凋亡素原核表达载体的构建和表达

目的 构建凋亡素原核表达系统，以制备抗原物质凋亡素融合蛋白。方法 通过PCR方法，以pcDNA-VP3质粒为模板，扩增出凋亡素VP3基因。将其克隆到原核表达载体pET-DsbA的多克隆位点，构建成凋亡素的高效原核表达栽体pET-DsbA-VP3，将该质粒转化到大肠杆菌E．coliBL21(DE3)plysS中，以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galactoside，IPTG)对其进行诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳分析目的蛋白。结果 转化有凋亡素原核表达载体pET-DsbA-VP3的大肠杆菌E．coliBL21(DE3)plysS经IPTG诱导后，聚丙烯酰胺凝胶电泳出现38300的目的蛋白条带。结论 凋亡素原核表达栽体pET-DsbA-VP3能高效表达出凋亡素融合蛋白。     

微创TLIF术治疗腰椎间盘退行性疾病的进展

经椎间孔椎体问融合术(TLIF)是治疗腰椎退行性疾病的重要手段.2001年由Whitecloud等[1]报道以来,已引起许多脊柱外科医生的广泛关注.相比传统的腰椎后外侧融合术(PLF)和后路椎体间融合术(PLIF),TLIF具有术后疗效较好,并发症少,可早期恢复活动等特点.Lowe等[2]报告采用TLIF治疗腰椎退行性疾病40例,术后随访3～3.9年,85%的患者效果优良,2/3的患者日常活动无困难(术前低于10%),术前因腰痛不能工作的10例患者有8例恢复工作.     

腰椎内固定术后邻近节段退变的原因

目前多数学者认为腰椎内固定融合术后邻近节段退变(adjacent segment degeneration,ASD)与患者自身因素、融合方式、内固定物性质、融合节段、随访时间等多方面因素有关,笔者就有关文献综述如下。1患者自身易感因素许多学者认为内固定融合术后邻近节段退变的发生可能与患者年龄、性别、骨质疏松、术前腰椎状况、术后生活方式等多方面因素有关。Aota等[1]认为在诸多可能引起邻近节段不稳定的因素中,年龄最为重要,他发现年龄大于55岁的患者邻近节段退变率为36.7%,而小于55岁的患者退变率为12%。Chou等[2]认为老年人椎间盘中蛋白聚糖和水的含…     

经皮椎体后凸成形术治疗新鲜胸腰椎骨折的疗效分析

经皮椎体后凸成形术（Percutaneous Kyphoplasty，PKP）作为近年来出现的新技术，因具有微创、快速止痛、即刻稳定、早期功能锻炼等优点，已备受亲睐。2003年8月至2005年10月，笔者应用PKP治疗无明显神经症状的新鲜胸腰椎骨折25例29椎，取得了良好的效果。现报告如下。     

基于SVM的多Agent信息融合算法

支持向量机(SVM)是一种基于结构风险最小化原理、具有很高泛化性能的学习算法,为小样本、非线性、高维数一类信息融合问题的建模提供了一种有效的途径.本文将Mobile Agent运用到信息融合系统中,对信息融合系统中原有OODA模型进行改进,提出了一种基于SVM的Mobile Agent信息融合模型及算法.相关实验表明,本文中的训练算法可达到更为满意的分类效果,并且可以得到较高的分类精度.     

心肌营养素1/破伤风毒素重链C端片段融合蛋白的构建及其靶向大鼠嗜铬细胞瘤细胞的研究

目的：探讨心肌营养素1（cardiotrophin 1，CT1）/破伤风毒素重链C端片段（tentanus toxin C fragment,TTC）（CT1/TTC）融合蛋白的构建及其对大鼠嗜铬细胞瘤（pheochromocytoma,PC12）细胞的靶向性。方法：采用聚合酶链式反应（PCR）、T-A克隆等分子生物学方法构建CT1/TTC融合蛋白。体外培养PC12细胞,并将CT1/TTC融合蛋白与PC12细胞共培养,红色荧光免疫组化染色后在激光共聚焦显微镜下观察融合蛋白能否在TTC的靶向作用下进入PC12细胞。结果：成功构建了CT1/TTC融合蛋白,测序显示融合基因序列正确,免疫组化染色结果显示融合蛋白能够进入PC12细胞，并发出红色荧光。结论：采用PCR和T-A克隆等分子生物学方法能成功构建CT1/TTC融合蛋白．并且TTC能够将CT1靶向进入PC12细胞。     

第七届全国经椎弓根内固定学习班暨脊柱融合与新业务新技术学术研讨会

近十年来国内外脊柱内固定器械发展迅猛，内固定的应用领域也不断拓宽，取得了明显的疗效。但同时也出现了只重视内固定而忽视融合的问题，结果使部分疗效丧失，内固定失败率增高等问题也日渐突出。     

慢性粒细胞白血病骨髓细胞体外培养净化作用实验研究

目的 :采用 FISH方法直接在干细胞水平对慢性粒细胞白血病 (CML )患者自体骨髓体外培养前后的间期细胞进行 bcr/abl融合基因检测 ,从而探讨 CML 骨髓细胞体外培养对自体骨髓移植物的净化作用。方法 :分离初治的慢性期 Ph+ CML 7例骨髓单个核细胞 (MNCs) ,体外培养 10 d,用免疫磁珠 (MACS)富集培养前后的 CD34+ 细胞 ,通过流式细胞仪检测培养前后 MNCs中 CD34+ 干细胞比例 ,然后用 FISH方法检测其中 bcr/abl融合基因 ,同时分别用正常人细胞及 K5 6 2细胞株作阴性及阳性对照。结果 :(1) 7例患者骨髓细胞培养前后 CD34+ 细胞中 bcr/abl融合基因平均检出率分别为 85 .3%± 4 .9%和 78%± 5 .1% ,有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ,(2 )培养前培养体系中 CD34+ 细胞数量为 (6 .0 6 0± 1.5 6 4 )× 10 5个 ,培养后体系中的 CD34+细胞数量为 (5 .974± 1.4 2 4 )× 10 5个 ,两者无明显差异 (P>0 .0 5 )。 (3)在对照组中假阳性率为 2 .5 % ,假阴性率为 2 %。结论 :自体骨髓细胞体外培养对 CML 病人的骨髓肿瘤细胞有一定程度的净化作用 ;FISH技术直接在干细胞水平检测 bcr/abl融合基因 ,且能定量分析 ,较传统方法更适合对骨髓净化进行评价 ,为骨髓净化提供了一种更方便、可靠的评定方法     

人Heparanase基因真核和原核表达载体的构建及融合蛋白的表达

目的：构建人Heparanase基因的真核、原核表达载体，大肠杆菌表达其融合蛋白．方法：采用反转录．聚合酶链反应从人肝癌细胞株HepG2cDNA中，分别扩增出Heparanase编码基因，用限制性内切酶BamHI消化后，插入真核表达载体pcDNA3．1中，经酶切鉴定与测序证实后，连接成包括完整的人Heparanase基因ORF区的真核表达载体，以亚克隆法构建于原核表达载体pRSET的相应酶切位点，转化大肠杆菌BL21菌株，异丙基β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导产生融合蛋白．结果：构建的人Heparanase基因表达载体经序列测定证实，与GenBank登录结果完全一致；双酶切鉴定证实，克隆基因正确插入载体pcDNA3．1及pRSET；SDS-PAGE证实融合蛋白表达成功．结论：成功构建了人Heparanase基因真核、原核表达载体，成功正确表达了6His／Heparanase融合蛋白