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81.
谷氨酰胺∶6-磷酸-果糖酰基转移酶抑制剂细胞筛选模型的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
目的建立己糖胺途径的关键酶谷氨酰胺∶6-磷酸-果糖酰基转移酶(glutamine∶fructose-6-phosphate amidotransferase,GFAT)抑制剂的细胞筛选模型。方法用改进的GDH法测定GFAT的活性。以速效胰岛素依赖的葡萄糖摄取观察细胞对胰岛素的反应性;用长效胰岛素诱导HIRc细胞,形成己糖胺途径过度活跃和胰岛素抵抗的细胞模型,并应用该细胞模型和GDH法筛选GFAT抑制剂。结果用25 nmol·L-1长效胰岛素刺激HIRc细胞36 h,可明显激活己糖胺途径,使GFAT活性上升47%;同时产生胰岛素抵抗,使速效胰岛素依赖的葡萄糖摄取能力降低21%。Azaserine可明显抑制该模型中GFAT的活性。结论长效胰岛素既可过度激活HIRc细胞己糖胺途径,又可使其产生胰岛素抵抗。该模型可用于筛选GFAT抑制剂。 相似文献
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宫倩 《中国医药工业杂志》2005,36(10):624-624
响应表面法(RSM)已成功应用于酶法生物聚合儿茶酚,即在含有丙酮、醋酸钠缓冲液的闭合系统中用漆酶催化产生聚合儿茶酚。用于催化的漆酶来源于Trametes versicolor(ATCC 200801)。通过测定闭合系统中起始溶氧(DO)消耗速率,运用RSM对儿茶酚酶生物聚合速率进行优化。通过筛选实验找到对DO消耗速率影响最大的独立变量,分别为介质温度、pH和丙酮含量。 相似文献
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2004年第11届基于细胞测定的高通量药物筛选年会着重讨论了基于细胞筛选所取得的进展,并探讨了该技术相对于无细胞筛选的利弊。 相似文献
85.
一种非同位素5α-还原酶抑制剂体外筛选模型的建立和应用 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:建立一种非同位素5α-还原酶抑制剂体外筛选模型.方法:从大鼠前列腺组织中提取物5α-还原酶,与底物睾酮(T)以及供氢体NADPH共同组成了一种微量反应体系.反应产物二氢睾酮(DHT)用酶免技术(EIA)测定,以产物生成量确定酶活性;对反应底物、NADPH、酶浓度以及反应最佳温度和时间进行了优化.结果:当底物、NADPH、酶提取物浓度分别为0.25μM、1mM和0.3mg,37℃反应60分钟可获最大酶活性.特异性5α-还原酶抑制剂非那雄胺显著降低5α-还原酶催化产物DHT的生成.进一步对24种中药进行筛选,姜黄、夏枯草等中药提取物具有5α-还原酶抑制剂作用.结论:本文建立的非同位素方法有效、可行,可作为一种体外模型筛选和研究5α-还原酶抑制剂. 相似文献
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87.
国家新药筛选中心暨依托单位中国科学院上海药物研究所最近宣布,由8名国内外著名专家或企业家组成的国家新药筛选中心国际科技顾问委员会成立,其中的6位海外专家已于9月专程来华对国家新药筛选中心进行了现场考察和技术指导。 相似文献
88.
89.
90.
传统的细胞培养是在方瓶和多孔板中进行的 ,而这种器皿所提供的环境与体内环境相去甚远。方瓶和多孔板 ,仅可以维持温度 ,PH值与容氧水平 ,而瓶内培养液同外界没有任何联系 ,即这是一个封闭体系。实际上体内细胞却可以和胞外环境进行着物质交换 ,这种体内环境和培养环境的巨大差异是造成中药细胞作用研究中常出现伪结果的重要原因。〔2~ 4〕而且 ,传统的培养方式需要人不断地干预 ,既辛苦又不方便控制 ,使得在这一步消耗了太多的精力。因此 ,我们着眼于更接近细胞实际生长环境的细胞培养装置 ,提出了细胞生物反应器的设计思路 ,利用计算机… 相似文献