靶向CD40的shRNA干扰抗大鼠异体肢体移植急性排斥反应的实验研究

目的 探讨靶向CD40的RNA干扰对大鼠异体肢体移植急性排斥反应的影响. 方法以纯系SD大鼠为供体,纯系Wistar大鼠为受体,行同种异体右后肢移植.27只大鼠肢体移植后随机分为三组,A组:注射入梭华.Sofast.siCD40-2/pSilencer载体复合物600 μL;B组:注射Sofast-pSilencer4.1-CMV neo空载体复合物600 μL;C组:注射生理盐水600μL,以上均通过阴茎背静脉注射.观察移植物排斥反应征象及存活情况,并于第7天对产生免疫耐受大鼠进行混合淋巴细胞反应,同时进行组织学检查. 结果与B、C组相比,A组移植物发生排斥反应的时间及存活时间均显著延长,差异有统计学意义(P＜0.01)(＞13 d),未见排斥反应征象;B、C组均于术后近期发牛排斥反应.A组大鼠对供体的淋巴细胞呈现低反应性,移植的供体同系大鼠的肢体得以存活. 结论术后不应用免疫抑制剂的情况下,靶向CD40的shRNA干扰可以抗大鼠异体肢体移植急性排斥反应.     

核因子κB诱骗剂处理的树突状细胞延长小鼠移植心脏存活时间

目的探讨核因子κB（NF-κB）诱骗剂处理供者树突状细胞（DC）对同种异体小鼠移植心脏存活时间的影响。方法在体外以NF-κB诱骗剂处理供者骨髓来源的DC，并于心脏移植术前7d经门静脉输注2×10^6个DC给受者，术后1～7d受者接受亚治疗量的环孢素A（10mg·kg^-1·d^-1）腹腔注射（联合方案组），并设不作任何处理（对照组）、单用环孢素A（CsA组）、单纯输注未经处理DC（DC对照组）和单纯输注经处理DC（DC实验组）的对照组，另设接受来自第三方供者的对照组（第三供者组，受者的处理同联合方案组），所有受者均接受腹腔心脏移植。观察各组移植心脏的存活时间；采用酶联免疫吸附法检测术后第7天受者血清白细胞介素2（IL-2）、IL-4、IL-10和γ干扰素（IFN-γ）的含量。结果移植心脏平均存活时间（MST），对照组为7d，CsA组为10．3d，DC对照组为7．6d，DC实验组为21．4d，联合方案组为53．6d，第三供者组为9d，DC实验组移植心脏MST明显长于对照组和DC对照组，差异有统计学意义（P〈0．01）；联合方案组移植心脏MST明显长于CsA组、DC实验组及第三供者组，差异有统计学意义（P〈0．01）。联合方案组IL-2和IFN-γ的含量最低，而IL-4和IL-10的含量最高，与其它各组比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）；与对照组、DC对照组及CsA组相比，DC实验组IL-2及IFN-γ的含量也显著降低（P〈0．05），而IL-4和IL-10则升高（P〈0．05）。结论术前输注经NF-κB诱骗剂处理的供者DC可延长同种小鼠移植心脏的存活时间，若术后加用短程亚治疗量CsA，则移植心脏的存活时间得到进一步延长。     

肾上腺肿瘤蛋白酪氨酸磷酸酶基因和基质金属蛋白酶2蛋白表达及其临床意义

目的 探讨蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白表达在肾上腺肿瘤临床诊断及预后评估中的价值.方法 采用免疫组织化学法对116例肾上腺肿瘤标本进行PTEN和MMP-2蛋白检测,结合临床资料进行统计学分析.结果 PTEN和MMP-2蛋白之间的表达呈负相关(r=-0.4613,P＜0.05).PTEN和MMP-2蛋白表达与肾上腺肿瘤患者年龄、性别、肿瘤部位等无明显相关(P＞0.05).按"-"、"+"、"++"、"+++"、"++++"划分,肾上腺皮质腺瘤和腺癌PTEN表达分别为0、0、6、15、18例和4、6、10、2、0例,前者明显高于后者(P＜0.05);良、恶性嗜铬细胞瘤PTEN表达分别为0、3、8、14、10例和4、8、6、2、0例,前者明显高于后者(P＜0.05).肾上腺皮质腺瘤和腺癌MMP-2表达分别为12、13、14、0、0例和0、3、9、6、4例,后者明显高于前者(P＜0.05);良、恶性嗜铬细胞瘤MMP-2表达分别为13、14、7、1、0例和0、1、8、8、3例,后者明显高于前者(P＜0.05).PTEN和MMP-2表达与肾上腺皮质腺癌、恶性嗜铬细胞瘤的预后均相关(P＜0.05),PTEN表达越低预后越差,相反,MMP-2表达越强预后越差.结论 联合检测PTEN和MMP-2蛋白在肾上腺肿瘤中的表达,有助于临床提高对肾上腺肿瘤恶性程度的判断及预后评估.     

七氟醚和缺氧预适应对乳鼠心肌细胞生存和凋亡的影响

目的 探讨七氟醚预处理和缺氧预处理诱导乳鼠心肌细胞产生预适应的差异。方法 第2代心肌细胞随机分为正常对照组（C组）、缺氧／复氧组（A／R组）、缺氧预适应组（IP组）和七氟醚组（S组），每组均缺氧2h，复氧48h。取复氧1h心肌细胞用电镜观察细胞超微结构变化；分别取复氧0、1、2、24、36和48h的细胞用MTT法测定细胞生存情况、流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果 （1）S组和IP组细胞超微改变不明显，未见凋亡细胞；A／R组改变明显，可见凋亡细胞；（2）在各个时点，S组和IP组的细胞生存能力显著低于C组（P＜0．05），显著高于A／R组（P＜0．01），S组和IP组间无显著性差异（P＞0．05）；随着复氧时间的延长，S组和IP组的细胞生存能力有上升的趋势；（3）在各个时点，S组和IP组的细胞凋亡率显著高于C组（P＜0．01），显著低于A／R组（P＜0．01）；S组和IP组间的细胞凋亡率只是在复氧0h和1h处有显著性差异；随着复氧时间的延长，S组和IP组的细胞凋亡率有下降的趋势，A/R组的则逐渐升高；（4）S组和IP 中的细胞生存力和凋亡之间存在着负相关关系。结论 七氟醚预适应和缺氧预适应对缺氧／复氧损伤细胞可产生早期和延迟保护作用，且两者之间的作用相似，提示在体外实验中七氟醚预适应可取代缺氧预适应。     

异丙酚对布比卡因诱导的PC12细胞毒性的作用

目的 探讨异丙酚对布比卡因诱导的PC12细胞毒性的作用及其可能机制。方法PCI2细胞接种于96孔培养板中培养，随机分为4组：对照组、布比卡因组、异丙酚组和布比卡因＋异丙酚组，分别加入Hanks液、布比卡因（终浓度为0．03、0．06、0．09、0．12、0．15mmol／L）、异丙酚（终浓度为1、2,4、8mmol／L）以及同时加入布比卡因（终浓度为0．09mmol／L）和异丙酚（终浓度为1、2,4、8mmol／L）。培养24h时，采用二甲基噻唑二甲基四唑溴盐比色微量分析法测定各孔的细胞活力和上清液乳酸脱氢酶（LDH）的活性，应用流式细胞仪检测硫氧还蛋白-1（Trx-1）和硫氧还蛋白还原酶-1（TrxR-1）表达率。结果 与对照组比较，布比卡因组PC12细胞活力降低（P〈0．01），且呈浓度依赖性；异丙酚组PC12细胞活力差异无统计学意义（P〉0．05）。与布比卡因组的0．09mmol／L亚组比较，布比卡因＋异丙酚组的2—8mmol／L亚组PC12细胞活力增加（P〈0．05）。与对照组比较，布比卡因组和布比卡因＋异丙酚组LDH活性升高，Trx-1和TrxR-1表达率降低（P〈0．01）；与布比卡因组比较，异丙酚组和布比卡因＋异丙酚组LDH活性降低，Trx-1和TrxR-1表达率升高（P〈0．01）。结论 布比卡因对PC12细胞具有浓度依赖性的细胞毒性作用。异丙酚可通过保护内源性硫氧还蛋白系统减轻布比卡因诱导的PCI2细胞的毒性。     

胰腺移植后的慢性排斥反应

由于外科技术的不断提高和新型免疫抑制剂的应用，胰腺移植的短期效果显著提高，移植胰腺的1年存活率在80％左右。随着移植物存活时间的延长，慢性排斥反应将成为移植物功能丧失的一个重要原因。据2004年美国器官共享网络（UNOS）与国际胰腺移植登记处（IPTR）的统计，术后1年导致移植胰腺功能丧失的原因，     

ICOS-Ig 融合蛋白联合亚剂量环孢素A诱导小鼠移植心脏长期存活

目的 探讨可诱导共刺激分子-Ig融合蛋白(ICOS-Ig)联合亚剂量环孢素A(CsA)对小鼠移植心脏存活时间的影响及其机制.方法 自行构建ICOS-Ig.以Balb/c小鼠为供者,C57BL/6小鼠为受者,套管法制备小鼠颈部心脏移植模型,然后将模型分为5组:(1)未处理组,不做任何处理;(2)对照IgG组,移植当天以及术后第2、4、6天腹腔注射IgG 250 μg;(3)IcoS-Ig组,移植当天以及术后第2、4、6天腹腔注ICOSIg250 μg;(4)CsA组,移植当天以及术后第1～7天腹腔注射CsA 10mg/kg;(5)ICOS-Ig+CsA组,同时给予ICOS-Ig和CsA,使用时间和剂量同前.术后观察移植心脏存活时间,观察移植后第7天移植心脏的病理变化,并进行供、受者混合淋巴细胞反应(MLR),测定受者血清中供者特异性的同种抗体水平.结果 各组小鼠移植心脏存活时间分别为:未处理组(8.5±1.5)d,对照IgG(8.00.8)d,ICOSIg(29.57.7)d.CsA处理组(21.0±5.0)d,ICOS-Ig+CsA组移植心脏存活时间均超过50d,6只(6/9)移植心脏存活时间>100d,ICOS-Ig+CsA组与其他4组比较,差异均有统计学意义(P<0.01).移植后7d,未处理组及对照IgG组心肌明显变性,纤维断裂,间质水肿,肌束间及血管周围有大量炎症细胞浸润,而ICOS-Ig组和CsA组心肌无明显变性,间质略水肿,血管周围有少量淋巴细胞浸润,ICOS-Ig+CsA组的病理改变明显I(X)S-Ig组和CsA组.移植后7d,ICOS-Ig组和CsA组的脾脏淋巴细胞对同种抗原刺激反应比未处理组和对照IgG组明显降低(P<0.05),而ICOS-Ig+CsA组的抑制作用明显强于ICOS-Ig组和CsA组(P<0.05).移植后7d,ICOS-Ig组和CsA组受者血清中针对特异性供者的抗体水平明显低于未处理组和对照IgG组(P<0.05),ICOS-Ig+CsA组的抗体水平明显低于ICOS-Ig组和CsA组(P<0.05).结论 ICOS-Ig可以降低受者对供免疫反应性,延长移植心脏的存活时间,联合亚剂量CsA可使异体移植心脏长期存活.     

存活10年以上并长期服用环孢素A的肾移植受者的临床研究

目的 研究肾移植后1年时血环孢素A(CsA)浓度对存活超过10年的肾移植受者的影响.方法 以肾移植后存活10年以上、移植肾有功能、长期服用CsA并规律随访的380例肾移植受者为对象,380例肾移植后均采用以CsA为主的免疫抑制方案.根据肾移植术后1年时血CsA浓度将受者分为5组:组1的血CsA浓度＞0.208μmol/L(1μmol/L=1201.9 μg/L);组2的血CsA浓度为0.166～0.208μmol/L;组3的血CsA浓度为0.125～0.166μmol/L;组4的血CsA浓度为0.083～0.125 μmol/L;组5的血CsA浓度＜0.083 μmol/L.分析各组术后1年、5年和10年时的收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、血肌酐(SCr)、尿酸(UA)、胆固醇(CH)、三酰甘油、丙氨酸转氨酶、直接胆红素(DBil)和胆红素总量(TBil)、白蛋白(Alb)、Hb、WBC和有无蛋白尿.结果 术后5年时,组1和组2的SBP明显高于组3、组4和组5(P＜0.05);组5的UA明显低于其他4组(P＜0.05),而Alb明显高于其他4组(P＜0.05);组4和组5的尿蛋白阳性率明显低于其他3组.术后10年时,除个别组的SBP、DBP、DBil、TBil和CH外,各组间其他指标的差异均无统计学意义(P＞0.05).无论是术后5年还是10年,各组间SCr的差异均无统计学意义.结论 肾移植后1年时血CsA浓度对移植肾的远期(10年)功能影响不大,但血CsA浓度较高者(＞0.166μmol/L),肾移植后5年、10年时高血压发生率、高尿酸发生率和尿蛋白阳性率较高.     

SPECT/CT显像在评估缺血性心肌病患者的存活心肌中的应用价值

目的 以2-氟-18-氟-2-脱氧-D-葡萄糖(¹⁸F-fluorodeoxyglucose,¹⁸F-FDG)PET/CT心肌代谢显像为金标准,探讨锝-99m-4,9-二氮-3,3,10,10-四甲基十二烷-2,11-二酮肟(technetium-99m labeled 4,9-diaza-3,3,10,10-tetramethyldodecan-2,11-dione dioxime,^99mTc-HL91)SPECT/CT乏氧显像结合锝-99m-甲氧基异丁基异腈(technetium-99m labeled sestamibi,^99mTc-MIBI)SPECT/CT心肌灌注显像评估缺血性心肌病(ischemic cardiomyopathy,ICM)患者不同缺血程度及不同冠状动脉供血区存活心肌的价值。方法 纳入66例ICM患者,于^99mTc-MIBI心肌灌注显像当日行^99mTc-HL91乏氧显像、次日行¹⁸F-FDG心肌代谢显像。将左...