基于羧甲基壳聚糖的槲皮素纳米载药体系的制备和性能研究

目的 制备含锰二氧化硅载体,用其负载槲皮素并用羧甲基壳聚糖进行封堵,研究该纳米载药体系的结构和释药特征,拟合含锰二氧化硅纳米球(MMS)吸附槲皮素的热力学和动力学模型。方法 以表面活性剂为模板合成含锰二氧化硅载体,采用兰缪尔(Langmuir)、弗伦德利希(Freundlich)和乔姆金(Temkin)等温吸附模型对含锰二氧化硅纳米载体吸附槲皮素热力学数据进行模型拟合,采用准一级动力学、准二级动力学和颗粒内扩散模型对吸附动力学数据进行模型拟合。采用透析袋法评价纳米载药体系体外释放情况。结果 基于羧甲基壳聚糖的槲皮素纳米载药体系被成功制备,含锰二氧化硅载体对槲皮素的热力学和动力学吸附按照25℃>35℃>45℃的顺序减小,热力学拟合最佳模型是Freundlich等温吸附模型,动力学拟合最佳模型是准二级动力学模型。在pH6.5时,纳米载药体系在50 h内累计释放达92.53%,高于其他pH值(5.5,7.4)下的累计释放量,这种影响有利于治疗肿瘤。结论 含锰二氧化硅载体吸附槲皮素符合Freundlich等温吸附模型和准二级动力学模型。温度对载体吸附槲皮素有影响,且环境pH值影响纳...     

HPLC法同时测定裸花紫珠药材中3种黄酮类成分的含量

目的:建立同时测定裸花紫珠药材中芦丁、木犀草素和槲皮素含量的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Dikma Diamondsil C18(2)(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为0.8 ml/min,检测波长为257nm。结果:芦丁、木犀草素和槲皮素的进样量分别在65.28⁵87.52、9.28587.52、9.28⁸3.52、5.2283.52、5.22⁴6.94 ng范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系(r分别为0.999 9、0.999 7、0.999 9);三者精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2%;平均加样回收率分别为99.58%、99.31%和99.24%,RSD分别为1.46%、1.64%和1.41%(n均为6)。结论:该方法准确、精密度高、重复性好,可用于裸花紫珠药材中芦丁、木犀草素和槲皮素含量的同时测定。     

槲皮素调控关节炎软骨细胞胆固醇代谢的机制研究

探讨槲皮素对关节炎软骨细胞胆固醇代谢的影响及作用机制。方法 体外分离培养小鼠软骨细胞,分为对照组、模型组、低浓度组、高浓度组。CCK-8检测槲皮素对软骨细胞增殖的影响;胆固醇检测试剂盒检测细胞内总胆固醇（TC）水平;qRT-PCR检测骨关节炎软骨细胞中Cyp7b1、CH25H、RORα、Mmp3、Mmp13、Col2a1、Il-6的表达水平;Western blot检测软骨细胞中CYP7B1、CH25H、RORα、MMP3和MMP13的蛋白表达水平。结果 ①CCK-8结果显示浓度在10 μmol/L以下的槲皮素对软骨细胞没有毒性,而高浓度（25、50、100 μmol/L）的槲皮素会抑制软骨细胞增殖。②细胞内总胆固醇水平测定结果显示,使用槲皮素处理后的关节炎软骨细胞内总胆固醇水平较模型组低（P <0.05）。③qRT-PCR结果显示,槲皮素组中软骨细胞的Cyp7b1、CH25H、RORα、Mmp3、Mmp13、Il-6的表达水平较模型组降低,Col2a1的表达水平较模型组升高（P <0.05）。④Western blot结果显示药物干预组中CYP7B1、CH25H、RORα、MMP3、 MMP13的蛋白表达水平均比模型组降低（P <0.05）。结论 槲皮素可以通过CH25H/CYP7B1/RORα 信号通路调控关节炎软骨细胞中的胆固醇代谢,减轻关节炎软骨细胞中的炎症和细胞外基质降解。     

基于分子对接技术的藤茶总黄酮对高尿酸血症肾功能损伤保护机制研究

目的探讨藤茶总黄酮(total flavonoids from Ampelopsis grossedentata,AGTF)对高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)肾功能损伤的保护机制。方法利用分子对接技术,将藤茶总黄酮主要活性成分与HUA相关靶点蛋白尿酸重吸收转运体1(uric acid reabsorption transporter 1,URAT1)、葡萄糖转运蛋白9(glucose transporter 9,GLUT9)、三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2(adenosine triphosphate binding cassette transporter G2,ABCG2)、黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)和腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)进行分子对接。采用腺嘌呤联合乙胺丁醇复合方法制备HUA肾功能损伤大鼠模型,以AGTF进行干预,检测大鼠血清中尿酸代谢酶XOD和ADA活性、尿酸以及肾功能生化指标肌酐和尿素氮的水平;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏组织病理变化;Western blotting法检测大鼠肾组织中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)蛋白的表达;免疫组化法检测大鼠肾组织中URAT1、GLUT9和ABCG2蛋白的表达。结果分子对接结果表明,AGTF主要活性成分二氢杨梅素、杨梅素、槲皮素和藤茶素与疾病相关靶点对接得分均较高,提示AGTF可能通过干预URAT1、GLUT9、ABCG2、ADA和XOD发挥抗HUA肾功能损伤的作用。AGTF能显著降低HUA肾功能损伤模型大鼠血清中XOD和ADA的活性以及尿酸、肌酐、尿素氮的水平(P<0.05、0.01)。HE染色结果显示,AGTF能缓解模型大鼠肾小球基底膜增厚,减轻肾小管排列紊乱及坏死,抑制病变区域内纤维组织增生。Westernblotting和免疫组化结果显示,AGTF能显著降低大鼠肾组织中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、TGF-β蛋白和尿酸盐重吸收相关蛋白URAT1、GLUT9的表达(P<0.05、0.01),显著升高尿酸盐排泄相关蛋白ABCG2的表达(P<0.05、0.01)。结论 AGTF对HUA肾功能损伤大鼠具有较好的保护作用,其作用机制可能与降低TNF-α、IL-1β、IL-6和TGF-β表达,抑制炎症反应,并调节尿酸盐转运蛋白URAT1、GLUT9和ABCG2的表达,促进尿酸代谢有关,与分子对接预测结果一致。     

UPLC-TQ-MS同时测定金红片中12个成分

目的采用超高效液相色谱-电喷雾三重四极杆质谱(UPLC-TQ-MS)技术建立了同时快速测定金红片(Jinhong Tablets)中12个成分(莽草酸、绿原酸、异绿原酸B、异绿原酸C、普洛托品、别隐品碱、延胡索乙素、紫堇碱、巴马汀、槲皮素、异川楝素、川楝素)的定量分析方法。方法采用Acquity UPLC BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,体积流量为0.3mL/min;采用多反应监测模式同时对金红片中12个成分进行定量分析。结果在17 min内完成12个成分的准确定量;12个定量成分的线性范围分别为50.00～6 400.00μg/mL(r=0.999 1)、2.28～292.00μg/mL(r=0.999 9)、0.82～104.80μg/mL(r=0.999 8)、1.56～200.00μg/mL(r=0.999 7)、0.91～116.00μg/mL(r=0.999 0)、0.94～120.00μg/mL(r=0.999 0)、9.38～1 200.00μg/mL(r=0.997 4)、2.93～375.00μg/mL(r=0.999 0)、1.25～160.00μg/mL(r=0.999 9)、31.25～4 000.00μg/mL(r=0.999 7)、0.93～120.90μg/mL(r=0.999 8)、1.41～180.70μg/mL(r=0.999 7),平均加样回收率分别为101.9%、101.2%、97.9%、96.8%、100.8%、100.1%、108.7%、100.0%、99.2%、102.0%、99.0%、103.2%,15批金红片中12个成分的质量分数分别为10.11～22.72 mg/g、0.16～0.43 mg/g、0.06～0.23 mg/g、0.13～0.42 mg/g、0.08～0.26 mg/g、0.08～0.25 mg/g、1.94～2.59 mg/g、0.20～0.96 mg/g、0.07～0.30 mg/g、1.72～2.14mg/g、0.03～0.06mg/g、0.03～0.06mg/g。结论采用UPLC-TQ-MS所建立的多指标成分定量分析方法可适用于金红片中不同结构类型成分的同时检测,该方法简单、灵敏度高、专属性好,为金红片的整体质量控制研究提供参考和借鉴。     

槲皮素对小细胞肺癌细胞株H446的凋亡调控作用

目的初步探讨槲皮素对人小细胞肺癌细胞株凋亡的影响。方法以不同浓度槲皮素培养H446细胞24 h后,运用免疫荧光染色法检测细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况,同时采用流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果以0、15、30、60μmol/L浓度的槲皮素作用于细胞株24 h后,细胞凋亡率分别为(1.30±0.32)%(12.95±0.08)%,(16.8±0.19)%,(25.81±1.01)%,各组间均值具有显著性差异(P0.01),并且随着槲皮素浓度的增加,H446细胞凋亡率逐渐增加,两者呈正性相关。采用免疫荧光染色法检测发现,随着槲皮素作用浓度的增加,抗凋亡蛋白BCL-2的表达信号亦逐渐降低。结论槲皮素对人小细胞肺癌细胞株有促进凋亡的作用,其机制可能与抑制抗凋亡蛋白BCL-2的表达有关。     

槲皮素对紫外线照射诱导人精子氧化损伤的保护作用

目的:探讨槲皮素能否减轻紫外线照射诱导的人精子氧化损伤。方法:通过收集10例健康志愿者精液,密度梯度法离心分离精子,利用紫外线照射90 s诱导精子氧化损伤。实验组添加50μmol/L槲皮素培养,采用计算机辅助精液分析系统(CASA)检测精子活动力,吖啶橙(AO)试验检测DNA损伤,流式细胞术检测活性氧(ROS)以及TUNEL法检测精子凋亡。结果:CASA显示各组精子活动力没有明显改变,AO试验表明实验组精子DNA损伤减轻,流式细胞术结果显示实验组精子内ROS含量下降,同时凋亡也相应减少。结论:槲皮素通过降低ROS,减轻紫外线照射诱导的人精子氧化损伤,从而起到保护作用。     

槲皮素下调HSP27蛋白的表达诱导人胶质母细胞瘤T98G凋亡

目的：探讨天然药物槲皮素对人胶质母细胞瘤的生物效应及机制。方法：将人胶质母细胞瘤细胞系T98G用槲皮素治疗,采用MTT法检测治疗后T98G细胞的增殖抑制情况;通过流式细胞术检测槲皮素治疗后,T98G细胞的凋亡情况并用western blot方法检测细胞活化caspase-3 (cleaved caspase-3)的表达和热休克蛋白27(HSP27)的表达;将T98G细胞的HSP27基因用特异性HSP27 siRNA沉默后再用槲皮素治疗,检测槲皮素对T98G细胞的增殖抑制作用和凋亡诱导效应。结果：槲皮素显著抑制T98G细胞的增殖且呈剂量和时间依赖性;槲皮素可诱导T98G细胞的凋亡和caspase-3的活化;槲皮素治疗后,T98G细胞的HSP27表达显著下降,当用HSP27 siRNA转染T98G细胞后, 槲皮素对T98G细胞的凋亡诱导活性显著提高。结论： 槲皮素有良好的抗神经胶质母细胞瘤的生物活性,其抗肿瘤效应的机制可能和下调HSP27蛋白有关。     

枸骨中芦丁和槲皮素含量测定

目的：采用高效液相色谱法测定枸骨不同部位（嫩叶、老叶、枝、青果、红果）及不同采收期枸骨叶中芦丁和槲皮素的含量。方法采用C18色谱柱（250 mm ×4．6 mm ,5μm）,流动相为甲醇－0．5％磷酸水溶液（47∶53）,流速为0．7 ml／min ,检测波长为356 nm ,柱温25℃,测定枸骨中芦丁和槲皮素含量。结果芦丁和槲皮素线性范围分别为0．52～5．2μg和0．34～3．4μg,相关系数 r均为0．9999,平均回收率分别为98．6％和99．2％,RSD分别为1．70％和1．91％（n＝6）。结论枸骨不同部位及不同采收期枸骨叶中芦丁和槲皮素含量有明显差异。     

HPLC测定利胆消石颗粒中槲皮素和山奈素含量

目的：建立利胆消石颗粒中槲皮素和山奈素含量测定方法。方法：色谱柱：DIKMA-C18柱（4.6 mm ×250 mm;5μm）,流动相为甲醇-0.4%磷酸（45∶55）,流速为1.0 mL/min,检测波长为360 nm,柱温为30℃。结果：利胆消石颗粒中槲皮素和山奈素的线性范围分别为0.988～98.8μg/mL（r=0.9998）,0.979～97.9μg/mL（r=0.9997）,平均回收率为98.21%,98.18%,RSD值为0.71%,0.56%。结论：该方法简便,结果准确,可作为利胆消石颗粒的质量控制方法。