siRNA沉默YKL-40对支气管哮喘小鼠气道平滑肌增殖及迁移的影响

目的探讨小干扰核糖核酸（siRNA）沉默人软骨糖蛋白39（YKL-40）对支气管哮喘小鼠气道平滑肌增殖及迁移的影响。方法20 只健康雌性BALB/c 小鼠随机分为健康组（ n=10）和哮喘组（n =10）,采取腹腔注射抗原和雾化吸入卵蛋的方式复制哮喘模型,健康组小鼠处理与哮喘组相同,只是将致敏物换成生理盐水,留取气管和支气管进行细胞培养,两组小鼠气道壁平滑肌细胞根据转染物不同分为siRNA-YKL-40 组、阴性对照组和空白对照组,MTT法检测不同转染组小鼠气道壁平滑肌细胞增殖情况,Transwell 法检测不同转染组 小鼠气道壁平滑肌细胞迁移能力,实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测不同转染组小鼠气道壁平滑肌细胞中YKL-40、白细胞介素4（IL-4）和干扰素-γ（IFN-γ）基因和蛋白表达。结果哮喘组中siRNA-YKL-40组48～96h时细胞吸光度A值均低于阴性对照组和空白对照组,哮喘组中siRNA-YKL-40 组、阴性对照组和空白对照组48～96 h 时细胞吸光度A 值均高于健康组,差异有统计学意义（p <0.05）;哮喘组中siRNA-YKL-40 组迁移细胞数（86.38±8.61）个,低于阴性对照组和空白对照组,哮喘组迁移细胞数均高于健康组,差异有统计学意义（p<0.05）;哮喘组和健康组中siRNA-YKL-40 组-40 基因和蛋白相对表达量均低于阴性对照组和空白对照组（ p<0.05）,哮喘组中siRNA-YKL-40 组-4 基因和蛋白相对表达量均低于阴性对照组和空白对照组,而-γ基因和蛋白相对表达量与IFN-γ/IL-4均高于阴性对照组和空白对照组（p <0.05）,与健康组比较,哮喘组中siRNA-YKL-40 组、阴性对照组和空白对照组-4 基因和蛋白相对表达量均升高,而- 基因和蛋白相对表达量和IFN-γ/IL-4均降低,差异有统计学意义（p <0.05）。结论靶向-40 基因沉默能抑制气道壁平滑肌细胞增殖及迁移,可能与调节IL-4/IFN-γ失衡状态而减少气道炎症反应有关。     

SIRT1激动剂通过降低ACAT1表达抑制平滑肌泡沫细胞形成

目的 探讨沉默信息调节因子1 (silent mating type information regulation 2 homolog-1,SIRT1)对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的血管平滑肌细胞(vascularsmooth muscle cell,VSMC)泡沫化的作用和相关的分子机制.方法 用组织贴块法体外培养原代VSMC,用80μg/mL ox-LDL刺激VSMC诱导泡沫细胞形成.检测SIRT1在ox-LDL刺激不同时间(24、48、72 h)的表达变化.SIRT1的活性调控分别应用SIRT1激动剂(SRT1720,SRT,1μmol/L)和抑制剂(nicotinamide,Nic,100 μmoL/L)进行干预.干预24 h后采用Western blot检测VSMC过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)、酰基辅酶A:胆固醇酰基转移酶1(A-cholesterol acyhransferase 1,ACAT1)的蛋白表达,干预48 h后采用油红O染色检测细胞内脂质沉积和泡沫细胞形成情况.应用PPARγ激动剂(Rosiglitazone,RSG,50 μmol/L)和抑制剂(GW9662,10 μmol/L)调控PPARγ的表达,Western blot检测VSMC中ACAT1的表达.结果 ①ox-LDL诱导的VSMC泡沫细胞中,SIRT1蛋白表达在48 h降低约47％ (P ＜0.01);油红O染色显示,SRT可以抑制VSMC泡沫细胞形成,而Nic可逆转SRT的抑制作用;②ox-LDL诱导的VSMC泡沫细胞中ACAT1的表达显著增加[(2.77±0.70),P＜0.01],SIRT1激动剂SRT可显著抑制ACAT1的表达[(0.90±0.27),P＜0.01],而SIRT1抑制剂Nic可阻断这一作用,升高ACAT1的表达[(2.25±0.37),P＜0.05];③ox-LDL诱导的VSMC泡沫细胞中PPARγ的表达减少[(0.73±0.12),P＜0.05],SIRT1激动剂SRT可上调VSMC中PPARγ的表达[(0.98±0.16),P＜0.05],SIRT1抑制剂Nic抑制PPARγ的表达[(0.47 ±0.13),P＜0.01];④PPARγγ激动剂RSG可抑制ACAT1的表达[(0.73±0.09),P＜0.01],而PPARγ抑制剂GW9662则上调ACAT1表达[(1.68±0.09),P＜0.01].结论 SIRT1通过上调VSMC中PPARγ表达而抑制ACAT1表达,从而抑制ox-LDL诱导的VSMC泡沫样变.     

RNAi沉默STAT3基因对人前列腺癌PC3细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 探讨pSilencer1．0-U6-siRNA-STAT3重组质粒对人前列腺癌细胞PC3裸鼠移植瘤生长的抑制作用。方法 采用裸鼠前列腺癌模型模拟siRNA—STAT3基因治疗实验，观察siRNA—STAT3重组质粒的抗瘤疗效，Western blot法检测重组质粒对STAT3基因表达的影响，HE及Tunel染色方法观察肿瘤组织形态及细胞凋亡情况。结果 肿瘤接种后第49天重组质粒组肿瘤体积为（391±56）mm^3，盐水对照组为（1111±182）mm^3，空质粒对照组为（981±169）mm^3，与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．01）；重组质粒抑制瘤体内STAT3及pTyr-STAT3基因表达率分别为77％及68％，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。HE染色证实重组质粒组出现大片细胞核固缩、破碎等凋亡征象，Tunel染色显示癌组织出现大量细胞凋亡。结论 pSilencer1．0-U6-siRNA-STAT3重组质粒能明显抑制人前列腺癌细胞PC3裸鼠移植瘤的生长，具有良好的应用前景。     

PDE5基因siRNA对人阴茎海绵体平滑肌细胞cGMP的影响

目的:观察PDE5基因小干扰RNA(siRNA)对人阴茎海绵体平滑肌细胞环磷酸鸟苷(cGMP)的影响,为阴茎勃起功能障碍(ED)的基因治疗提供实验依据。方法:使用美国Amb ion公司提供的设计软件设计并合成人PDE5基因的siRNA序列,合成3对PDE5 siRNA和1对阴性对照siRNA,转染人阴茎海绵体平滑肌细胞,同时设定空白转染组为对照组。以酶联免疫法分别检测转染后不同时间(24、48、72、96 h)点海绵体平滑肌细胞内cGMP浓度变化,观察PDE5 siRNA对海绵体平滑肌细胞内cGMP的影响。结果:siRNA1、siRNA2和siRNA3转染后人阴茎海绵体平滑肌细胞cGMP水平显著高于阴性对照siRNA组和空白对照组(P<0.05),在转染后72 h最为显著,siRNA1、siRNA2、siRNA3、阴性对照siRNA和空白对照组cGMP测定值分别为:5.89±0.19、3.52±0.16、2.88±0.08、0.72±0.12、0.60±0.16 pmol/m l,siRNA1组明显高于siRNA2、siRNA3组(P<0.05)。结论:体外化学合成的PDE5 siRNA能有效地增加海绵体平滑肌细胞内cGMP的水平,不同序列siRNA增加cGMP水平的能力不同,为ED的基因治疗提供了新思路。     

沉默干扰素诱导跨膜蛋白3可抑制肝癌细胞HepG2增殖和侵袭

目的研究干扰素诱导跨膜蛋白3（IFITM3）在原发性肝癌中的异常表达,探讨沉默IFITM3表达对肝癌细胞系HepG2生
物学特征的影响。方法通过Western blot和免疫组织化学染色法检测60例肝癌组织及对应癌旁组织中IFITM3的表达情况及
相关性;构建IFITM3小干扰RNA片段（IFITM3 si-RNA）,采用脂质体介导转染肝癌细胞（HepG2细胞系）,同时设置无义序列组
和空白对照组,实时荧光定量PCR检测转染后IFITM3 mRNA的表达;CCK8（cell counting kit 8）检测转染后细胞增殖能力;
Western blot检测IFITM3在蛋白水平的表达;Transwell实验和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化。结果和癌旁组织相
比,IFITM3在肝癌组织中的明显高表达。与无义序列组和空白对照组比较,IFITM3 si-RNA转染组细胞IFITM3表达和细胞增
值率降低,穿膜细胞数也明显减少,差异均有统计学意义（P<0.05）。划痕实验也表明迁移能力降低。结论IFITM3在原发性肝
癌中高表达;IFITM3在肝癌细胞增殖和侵袭过程中发挥重要作用,有望成为原发性肝癌基因治疗的侯选靶点。
     

血清mir-34a和Sirt1水平与老年脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块稳定性的关系

目的 分析血清microRNA-34a（mir-34a）、沉默信息调节因子1（Sirt1）水平与老年脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块稳定性的关系。方法 选取2018年2月~2019年2月内江市第一人民医院收治的102例老年脑梗死患者作为脑梗死组,另选取同期入院体检的50例健康者作为对照组。均行颈动脉超声检查,分为斑块形成组及斑块未形成组（其中又分为不稳定斑块组和稳定斑块组）,并检测各组血清mir-34a、Sirt1水平。结果 脑梗死组血清mir-34a水平显著高于对照组,血清Sirt1水平显著低于对照组（P＜0.05）;斑块形成组血清mir-34a水平显著高于斑块未形成组,血清Sirt1水平显著低于斑块未形成组（P＜0.05）;血清mir-34a水平预测斑块形成的AUC值为0.913,敏感度及特异度为82.90%、85.70%;血清Sirt1水平预测斑块形成的AUC值为0.874,敏感度及特异度为71.40%、91.50%;不稳定斑块组血清mir-34a水平显著高于稳定斑块组,血清Sirt1水平显著低于稳定斑块组（P＜0.05）;血清mir-34a水平预测斑块稳定性的AUC值为0.767,敏感度及特异度为51.00%、90.90%;血清Sirt1水平预测斑块稳定性的AUC值为0.756,敏感度及特异度为57.60%、87.80%。结论 血清mir-34a、Sirt1水平异常与脑梗死患者颈动脉粥样硬化斑块形成及其稳定性密切相关,可将其作为脑梗死的预警指标。     

莓茶提取物对2型糖尿病大鼠糖脂代谢及肝脏SIRT1、AMPK、PGC-1α蛋白表达的影响

目的 探索莓茶提取物对2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus, T2DM）大鼠糖脂代谢及肝脏沉默信息调节因子1(silence information regulator 1, SIRT1)、AMP活化蛋白激酶（AMP activated protein kinase, AMPK）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助活化因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor-γ coactivator-1α, PGC-1α)蛋白表达的影响。方法 高脂高糖喂养联合链脲佐菌素（35 mg/kg）腹腔注射建立T2DM大鼠模型,建模成功后随机分为模型组、莓茶低剂量组（0.4 g/kg）、莓茶高剂量组（0.8 g/kg）,另设普通饲料喂养大鼠为正常组,每组8只。各组灌胃给药6周后,行口服葡萄糖耐量试验计算血糖-时间曲线下面积（area under the curve, AUC）,ELISA法检测空腹血胰岛素（fasting insulin, FINS）水平,计算稳态模型以评估胰岛素抵抗指数（homeostatic model asses...     

糖尿病肾病患者血清TRPM7、Sirtuin-1与钙磷代谢、颈动脉钙化的相关性

目的 探讨糖尿病肾病（DN）患者血清瞬时受体电位通道7(TRPM7)、沉默调节蛋白-1(Sirtuin-1)与钙磷代谢、颈动脉钙化的相关性。方法 选取2020年12月—2022年11月成都大学附属医院收治的97例DN患者作为DN组,另取同期在该院就诊的120例2型糖尿病患者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清TRPM7的表达,酶联免疫吸附试验检测血清Sirtuin-1水平。采用Pearson法分析DN患者血清TRPM7、Sirtuin-1水平与钙磷代谢的相关性,并通过多因素Logistic逐步回归模型分析DN患者颈动脉钙化的危险因素。结果 DN组血肌酐、尿素氮、血清TRPM7、血磷、颈动脉钙化率高于对照组（P <0.05）。DN组Sirtuin-1、血钙低于对照组（P <0.05）。Pearson相关性分析结果显示,DN患者血清TRPM7与血钙呈负相关（r=-0.247,P=0.000）,与血磷呈正相关（r=0.415,P=0.000）;DN患者血清Sirtuin-1与血钙呈正相关（r=0.367,P=0.000）,与血磷呈负相关（r=-0.505,P=0.00...     

shRNA SIRT3基因对乳腺癌细胞 MCF-7侵袭能力的影响及机制研究

目的：探讨shRNA SIRT3基因对乳腺癌细胞MCF-7侵袭能力的影响及机制。方法：以人乳腺癌细胞系MCF-7细胞为实验对象。按照处理方法将乳腺癌MCF-7细胞分成3组,即空白对照组(不转染慢病毒的乳腺癌MCF-7细胞组)、阴性对照组(乳腺癌MCF-7细胞转染无序序列慢病毒载体)和shRNA干扰组(乳腺癌MCF-7细胞转染shRNA SIRT3序列慢病毒载体)。采用实时荧光定量PCR和Western blotting等方法检测SIRT3和凋亡相关因子caspase-3、caspase-9的表达水平;采用Transwell试剂盒检测细胞的侵袭能力。结果：shRNA干扰组SIRT3 mRNA相对表达量均明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.01),caspase-3 mRNA、caspase-9 mRNA相对表达量均明显高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01)。Western-blotting检测结果显示,shRNA干扰组SIRT3蛋白相对表达量均明显低于阴性对照组和空白对照组,caspase-3、caspase-9蛋白相对表达量均明显高于阴性对照组和空白对照组(P<...     

熊果酸调控AMPK/SIRT1通路对牙周炎大鼠牙槽骨吸收的影响

目的:探讨熊果酸(UA)对牙周炎大鼠牙槽骨吸收及腺苷酸活化蛋白激酶/沉默信息调节因子1(AMPK/SIRT1)通路的影响。方法:将40只大鼠分为对照组、模型组、UA组(150 mg/kg)、UA+AMPK抑制剂组(150 mg/kg+0.2 mg/kg);模型组、UA组、UA+AMPK抑制剂组建立牙周炎大鼠模型,造模成功后各组给予相应处理。连续给药2周后,微计算机断层扫描技术检测大鼠牙槽骨釉牙骨质界至牙槽嵴顶的距离(CEJ-ABC)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、骨小梁数目(Tb.N);观察牙周组织病理变化;对大鼠牙周组织进行破骨细胞计数;检测大鼠牙周组织核因子κB受体活化因子配体(RANKL)、骨保护素(OPG)、AMPK、磷酸化AMPK(p-AMPK)、SIRT1、乙酰化NF-κB p65(Ac-NF-κB p65)、核因子κB p65(NF-κB p65)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠牙槽骨表面不平整,牙槽骨高度明显降低,有较多骨吸收陷窝,有大量炎性细胞浸润,牙周膜纤维排列紊乱,牙槽...