疫印迹方法检测细胞p-Akt、Akt蛋白表达变化。结果：与正常对照组相比,模型组细胞存活率明显降低,细胞形态改变,突触收缩,凋亡增加,Akt磷酸化降低;当给予EGCG后,细胞存活率提高,细胞形态有所恢复,细胞凋亡减少,Akt磷酸化水平升高;先给予PI3K/Akt阻断剂后,EGCG对细胞存活率的升高作用和对细胞形态的缓解作用均被抑制。结论：EGCG能缓解CORT对PC12细胞的损伤作用,而PI3K/Akt信号在EGCG神经保护效应中具有重要作用。     

早期环境对大鼠情绪及运动协调能力的影响

目的 通过研究早期环境对发育期大鼠远期行为的影响,探讨下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴在早期环境影响动物情绪、运动行为发育的作用.方法 新生大鼠45只随机分为丰富环境(EE)组、隔离环境(IE)组及普通环境(NE)组,每组15只.EE组处于丰富化环境饲养,IE组大鼠为单调环境下成长,NE组大鼠常规饲养.大鼠于出生28 d(P28)采用直线行走测试运动协调能力;于P29采用触动实验评价大鼠情绪行为,采用放射免疫学方法测定血清皮质酮.采用HE染色法检查脑神经元形态学.结果 直线行走结果显示,大鼠运动协调能力:EE组＞NE组＞IE组(F =49.30,P＜0.000);触动实验结果显示,EE组大鼠紧张性刺激、触痛刺激评分(1.14±0.36,1.93±0.83) ＜NE组(1.47±0.64,2.60±0.91) ＜IE组(2.07±0.73,3.43±0.65)(P均＜0.01);基础血清皮质酮水平:EE组(32.56±9.05) μg/L＞NE组(24.96±6.19) μg/L＞IE组(15.53±6.78) μg/L (F=19.71,P＜0.000);小剂量促皮质素(ACTH)激发试验后大鼠血清皮质酮水平:EE组(18.24±5.53) μg/L ＜NE组(21.71±6.05) μg/L ＜IE组(28.09±6.51) μg/L (F=10.25,P＜0.000).HE染色结果显示,纹状体、杏仁核区神经元数量分别为:EE组[(72.80±6.81)个/HP,(73.53±6.14)个/HP] ＞NE组[(65.67±8.98)个/HP,(61.47±6.57)个/HP]＞IE组[(53.33±6.84)个/HP,(48.13±6.53)个/HP](P均＜0.001).结论 早期环境可通过影响HPA轴功能而影响未成熟期大鼠情绪反应、运动行为及脑发育.隔离环境下成长的大鼠HPA轴功能失调,神经细胞受损,情绪、运动协调障碍;而早期丰富环境能缓冲大鼠在应激状态下HPA轴的过度活动,促进脑发育及改善远期行为.     

哈蟆油石油醚提取物的抗抑郁作用及其机制

目的 研究哈蟆油石油醚提取物（PERO）对慢性温和应激抑郁模型大鼠的抗抑郁作用及其作用机制。方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、盐酸氟西汀（10 mg/kg）阳性对照组和PERO各剂量（30、100、300 mg/kg）组,每天给药1次,连续给药21 d。PERO和模型组末次给药后1 h、盐酸氟西汀于末次给药后0.5 h,每天进行慢性应激刺激,制备抑郁模型,连续21 d。观察大鼠体质量变化;采用旷场实验和蔗糖偏好实验检测大鼠行为学变化;酶联免疫吸附（ELISA）法测定大鼠血清皮质酮的水平;Western blotting法检测大鼠海马中脑源性神经营养因子（BDNF）蛋白的表达。结果 与对照组相比,模型组大鼠的体质量、蔗糖偏爱度下降,在旷场实验中的运动距离明显减小,血清中皮质酮水平显著升高,海马中BDNF蛋白表达显著下降。与模型组相比,PERO各剂量组均能不同程度地改善抑郁大鼠体质量的下降,增加蔗糖偏爱度和在旷场实验中的运动距离,降低大鼠血清皮质酮的水平,增加大鼠海马中BDNF的蛋白表达。结论 PERO具有明显的抗抑郁作用,其机制可能与调节下丘脑-垂体-肾上腺轴功能和提高BDNF蛋白的表达有关。