IL-12在牙龈卟啉单胞菌脂多糖促泡沫细胞形成过程中的作用

目的观察白细胞介素-12（IL-12）预刺激在牙龈卟啉单胞菌脂多糖（P．gingivalis LPS）促泡沫细胞形成过程中对细胞因子的影响。方法用氧化低密度脂蛋白（oxLDL）将人THP-1单核细胞来源的巨噬细胞诱导48h形成泡沫细胞。在巨噬细胞和泡沫细胞培养液中分别加入IL-12作用2h后,巨噬细胞培养液中加入oxLDL和P．gingivalisLPS,泡沫细胞培养液中加入P．gingivalis LPS。使用ELISA法检测培养液上清中IL-1β和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平,实时定量PCR检测细胞内IL-1β、IL-10、IL-12和IL-18mRNA的转录水平。结果在泡沫细胞形成过程中,IL-12预刺激可以降低培养液上清内TNF-α水平。降低细胞内IL-10和IL-12mRNA转录水平;泡沫细胞受P．gingivalisLPS刺激过程中,IL-12预刺激可以增加培养液上清IL—1β水平。减少细胞内IL-18mRNA的转录水平,增加IL-10mRNA的转录水平。结论IL-12预刺激影响P．gingivalisLPS促泡沫细胞形成过程中炎症细胞因子的转录和分泌。     

肉苁蓉多糖的纯化及其对T细胞功能调节的研究

研究肉苁蓉主要成分之—─—多糖对小鼠胸腺T细胞的功能调节。方法：采用沉淀法获肉苁蓉粗多糖，以DEAE－SephadexA－50和SephacrylS－200柱层析，获得肉苁蓉多糖（CDPS）。再采用噻唑蓝比色法（MTT）观察CDPS对小鼠脾、胸腺淋巴细胞增殖反应的影响及对正常小鼠脾淋巴细胞分泌IL－2的影响。结果：CDPS纯化后经SephacrylS－200鉴定为单一对称峰。CDPS体外实验，在12．5～200μg／ml浓度范围内，有单独和协同ConA、PHA促进小鼠胸腺淋巴细胞增殖的作用（P＜0．01）。CDPS在100μg／ml浓度时，能显著提高小鼠脾淋巴细胞分泌IL－2的能力．其IL－2活性明显高于对照组（P＜0．01）。结论：肉苁蓉多糖能增加小鼠脾、胸腺淋巴细胞的增殖反应，且与ConA、PHA有协同刺激小鼠胸腺淋巴细胞增殖的作用；并能显著提高小鼠脾脏T淋巴细胞分泌IL－2。     

高温与细菌脂多糖复合应激大鼠动脉血气的变化特点

目的监测高温与细菌脂多糖复合应激大鼠生命体征与动脉血气等指标的动态变化特点。方法雄性SPF级Wistar大鼠随机分为:常温生理盐水组(C组)、高温生理盐水组(H组)、常温细菌脂多糖组(L组)、高温细菌脂多糖组(HL组)。持续监测动物肛温(Tr)、心率(HR)、平均动脉压(MAP)以及动脉血气的动态变化。结果(1)HL组Tr上升到43.04℃±0.11℃,HR加快到(660±42)次min,MAP下降到(49.0±3.5)mmHg。HL组Tr、HR、MAP与L组[分别为35.00℃±0.21℃、(408±27)次min、(97.2±2.3)mmHg]的差异有统计学意义(P<0.01),HL组HR、MAP与H组[分别为(576±33)次min、(67.2±4.8)mmHg]的差异亦有统计学意义(P<0.01)。(2)HL组PaO2、HCO-3、PaCO2于致伤40min时即出现明显下降,致伤120min时分别为(11.59±1.11)kPa、(10.42±1.06)mmolL、(2.82±0.81)kPa。结论高温与细菌内毒素复合应激能够促发与加重生命体征、动脉血气的改变以及全身炎症反应综合征。     

汉防己甲素对脂多糖刺激的大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的观察汉防己甲素对脂多糖刺激的大鼠肝星状细胞(HSC)增殖及瘦素表达的影响,并观察Ⅰ型胶原表达的变化。研究汉防己甲素抗肝纤维化过程中的作用和机制。方法用脂多糖刺激大鼠肝星状细胞后,加汉防己甲素分组培养。采用MTT法测定细胞增殖,ELISA法检测其上清液瘦素和Ⅰ型胶原水平。结果脂多糖可刺激HSC增殖,汉防己甲素抑制脂多糖刺激的HSC增殖,并抑制瘦素和Ⅰ型胶原的表达。结论汉防己甲素可能通过抑制HSC增殖和抑制瘦素的分泌发挥抗纤维化作用。     

LPS/TLR4信号通路在肝胆管结石病中的作用及机制研究进展

肝胆管结石病属于肝胆疾病中常见疾病之一。已证实胆道感染、胆汁淤积、上皮间质转化是该疾病发生发展的重要因素,近年来有研究发现LPS/TLR4通路介导的炎症在这些因素的致病过程中起重要作用。笔者对LPS/TLR4信号通路在肝胆管结石病中的潜在作用及相关机制进行综述,旨在为肝胆管结石病发病机制及防治的研究提供新的思路。     

异丙酚对内毒素诱导人脐静脉内皮细胞过氧亚硝基阴离子生成的影响

目的 探讨异丙酚对内毒素诱导人脐静脉内皮细胞过氧亚硝基阴离子(ONOO-)生成的影响.方法 培养至活细胞计数大于95%的人脐静脉内皮细胞,随机分为7组(n=5),对照组(C组)不给予任何处理;LOS0.1组、LPS1组和LPS10组分别加入内毒素(LPS)至终浓度为0.1、1和10 μg/ml,于37℃5%CO2培养箱中孵育6 h;P4+LPS10组和P40+LPS10组预先加入异丙酚至终浓度为4、40μg/ml,I40+LPS10组预先加入脂质溶剂Introlipid至终浓度为40 μg/ml,于37℃ 5%CO2培养箱中孵育30 min,再分别加入LPS至终浓度为10μg/ml,于培养箱中继续孵育6 h.孵育6 h时,测定细胞活力和乳酸脱氢酶(LDH)释放率;采用免疫组化法和Western blot法测定硝基酪氨酸蛋白(NT)表达.结果 与C组比较,其余各组细胞活力降低,内皮细胞NT表达上调,LPS1组、LPS10组、I40+LPS10组、P4+LPS10组和P40+LPS10组LDH释放率升高(P<0.01);与LPS0.1组比较,LPS1组细胞活力、LDH释放率和内皮细胞NT表达差异无统计学意义(P>0.05),LPS10组细胞活力降低,LDH释放率升高,内皮细胞NT表达上调(P<0.01);与LPS10组比较,I40+LPS10组细胞活力、LDH释放率和内皮细胞NT表达差异无统计学意义(P>0.05),P4+LPS10组和P40+LPS10组细胞活力升高,LDH释放率降低,内皮细胞NT表达下调(P<0.01).结论 异丙酚可通过抑制ONOO'-的生成,减轻内毒素诱导人脐静脉内皮细胞损伤.     

Cholecystokinin octapeptide inhibits the in vitro expression of CD14 in rat pulmonary interstitial macrophages induced by lipopolysaccharide

Obejective To study the effect of cholecystokinin octapeptide (CCK-8) on lipopolysaccharide (LPS)-stimulated pulmonary interstitial macrophages （PIM） in vitroMethods PIM were isolated and cultured in the presence or absence of LPS, CCK-8, proglumide (the antagonist of CCK receptors) and vehicle. The expression of membrane CD14 (mCD14) protein was assayed by flow cytometry and soluble CD14 (sCD14) in the supernatant was analyzed semi-quantitatively by Western blot. TNF-α in the supernatant was detected with ELISA.Results CCK-8, at concentrations of 10［-7］ mol/L and 10［-6］ mol/L, significantly inhibited the expression of mCD14. Release of sCD14 and TNF-α in the supernatant was up-regulated by LPS (1μg/ml) but reduced by CCK-8. The effect of CCK-8 was inhibited by proglumide.Conclusion CCK-8 negatively modulated several functions of LPS-stimulated PIM through CCK receptors. This may be one of the mechanisms for CCK-8 to alleviate inflammation in lung tissue during endotoxemia.     

原癌基因Pim-3对烧伤及内毒素引起的肠黏膜损伤保护作用的实验研究

目的研究Pim-3基因在烧伤及内毒素引起的肠黏膜损伤中的保护作用。方法体内实验在成年Wistar大鼠中进行,分为A组（烧伤组）,B组（脂多糖组）,C组（正常对照组）。各组依次在处理后3、6、12、24、48h取小肠,提取总RNA及蛋白质,并进行逆转录（RT）．PCR及Western印迹分别检测内源性Pim-3、细胞间黏附分子（ICAM-1）、紧密连接蛋白闭锁蛋白（oecludin）在肠道的表达。观察烧伤和内毒素对内源性Pim-3基因在肠道表达的影响及Pim-3基因与肠黏膜损伤的相关性。体外实验部分,首先原代肠上皮细胞分离培养,再重组质粒pEGFP—N2／Pim-3转染和内毒素处理原代肠上皮细胞。实验分为6组：①正常对照＋内毒素处理组（5μg／ml）;②空载质粒pEGFP—N：转染＋内毒素处理组（5μg／ml）;③重组质粒pEGFP-N2／Pim-3转染＋内毒素处理组（5μg／ml）;④正常对照组;⑤空载质粒pEGFP-N2转染组;⑥重组质粒pEGFP-N2／Pim-3转染组;内毒素处理6h后,提取各组总RNA,利用逆转录（RT）．PCR检测各指标,并利用流式细胞仪观察各组细胞凋亡情况。结果（1）体内实验部分：A、B组内源性Pim-3基因在3h表达开始增多,分别为C组的（12．25±1．01）和（15．08±1．07）倍,6h到达顶点,分别为C组的（21．13±1．78）和（25．24±1．80）倍,以后逐渐减少。A、B组ICAM．1在6h后一直处于高表达的位置,12h达高峰,分别为C组的（88±7）和（58±5）倍,差异有统计学意义（P〈0．05）。A、B组闭锁蛋白在3h表达开始增多,6h达顶点,分别为C组的（6．65±0．24）和（6．25±0．26）倍,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。（2）体外实验部分：⑥组的Pim-3及闭锁蛋白的表达与④⑤组之间的差异均有统计学意义（均P〈0．05）,而④⑤⑥组之间ICAM-1表达及细胞凋亡差异无统计学意义。③组Pim-3、闭锁蛋白和ICAM-1的表达及细胞凋亡与①②组之间的差异有统计学意义（P〈0．05）。另外,①②③组的ICAM—1表达与④⑤⑥组之间的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论原癌基因Pim-3不但能抑制肠上皮细胞凋亡,而且还能够增强闭锁蛋白的表达,抑制脂多糖引起的肠道局部炎症反应,从而达到保护肠道机械屏障的作用。     

灵芝多糖的提取纯化及GLP-2抗血液凝固和抗血栓形成作用

目的 从人工培养的灵芝菌丝体中分离灵芝多糖精制品，作抗血液凝固和抗血栓形成的药理学研究。方法 人工培养的灵芝菌丝体经沸水提取、三氯醋酸－正丁醇去蛋白、乙醇沉淀得到的灵芝多糖粗品用DEAE－52柱层析分离纯化。将得到的多糖成分作抗血液凝固实验，并对抗凝多糖成分作抗血栓形成的实验。结果 从灵芝菌丝体水提液中得到4个含有多糖的成分（GLP1－GLP4）。小鼠静脉注射（iv)GLP2 20,30,40mg/kg，能显著延长血液凝固时间和出血时间。家兔iv GLP2 5,8mg/kg，能显著对抗血栓形成，减少血栓湿重，缩短血栓长度；降低血小板的聚集率，但对血小板数无影响；延长部分凝血活酶时间；大剂量组还有降低纤维蛋白原含量，缩短凝血酶和凝血活酶时间的作用。结论 GLP2具有抗血液凝固和抗血栓形成的作用，初步认为是通过抑制血小板聚集和减弱部分凝血酶活性起作用。     

卵巢克鲁根勃瘤18例临床和病理分析

18例卵巢克鲁根勃瘤临床症状、体征与病理形态的分析表明:此种肿瘤绝大多数以腹部或盆腔症状和体征为主,而忽视了该肿瘤的原发病灶及其临床症状,常被误诊为卵巢或子宫的原发性肿瘤。病理分型以典型型(13例)和小管型(3例)较多见,硬化型(1例)和混合型(1例)较少见。18例 PAS/AS 染色均为阳性,证明肿瘤细胞能分泌中性或酸性粘多糖类物质,且与胃肠道粘液细胞分泌物质类似,因此认为是一种转移性肿瘤。从临床观家看来,典型型和混合型共14例均在半年内死亡.预后差,小管型和硬化型4例在1.5～2年内死亡,预后较好。