敲减cGAS基因对人食管鳞癌细胞TE-1增殖、迁移和凋亡的影响

［摘要］目的: 探究环鸟苷酸腺苷酸合成酶（cyclic guanosine monophosphate adenosine monophosphate synthase,cGAS）蛋白在食管鳞癌组织中的表达及其对人食管鳞癌TE-1细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法: 免疫组化分析60例食管鳞癌患者癌组织与癌旁组织中cGAS的表达。荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测正常食管上皮细胞与食管鳞癌细胞中cGAS的表达。使用慢病毒构建稳定敲减cGAS的细胞系（TE-1）,荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证敲减效率。CCK8和克隆形成实验检测cGAS敲减后TE-1细胞的增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测细胞的迁移能力,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果： 免疫组化结果显示cGAS在食管鳞癌组织中的表达明显高于癌旁组织;食管鳞癌细胞系TE-1、KYSE 150中cGAS的mRNA和蛋白表达明显高于食管正常上皮细胞Het 1A。荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测结果显示,敲减cGAS后,TE-1细胞cGAS mRNA和蛋白水平的表达明显降低。CCK8、克隆形成实验、划痕实验和Transwell实验表明,敲减cGAS抑制食管鳞癌TE 1细胞增殖、迁移的能力,流式细胞分析显示敲减cGAS促进TE-1细胞凋亡。结论： 敲减cGAS在食管鳞癌细胞增殖、迁移中发挥抑制作用,有效促进细胞凋亡。     

肝硬变时心钠素与环鸟苷酸联合检测的临床意义

对30例肝硬变患血浆心钠素(ANP)和环鸟苷酸(CGMP)进行联合检测，结果表明：肝硬变组血浆ANP和CGMP承平均高于健康人，以失代偿性肝硬变增高显，且随着肝功能损害的加重，腹水的增多而增高，两呈明显正相关(r=0．7055，P<0．001)并对ANP和CGMP增高的机制进行了探讨，提出该两项相标联合检测有可能对肝硬变的早期诊断和预后估计具有重要的意义。     

五味子和刺五加对老年大鼠心肌环核苷酸系统的影响

用五味子和刺五加分别喂养老年大鼠2个月,五味子显著提高心肌cAMP 含量、cAMP/cGMP比值和腺苷酸环化酶(AC)肾上腺素激活活性较基础活性的 提高率,降低cAMP磷酸二酯酶活性;刺五加显著提高钙调素含量、AC肾上腺素激 活活性及其较基础活性的提高率。提示五味子和刺五加通过环核苷酸系统途径改善 心脏功能。     

cGAS促进HTLV-1反转中间体ssDNA90诱导的固有免疫应答北大核心CSCD

目的探讨DNA识别受体环鸟苷酸-腺苷酸合成酶（cGAS）在成人T淋巴细胞白血病病毒1型（HTLV-1）的反转中间体诱导的固有免疫信号通路中的调控功能。方法将HTLV-1的反转中间体ssDNA90转染入HeLa细胞,采用免疫印迹试验检测cGAS在HeLa细胞中的表达变化;将cGAS表达质粒,转染入HeLa细胞,24 h后再转染入ssDNA90,real-time PCR试验检测HeLa细胞中干扰素（IFN）-β、干扰素诱导蛋白10（IP-10）、调节活化正常T细胞表达和趋化因子（RANTES）和肿瘤坏死因子（TNF）-α的表达,免疫印迹试验检测HeLa细胞中干扰素调节因子3（IRF3）和p65的磷酸化水平;采用siRNA的方法在HeLa和佛波酯（phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA）诱导分化的THP1（PMA-THP1）细胞中沉默cGAS的表达,24 h后再转染入ssDNA90,real-time PCR试验检测HeLa和PMA-THP1细胞中IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达,免疫印迹试验检测HeLa和PMA-THP1细胞中IRF3和p65的磷酸化水平。结果ssDNA90转染后,HeLa细胞中cGAS的表达升高;转染有cGAS表达质粒的HeLa细胞与对照组细胞相比,在ssDNA90刺激后,IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达量增加,IRF3和p65的磷酸化水平升高;沉默cGAS表达的HeLa和PMA-THP1细胞与对照组细胞相比,在ssDNA90刺激后,IFN-β、IP-10、RANTES和TNF-α的表达量降低,IRF3和p65的磷酸化水平下降。结论cGAS在HTLV-1的反转中间体ssDNA90诱导的固有免疫应答中可能具有促进功能。     

选择性阻断环鸟苷酸依赖性蛋白激酶Ⅰ对盲肠结扎穿孔致脓毒症大鼠血管环收缩功能的影响

目的探讨选择性阻断环鸟苷酸依赖性蛋白激酶Ⅰ(PKG-Ⅰ)对脓毒性休克大鼠血管低反应性的影响。方法将雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(SHAM组)、模型组(CLP组)、一氧化氮合成酶抑制剂组(L-NAME组)和PKG-Ⅰ特异性抑制剂组(DT-2组),每组20只。采用盲肠结扎穿孔法建立脓毒症模型,每组分别于造模后2、4、6h各取5只大鼠,分离胸主动脉制成血管环,L-NAME组和DT-2组血管在检测前分别与L-NAME或DT-2孵育30min。观测血管环对苯肾上腺素(PE)的浓度梯度效应曲线、最大收缩力(Emax)及产生Emax的半数有效浓度(EC50)。于造模后4h,每组各另取5只大鼠分离胸主动脉,采用光谱法定量检测其PKG-Ⅰ活性。结果造模后2、4、6h,CLP组的血管环收缩功能均显著低于SHAM组和L-NAME组(P值分别<0.05、0.01);造模后6h,L-NAME组显著低于SHAM组(P<0.05);造模后4h,DT-2组显著高于CLP组(P<0.05)。与SHAM组比较,CLP组造模后2、4、6h的Emax值均显著降低,但EC50值均显著升高(P值分别<0.05、0.01)。与CLP组比较,L-NAME组造模后2、4、6h的Emax值均显著升高,EC50均显著降低(P值分别<0.05、0.01)。DT-2组造模后4h的Emax值较CLP组显著升高,EC50显著降低(P值分别<0.05、0.01)。造模后4h,CLP组的PKG-Ⅰ活性值(0.905)较SHAM组(0.640)显著升高(P<0.01),L-NAME组及DT-2组的PKG-Ⅰ活性值(0.672、0.724)均较CLP组显著降低(P值均<0.05)。结论选择性阻断PKG-Ⅰ可部分恢复脓毒症大鼠血管环低反应性。     

从中西医学特点探讨中西医结合途径

从中西医学特点探讨中西医结合途径李华中医学和西医学是在不同的历史条件下，运用不同的思维形式和观察研究方法发展起来的两种理论体系。但提高临床疗效，阐明生命活动本质，为人民健康服务是中、西医的共同特点，也是中、西医学结合的基础。回顾两者的发展史，使我们更...     

cGAS-cGAMP-STING信号通路的功能及研究进展

cGAS-cGAMP-STING信号通路是固有免疫系统重要组成部分,通过识别胞浆DNA诱导I型干扰素(interferons,IFNs)和其他细胞因子产生,介导抗微生物先天免疫,同时也在肿瘤进展及远处转移中发挥作用。深入了解cGAS-cGAMP-STING信号通路与炎症性疾病、自身免疫性疾病及肿瘤发生发展的关系,以及S...     

肝硬变患者心钠素与环鸟苷酸联合检测30例

目的：对肝硬变的早期诊断及预后估计，寻找一种理想的检测方法。方法：用放射免疫法测定３０例肝硬变患者血浆心钠素（ＡＮＰ）和环鸟苷酸（ｃＧＭＰ）。结果：肝硬变组血浆ＡＮＰ和ｃＧＭＰ水平均高于健康人（Ｐ＜０．０１），以失代偿性肝硬变增高显著，并随肝功能损害的严重程度及腹水的增多而增高。结论：两项指标联合检测对肝硬变的早期诊断及预后估计具有重要意义。     

硝普钠与异丙肾上腺素松弛犬气管平滑肌的协同作用

目的：研究硝普钠（ＳＮＰ）与异丙肾上腺素（ＩＳＯ）对犬气管平滑肌松弛作用是否存在协同关系，并分析协同的机制。方法：采用放射免疫分析法测定犬气管平滑肌环核苷酸量，并用磷酸二酯酶（ＰＤＥ）同工酶抑制剂为工具分析ＳＮＰ与ＩＳＯ相互作用的机制。结果：ＳＮＰ（１～１００μｍｏｌ·Ｌ－１）增强ＩＳＯ（３０μｍｏｌ·Ｌ－１）对３μｍｏｌ·Ｌ－１乙酰甲胆碱预收缩的犬气管平滑肌的松弛作用。ＳＮＰ（１００μｍｏｌ·Ｌ－１）与ＩＳＯ（３０μｍｏｌ·Ｌ－１）对犬气管平滑肌松弛的协同作用伴有气管平滑肌中ｃＡＭＰ积聚比ＳＮＰ与ＩＳＯ单独时分别增加１．２倍与０．４倍。ＰＤＥⅤ抑制剂扎普司特（３μｍｏｌ·Ｌ－１）使ＳＮＰ的气管平滑肌ｃＧＭＰ积聚由２．４倍增加到４．６倍，可进一步增加气管松弛作用１．２倍。合并ＰＤＥⅢ抑制剂氰胍哒嗪（３０μｍｏｌ·Ｌ－１）和ＰＤＥⅣ抑制剂咯利普兰（３０μｍｏｌ·Ｌ－１）或合并ＳＮＰ（１００μｍｏｌ·Ｌ－１）和咯利普兰（３０μｍｏｌ·Ｌ－１）均能进一步增强ＩＳＯ的气管ｃＡＭＰ积聚与松弛作用。结论：ＳＮＰ是通过气管平滑肌ｃＧＭＰ含量增加而抑制ＰＤＥⅢ，导致ＳＮＰ与ＩＳＯ对气管松弛的协同作用。     

N—甲基—D—天门冬氨酸拮抗酒精致鼠小脑颗粒细胞毒性作用的研究

目的 探讨N－甲基－D－天门冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA)对鼠小脑颗粒细胞（CGC）存活的影响。方法 通过光学显微镜观察NMDA，一氧化氮酶抑制剂N^G－硝基－L－精氨酸（N^G-nitro-L-arginine methyl ester,NAME)以及可溶性鸟苷酰环化酶抑制剂6－Anilinoquinoline-5,8-quinolinedione(LY83583)对鼠小脑颗粒细胞存活的影响。结果 NMDA能在无酒精的环境下促进细胞的生存，并能对CGC产生保护作用，减少酒精对细胞的杀死，但NAME及LY83583去能抑制NMDA的作用。结论 NMDA通过一氧化氮－环鸟苷酸通路（NO－cGMPpathway)促进鼠小脑颗粒细胞的存活并抵抗酒精的中枢神经毒性作用。