日本血吸虫成虫67kDa分子抗原的纯化及其对血吸虫病的诊断和疗效考核

目的 为检测日本血吸虫成虫67kDa分子抗原(SjAWA67)对血吸虫病的诊断及疗效考核价值。方法 通过SDS-PAGE和电渗方法,从日本血吸虫成虫抗原中分离纯化出67kDa分子抗原,并用该抗原包被酶标反应板微孔,进行ELISA检测。结果 SjAWA67的纯度已达到电泳纯和免疫纯,对急、慢性血吸虫病患血清的捡出率分别为100％和95％,与正常人血清、肝吸虫病和肺吸虫病患血清均未出现明显的交叉反应,44例血吸虫病患治疗后3、6和12个月后的阴转率分别达45．5％、75．0％和90,9％。结论 SjAWA67分子抗原具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。     

人重组钙依赖性磷脂结合蛋白V在大肠杆菌中的高效表达、纯化及细胞凋亡检测

目的：为细胞凋亡研究提供快速可靠的实验方法。方法：利用RT－PCR技术从人外周血单核细胞系U937 cDNA文库中扩增出编码钙依赖性磷脂结合蛋白V（Annexin V) cDNA,并克隆到大肠杆菌表达载体中,在大肠杆菌中表达含凝血酶识别序列的MS2 Annexin V融合蛋白。表达产物经凝血酶消化,可除去MS2细菌蛋白,再经离子交换层板纯化,可得成熟的Annexin V纯品,FITC标记后的Annexin V可用于细胞凋亡的检测。结果：在大肠杆菌表达的人重组Annexin V占菌体蛋白的56％,经纯化获得99％纯度的非融合型Annexin V,FITC标亡的Annexin V能有效地检测凋亡细胞。结论：成功地建立了批量获取Annexin V的技术路线,为推广高效检测凋亡技术提供了基础。     

溶栓素的纯化研究

目的 :研究溶栓素的纯化工艺。方法 :采用超滤法截留分离 ,强阴离子交换层析去除核酸 ,弱阴/阳离子交换层析和疏水层析组合法精细分离溶栓素。结果 :聚丙烯酰胺凝胶电泳考马斯亮蓝染色法结合显示最终纯化产物为一条染色带 ,纯化倍数为 144 .83,回收率为 38.6 6 %。结论 :溶栓素的纯化工艺基本体现了工业生产工艺的特点 ,具有一定的实用性。     

测定大共同蒽醌类成分样品制备方法的研究

大黄中含有多种化学成分 ,其中以蒽醌衍生物最能代表大黄的泻下、抑菌、止血等作用。此类成分测定方法 ,本文参考文献[1,2 ] ,对用氯仿回流提取游离型蒽醌和用硫酸水解蒽苷氯仿抽提的方法进行了研究。1　仪器和材料　　仪器 :Shimadzu LC- 1 0 A高效液相色谱仪。对照品 :芦荟大黄素 (aloe- emodin) ,大黄酸(rhein) ,大黄素 (emodin) ,大黄酚 (chrysophanol) ,大黄素甲醚 (physcion)购自中国药品生物制品检定所。　　试剂 :甲醇为色谱纯 ,水为重蒸水 ,其他试剂均为分析纯。样品 :本实验所用大黄药材样品由作者购自不同产地 ,经北京大学医学…     

梧桐花粉主要变反原的分离纯化

以离子交换和凝胶过滤层析对梧桐花粉变应原进行分离和纯化,采用生物素-链霉亲和素酶联免疫吸附分析法（BSA-ELISA）测定其抗原活性,得到两个具高活性的单一变应原组分PT13和PT53。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得它们的分子质量分别为20ku和18ku。     

尿液结合性胆红素的纯化

OBJECTIVES: To develop a simple, practical method with fine yield and purity for separating conjugated bilirubin(Bc) from a sustainable and facile material in order that it could serve as a calibrator for total and direct bilirubin determination. METHODS: Isolating Bc from urine of patients with obstructive jaundice by CHCl3: CH3CH2OH(1:1, V/V) followed by CNBr activated Sepharose 4B-HAS affinity chromatography, we analyzed the products by the use of Doumas J-G diazo method and HPLC, respectively. RESULTS: Determined by J-G diazo method, the crude product extracted by CHCl3: CH3CH2OH(1:1, V/V) yields 90.2 +/- 5.4%(n = 3) of urine Bc, the ratio of Bc to total dry weight being 67.9 +/- 6.4%(n = 3). The final product purified by affinity chromatography with the ratio of separation of 1.5, 1.737 and analyzed by HPLC has the yield of 46.9% and purity of 94.7%(BDG of 76.2%, BMG of 18.5%). CONCLUSION: The above data demonstrate that urine conjugated bilirubin can be successfully purified by CHCl3: CH3CH2OH extraction followed by Sephrose-HSA affinity chromatography with sufficient purity and output.     

重组血管生成抑制因子r—K4K5的分离纯化与功能鉴定

目的 分离纯化r-K4K5,探讨r-K4K5对牛毛血管内皮（BCE）细胞、鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）新生血管生成及实验性人肺腺癌SPC-A1生长的抑制作用。方法 通过盐析、凝胶过滤提纯r-K4K5,BCE细胞在含r-K4K5的DMEM中培养24、48、72h后分别计数;孵化7d的鸡胚加r-K4K5后继续孵育72h,观察新生血管生成;已经接种入SPC-A1肺腺癌组织的荷瘤裸小鼠（Balb/c,nu/nu）,瘤旁注射r-K4K5继续饲养,观察肿瘤生长变化。结果 r-K4K5抑制BCE细胞增殖,48～72h作用明显;r-K4K5处理的CAM组中直径小于50um的小血管明显减少;高剂量r-K4K5治疗的荷瘤裸小鼠组,平均瘤重与对照组比较有统计学意义。结论 r-K4K5能够抑制BCE细胞增殖,抑制鸡胚CAM新生血管生成,抑制实验性人SPC-A1肺腺瘤生长。     

人胎脑和SD大鼠脑中β-NGF的提取

目的研究拟获得快速高效的β-NFG(β-神经生长因子)纯化方法,并为其生物特性研究和临床应用奠定基础.方法通过低温高速离子、离子交换层析、透析等过程,从人胎脑和SD大鼠脑中分离纯化β-NGF,用SD S-PAGE分析其分子量和纯度,并经PC12细胞突起生长试验鉴定其生物学活性.结果从人胎脑和SD大鼠脑中分离纯化得到的β-NGF提取物在SDS-PAGE图上均呈单一条带,它们都能很好地促进PC12细胞长出突起,且人胎脑β-NGF提取物促进PC12细胞长出突起的能力和人重组β-NGF差别无显著性.结论实验获得了纯度高且生物活性良好的β-NGF.在分离纯化的其他参数不变时,分离纯化过程的总时间和温度对β-NGF的得率和生物学活性有明显影响.     

黄芪多糖提取工艺、化学结构及药理作用的研究进展

黄芪多糖（Astragalus polysaccharides,APS）是黄芪的重要活性成分之一,随着黄芪在临床上的使用越来越广泛,学者对APS的提取工艺、化学结构及药理作用的研究也愈来愈深入。不同的提取工艺对APS的含量和纯度均会产生不同程度的影响,进而对其药理作用的发挥也会有所影响。APS具有调节免疫、抗肿瘤、降血糖、抗衰老和抗炎等药理作用。在全面查阅并梳理文献资料的基础上,对APS的提取工艺、化学结构及药理作用进行综述,并对APS的研究前景进行展望,以期对APS的进一步开发利用和研究提供有效的理论支持。