超声波提取技术对番泻叶总番泻甙提出率的影响

番泻叶为常用中药,具有通便、利水、泻下等作用。其主要有效成分为番泻甙A和B,其它尚有大黄酚、芦荟大黄素等。传统常用水煎煮、沸水浸泡、醇回馏等提取方法来获得番泻叶有效成分,但这些方法均存在浸出率低、浸提液体积大、浓缩困难等问题。近年来国内外将超声技术应用于化学合成及化学成分提取中,收到了很好的效果。本研究将超声技术应用于番泻叶有效成分的提取,并与传统方法作比较。1仪器及材料7530-G紫外/可见分光光度计(上海分析仪器厂);超声波发生仪(天津Autoscience公司);番泻叶(购自甘肃省药材公司,由省人民医院主管中药师吴彦杰鉴…     

人Tnfrsfl 1b-N端多狀的原核表达、纯化及其初步分析

目的 对原核表达和可溶性纯化后的Tnfrsf11b蛋白氨基端的24～106位肽段进行二级结构分析.方法 根据已经发表的人Tnfrsf11b氨基酸序列,利用BLAST程序进行同源性分析,确定所要构建的Tnfrsf11b N 端CRD功能结构域;将目的 基因片段克隆入表达载体 pGEX-6P-1并转化大肠杆菌BL21(DE3),于16.C、0.1 mmol/L IPTG 诱导25～30 h可获得可溶性融合蛋白,经过Glutathione SepharoseTM4 B 亲和层析纯化和 PreScission Protease 酶切,洗脱的蛋白样品经过Superdex75凝胶预装柱进一步纯化,最终获得可溶性、高纯度的蛋白;对目标蛋白进行圆二色谱分析.结果 获得重组质粒pCEX-6P-1-tnfrsf11b并在大肠杆菌中可溶性表达,经亲和层析、酶切、分子筛层析后获得了可溶的、高纯度的Tnfrsf11bN 端功能结构域蛋白并对其进行了圆二色谱分析,发现目标蛋白富含β-sheet.结论 高含量的β-sheet 更有利于蛋白质参与与相互作用,这对其功能的发挥有着重要意义;对此进行研究可以更好的理解这种相互作用,并为进一步研究Tnfrsf11bN端的结构和功能奠定了基础.     

大鼠肝脏Kupffer细胞的分离、纯化

目的建立简单、有效而稳定的大鼠肝脏Kupffer细胞分离、纯化的实验方法。方法①大鼠肝脏的胶原酶离体灌注；②Percoll液不连续梯度离心分离Kupffer细胞；③选择性贴壁纯化Kupffer细胞；④吞噬墨汁实验、DAB染色，光镜、电镜下观察鉴定Kupffer细胞。结果最终获得的大鼠肝脏Kupffer细胞活性〉90％，纯度为95％，光镜下Kupffer细胞具有较强的贴壁及吞噬碳粒能力，DAB染色呈黄色煎蛋样结构；新分离的Kupffer细胞呈圆形，形态大小一致；2d后，细胞发生伸展，呈多角形或星形。电镜下观察可见典型特点：有伪足及杯口状改变，有丰富的溶酶体和吞噬体。结论本实验建立的大鼠肝脏Kupffer细胞的分离培养方法效果稳定，同时培养的细胞具有良好的生物学性状。     

中草药桃仁纤溶酶的亲和层析分离

目的 分离出高效、特异、安全、不良反应较小的纤溶酶，为溶栓药物的研究奠定基础。方法 利用硫铵沉淀法提取出桃仁纤溶酶，测定其比活力，并比较不同蛋白酶抑制剂对桃仁纤溶酶活性的抑制作用，采用亲和层析法对桃仁纤溶酶进行分离纯化。结果 亲和层析法分离得到了纤溶酶活性单一组分，比活力为89.08 U·mg^-1，比纯化前提高了7.37倍，该组分属于丝氨酸蛋白酶家族。结论 利用大豆胰蛋白酶抑制剂作为配基，采用亲和层析法分离桃仁纤溶酶可以得到单一活性成分，且比活力相对提高。     

芪丹煎剂有效成分提取方法优选研究

目的:研究芪丹煎剂有效成分超声法提取的最适条件.方法:利用正交试验设计,对水量、提取时间和提取次数进行分析,找出最适条件.按最适条件重复3次,考察重复性.结果:水量为14倍、提取时间为30min,提取次数为3次时有效成分的总含量最大,3次平行试验有效成分总含量RSD为0.86%.结论:超声法提取的最佳条件为:水量14倍、提取时间30min,提取次数3次.本方法重复性较好.     

骨髓基质细胞条件培养液中神经活性物质的提取与纯化

目的分离纯化骨髓基质细胞(bone marrow strolnal cells，BMSCs)条件培养液以获得某些神经活性物质。方法分离培养小鼠骨髓基质细胞并收集其培养液，超滤浓缩后采用Sephadex G-100层析，高效液相色谱分析(HPLC)和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳(SDS-PAGE)等技术分离其培养液中的蛋白组分并利用细胞培养技术验证其神经活性作用。结果骨髓基质细胞培养液经Sephadex G-100层析及HPLC分析，证实Ⅲ峰中的A峰和B峰对神经细胞生长有明显的促进作用，其相对分子质量分别为18000和14000。结论骨髓基质细胞条件培养液中相对分子质量为18000和14000两组分对神经元有营养活性。     

白芍有效成分的提取和分离

本文报道白芍的主要有效成分的提取和分离方法。通过紫外、红外、核磁共振对提取的单体进行结构鉴定。     

人尿集落刺激因子的分离及其特性研究

本实验采用Ｋ－９型高岭土吸附、ＣＭ－５２柱层析及ＤＥ－３２柱层析技术，对正常人尿集落刺激因子进行分离、纯化。结果表明：（１）用人尿提取ＣＳＦ，取材简便，来源丰富，制备容易，是天然ＣＳＦ的可靠来源；（２）人尿ＳＣＦ有两种不同的蛋白，它们确能刺激小鼠骨髓细胞形成ＣＦＵ－ＧＭ；（３）经典的集落培养法测定其活性更方便可靠。     

液膜法提取硝酸水溶液中Ag~+的工艺过程

液膜的组成为:2%石油硫醚-4%多丁二酰亚胺-94%煤油,内相试剂为:1～2mol/L的氨水溶液。较为适宜的操作条件为:乳水比为1:3;内油比为0.8:1;外相硝酸浓度为0.5～1mol/L;常温操作。当料液中的银离子浓度小于800ppm时,一次提取率可达97%以上。本工艺具有分离速度快,效率高、选择性好等优点。