反相HPLC法测定肝立宁胶囊中总槲皮素含量的研究

目的:通过反相HPLC法测定"肝立宁"胶囊中槲皮素的含量,以建立"肝立宁"胶囊的质量控制方法(定量部分).方法:采用反相HPLC法测定"肝立宁"胶囊中槲皮素的含量.色谱柱:KROMASIL C18(4.6mmID×20cm,5u),流动相:甲醇-0.4%磷酸(60:40),流速:0.8ml/min,柱温:30℃,检测波长:360nm.结果:按选定的方法进行测定,测得三批"肝立宁"胶囊含量平均为0.35%,平均加样回收率为99.28%,RSD为2.91%.结论:该方法简单易行,准确灵敏,可用于"肝立宁"胶囊的质量控制,胶囊中槲皮素含量暂定为不得低于0.30%.     

槲皮素抑制血管生成作用的实验研究

目的　研究槲皮素 (Quercetin)对血管生成和培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)的影响。方法　采用生长因子 (血管内皮细胞生长因子VEGF、碱性成纤维细胞生长因子bFGF)诱导的鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)血管增生模型观察槲皮素对血管生成的影响 ;利用培养的HUVEC ,用MTT法观察槲皮素抑制内皮细胞增殖的作用 ;流式细胞仪观察槲皮素对HUVEC细胞周期的影响。结果　槲皮素 (0 1、0 0 5和 0 0 2 5mmol·L-1)能明显抑制VEGF诱导的CAM小血管生成 ;槲皮素 (0 1和 0 0 5mmol·L-1)能明显抑制bFGF诱导的CAM小血管生成 ;槲皮素 (2 4 0、12 0 μmol·L-1和 6 0 μmol·L-1)对内皮细胞增殖有抑制作用 ,抑制率分别为 6 7 0 %、5 8 1%和39 7% ;槲皮素 (2 4 0、12 0 μmol·L-1)能显著导致HUVEC的S、G2 期阻滞。结论　槲皮素能抑制VEGF和bFGF诱导的血管生成 ,且对内皮细胞增殖具有抑制作用。     

槲皮素壳聚糖膜对口腔溃疡及创面组织中超氧化物歧化酶和丙二醛含量的影响

背景:以天然可吸收的壳聚糖为膜载体,加入具有抗菌消炎、促进创面愈合的槲皮素制成复合膜,拟通过动物模型对该膜的药理作用进行初步观察。目的:观察槲皮素壳聚糖复合药膜对NaOH所致大鼠口腔溃疡的治疗作用。方法:采用NaOH烧灼法制备SD大鼠口腔溃疡模型80只,随机分为4组,空白对照组不采取任何处理措施,壳聚糖膜组在溃疡处贴壳聚糖膜,复合膜组在溃疡处贴槲皮素与壳聚糖复合药膜,冰硼散组在溃疡处喷洒冰硼散,2次/d,直至溃疡完全愈合为止。另外从上述实验动物中取SD大鼠10只,在大鼠背部脊柱两侧制作全层皮肤缺损模型,创面制作后次日,空白对照组不做任何处理,冰硼散组创面涂抹冰硼散液,壳聚糖组创面涂抹壳聚糖液,复合溶液组创面涂抹槲皮素壳聚糖液,2次/d,连续给药3d。结果与结论:复合膜组各时间点的溃疡面积均小于空白对照组(P<0.01),且给药后第2,4天的溃疡面积也小于冰硼散组(P<0.05)。在溃疡表面感染程度上复合膜组明显好于空白对照组(P<0.01),与冰硼散组之间差异无显著性意义。复合溶液组创面组织中超氧化物歧化酶活力明显高于空白对照组(P<0.01),而丙二醛含量低于空白对照组(P<0.01)。结果可见槲皮素壳聚糖复合药膜可促进溃疡面愈合,这可能与其提高创面组织中超氧化物歧化酶活性,降低丙二醛含量有关。     

Effects of Quercetin on Hedgehog Signaling in Chronic Myeloid Leukemia KBM7 Cells

Objective：To investigate the effects of quercetin on Hedgehog（Hh） signaling in chronic myeloid leukemia KBM7 cells.Methods：The KBM7 cells were treated with 50,100 and 200 μmol/L quercetin for48 h respectively.And then the trypan blue assay was used to examine the proliferative inhibition of quercetin.Apoptotic cells and cell cycle were measured by flow cytometry.The mRNA and protein expression were detected by quantitative real-time polymerase chain reaction（PCR） and Western blot,respectively.Results：Quercetin significantly inhibited KBM7 cell proliferation,induced cell apoptosis,and blocked cell cycle at G1 phase,which were in dose-dependent manners.The mRNA and protein expression of Smoothened and Gliomal（Gli1）,the members of Hh pathway decreased after treatment with quercetin.The Bcl-2 and Cyclin D1,targets of Hh signaling,also decreased after treatment with quercetin,respectively.Quercetin also could increase p53 and Caspase-3 expression.Bcr-abl mRNA copies decreased,but no changes of phosphorylated Bcr-abl and Bcr-abl proteins were observed,after treatment with quercetin.Conclusion：Quercetin could inhibit Hh signaling and its downstream targets in the KBM7 cells.And it might be one of mechanisms of inducing apoptosis and inhibiting cell cycle by quercetin.     

柴胡桂枝干姜汤治疗失眠的功效网络研究

目的运用网络药理学分析方法,明确柴胡桂枝干姜汤治疗失眠的作用机制。方法运用TCMSP、TCMID数据库锁定柴胡桂枝干姜汤7味药的药物靶标,TTD、DrugBank、PubMed数据库查找失眠的疾病靶点,构建"疾病-方剂-靶点"网络,用STRING和Cytoscape分析软件对其关键靶点进行富集分析,明确作用机制。结果柴胡桂枝干姜汤蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络包含靶标640个,失眠的PPI网络包括靶标175个,富集分析得29个关键靶标和其间80条互作关系;GO富集分析及KEGG途径分析结果显示柴胡桂枝干姜汤中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d、槲皮素、碳酸钙、6-姜辣醇、山柰酚、汉黄芩素等171个活性成分主要通过CACNA1C、GABRA1、GABRA2、GABRB3、GABRA3等29个关键靶标及突触信号传导、膜电位的调节、G蛋白偶联受体信号通路等生物过程,神经递质受体活性、离子门控通道活动、GABA-A受体活性等分子功能,质膜、突触等细胞组成作用于神经活性配体-受体相互作用、逆行内源性大麻素信号传导、5-羟色胺能突触等多条作用通路发挥治疗失眠作用。结论柴胡皂苷a、柴胡皂苷d等171个活性成分是柴胡桂枝干姜汤治疗失眠的药效物质基础,神经活性配体-受体相互作用等通路和CACNA1C等29个靶标构成了其发挥"疏肝健脾、调和阴阳"的功效作用网络,为临床合理运用柴胡桂枝干姜汤治疗失眠提供了网络药理学证据。     

反相高效液相色谱法测定大鼠血清和组织中的芦丁和槲皮素浓度

目的建立测定大鼠血清和肝、肾、小肠组织中芦丁和槲皮素的高效液相色谱法。方法采用ODS-SPC18色谱柱(4.6 mm×250 mm,粒径5μm),以乙腈(B)和0.5%磷酸缓冲液(A)为流动相梯度洗脱(25%B 0⁶min,25%6min,25%⁵0%B650%B6¹0min,50%B 1010min,50%B 10¹7min,50%17min,50%²5%B 1725%B 17²0min,25%B 2020min,25%B 20²5 min);流速1ml/min;柱温40℃,检测波长360 nm,测定大鼠血清和组织中芦丁和槲皮素含量。结果血清芦丁在0.0825 min);流速1ml/min;柱温40℃,检测波长360 nm,测定大鼠血清和组织中芦丁和槲皮素含量。结果血清芦丁在0.08²5 mg/ml,槲皮素在0.01625 mg/ml,槲皮素在0.016¹0 mg/ml范围内线性关系良好,相关系数为0.9999;芦丁和槲皮素的检测限分别为0.016μg/ml和0.004mg/ml;日内RSD分别小于7.4%和8.1%,日间RSD小于9.1%和9.0%。肝、肾、小肠组织中芦丁和槲皮素在0.0510 mg/ml范围内线性关系良好,相关系数为0.9999;芦丁和槲皮素的检测限分别为0.016μg/ml和0.004mg/ml;日内RSD分别小于7.4%和8.1%,日间RSD小于9.1%和9.0%。肝、肾、小肠组织中芦丁和槲皮素在0.05⁸mg/ml范围内线性关系良好,相关系数为0.9999,肝组织芦丁和槲皮素的检测限分别为0.012 mg/ml和0.004 mg/ml,日内RSD分别小于7.9%和8.9%,日间RSD分别小于8.9%和7.2%,肾脏组织和小肠的芦丁和槲皮素检测限均为0.02mg/ml;血清和肝脏、肾脏、小肠组织中芦丁和槲皮素的回收率均在72%以上。结论该方法灵敏度较高、重复性良好,操作简单、快速,可用于血清和组织中芦丁和槲皮素的分析测定。     

Quercetin对人气道平滑肌细胞增殖和迁移的影响及机制

目的 体外培养人气道平滑肌细胞(human airway smooth muscle cells,HASMCs),探讨槲皮素(Quercetin,Que)对血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)刺激的HASMCs增殖和迁移的影响及其机制.方法体外培养HASMCs,分为六组；对照组、PdGF-BB组、Que与PDGF-BB联合干预组、Que组、U0126组、U0126与PDGF-BB联合干预组.四甲基偶氮唑蓝(MTT)微量比色法测定HASMCs增殖,transwell法观察细胞迁移,Western blot法检测ERK的磷酸化及Cyclin D1表达水平.结果 与对照组相比,PDGF-BB(20μg/L)显著诱导HASMCs增殖和迁移(P＜0.05),Que(20～80μmol/L)呈浓度依赖性抑制PDGF-BB诱导的HASMCs的增殖和迁移(P＜0.05).PDGF-BB组ERK磷酸化及Cyclin D1 表达水平较对照组明显增高(P＜0.05).Que(80μmol/L)及PDGF-BB干预组其表达量低于PDGF-BB组,此抑制作用与ERK特异性拮抗剂U0126作用相当(P＞0.05).结论 Que抑制PDGF-BB诱导的HASMCs的增殖和迁移,可能是通过调节ERK/Cyelin D1通路起作用.     

黄蜀葵花中黄酮类成分的含量测定及HPLC指纹图谱研究

目的采用高效液相色谱法建立黄蜀葵花的HPLC指纹图谱,同时测定其中金丝桃苷、异槲皮苷、杨梅素和槲皮素的含量。方法以Diamonsil C18柱(200mm×4.6mm,5μm)为色谱柱,流动相为乙腈-4mL·L-1磷酸溶液,梯度洗脱,检测波长为360nm;采用指纹图谱相似度软件进行相似度评价。结果确定了黄蜀葵花的17个共有峰,建立了10批药材的共有图谱,并比较了样品中金丝桃苷、异槲皮苷、杨梅素和槲皮素的含量。结论该方法灵敏度高,重复性好,结果准确。指纹图谱信息结合有效成分含量测定,可较为全面地评价黄蜀葵花的质量。     

HPLC法同时测定杨梅叶中杨梅素等3种黄酮类化合物的含量

目的建立同时测定杨梅叶中杨梅素、槲皮素和山奈酚3种黄酮类化合物含量的反相高效液相色谱方法。方法采用Thermo Scientific ODS-2 Hypersil色谱柱(200mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-体积分数0.2%甲酸水溶液,梯度洗脱;柱温为40℃;流速为0.7mL·min-1;检测波长为360 nm。结果杨梅素、槲皮素和山奈酚的线性范围分别为15.0~150.0mg·L-1、1.50~15.0mg·L-1和1.0~10.0mg·L-1,r≥0.999 4;平均加样回收率分别为100.2%、94.9%和104.2%,RSD分别为1.3%、1.0%和1.7%(n=6)。应用该法测定了3批杨梅叶中3种黄酮类化合物的含量。结论该方法准确、可靠、重复性好,为杨梅叶中黄酮类活性成分的开发利用提供参考。